程華春，王皓南，2，劉義梅，劉大會(huì)，杜鴻志，3**，肖 凌

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 武漢 430065；2.湖北省藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中藥質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 武漢 430075；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 北京 100700）

四葉參為桔?？浦参镅蛉镃odonopsis lanceolata(Sieb.et Zucc.) Trautv.的干燥根，氣微、味甜、微苦[1],具有補(bǔ)虛通乳、養(yǎng)陰潤(rùn)肺、排膿解毒等功效[2]。四葉參有山海螺、羊乳、奶參、輪葉黨參等諸多別名，最早以羊乳之名記載于陶弘景的《名醫(yī)別錄》中[3],其云：“味甘，溫，無(wú)毒。主治頭眩痛，益氣，長(zhǎng)肌肉。一名地黃。三月采，立夏后母死。”四葉參是一種藥食兩用的中藥，具有豐富的藥效成分，在中國(guó)、韓國(guó)、朝鮮作為山野菜廣為食用，其還有“泰山四大名藥”之稱(chēng)?，F(xiàn)代研究表明，四葉參含有三萜類(lèi)、甾醇類(lèi)、苯丙素類(lèi)等多種化學(xué)成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用，臨床上被用于咳嗽、產(chǎn)后缺乳、糖尿病和肝病的輔助治療等，在保健品的開(kāi)發(fā)上也有一定的涉及，開(kāi)發(fā)前景廣闊。查閱資料發(fā)現(xiàn)目前對(duì)于四葉參并沒(méi)有制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，雖然早期已有學(xué)者對(duì)其化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行過(guò)綜述，但是近年來(lái)對(duì)四葉參的現(xiàn)代研究又有了新的進(jìn)展。為了更好地開(kāi)發(fā)利用其藥用價(jià)值，本研究就四葉參最新的化學(xué)成分、藥理作用等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為四葉參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研制以及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 化學(xué)成分

目前從四葉參化學(xué)中分離出來(lái)的化合物主要包括三萜類(lèi)、甾醇類(lèi)、苯丙素類(lèi)、生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)等，同時(shí)其還含有豐富的礦質(zhì)元素。

1.1 三萜類(lèi)化合物

三萜類(lèi)化合物類(lèi)型眾多且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，其基本母核由6個(gè)異戊二烯單元（C5H6）聚合而成，極少數(shù)種類(lèi)含碳數(shù)小于30個(gè)，主要分布于陸地高等植物中，或以游離形式存在，或與糖結(jié)合成苷。目前從四葉參中分離鑒定出25種三萜類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)類(lèi)型多為齊墩果烷型的五環(huán)三萜，詳見(jiàn)表1、圖1。

圖1 三萜類(lèi)化合物

表1 三萜類(lèi)化合物

1.2 甾醇類(lèi)化合物

甾類(lèi)化合物是一類(lèi)具有環(huán)戊烷駢多氫菲結(jié)構(gòu)的化合物的總稱(chēng)，目前從四葉參中分離出的均為植物甾醇，其基本結(jié)構(gòu)C3位上含有β-羥基，C17位側(cè)鏈則是由10個(gè)碳原子組成的鏈狀烴。四葉參的甾醇類(lèi)成分見(jiàn)表2、圖2。

圖2 甾醇類(lèi)化合物

表2 甾醇類(lèi)化合物

1.3 苯丙素類(lèi)化合物

苯丙素類(lèi)化合物是以苯環(huán)與三碳鏈（C6-C3）為基本單元構(gòu)成的一類(lèi)化合物，這類(lèi)成分既可以獨(dú)立形成化合物，也可以?xún)蓚€(gè)、三個(gè)甚至多個(gè)單元聚合存在，四葉參中的苯丙素類(lèi)成分詳見(jiàn)表3、圖3。

圖3 苯丙素類(lèi)化合物

表3 苯丙素類(lèi)化合物

1.4 生物堿類(lèi)化合物

生物堿是一類(lèi)含氮的有機(jī)化合物，多具有顯著而特殊的生物活性，在臨床上起著十分重要的作用，四葉參的生物堿類(lèi)成分見(jiàn)表4、圖4。

圖4 生物堿類(lèi)化合物

表4 四葉參的生物堿類(lèi)成分

1.5 黃酮類(lèi)化合物

王德才等[20]采用紫外分光光度法測(cè)得四葉參中總黃酮的平均含量為0.235%，毛士龍等[15]從四葉參中分離鑒定出鳶尾苷（47），四葉參中還含有芹菜素（48）和木犀草素[21]（49），結(jié)構(gòu)信息見(jiàn)圖5。

圖5 黃酮類(lèi)化合物

1.6 揮發(fā)油類(lèi)

揮發(fā)油是一種成分復(fù)雜的混合物，大多具有芳香氣味。尹建元等[22]從四葉參中鑒定出47種成分，其中甲基硫雜丙環(huán)、苯甲醇、十四烷酸甲酯以及二十烷的含量居高。余雄英等[23]也對(duì)四葉參中的揮發(fā)油進(jìn)行了定性和定量分析，共鑒定出26個(gè)化合物，主要為脂肪族化合物及少量的芳香族和萜類(lèi)成分。高艷霞等[24]利用超臨界CO2流體萃取技術(shù)提取四葉參中的揮發(fā)油并用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分離鑒定出46種成分，其中組分含量最高的A-菠菜甾醇占15.71%。

1.7 其他類(lèi)

四葉參中的其他類(lèi)成分還包括：莽草酸（50）、順丁烯二酸[15]（51）、黨參炔苷（52）、lobetyolinin（53）、(E)-2-hexenyl-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)-β-Dglucopyranoside（54）、(E)-2-hexenyl- α -Larabinopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside[11]（55），5-羥甲基-2-呋喃甲醛（56）、codonopilodiynoside A（57）、lobetyol（58）、(+)-isolariciresinol[25]（59），結(jié)構(gòu)信息見(jiàn)圖6。有研究發(fā)現(xiàn)，黨參炔苷對(duì)黃嘌呤氧化酶（XO）的活性有抑制作用，能夠減少高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)生[26]，黨參屬另一植物黨參也將黨參炔苷作為質(zhì)量控制的指標(biāo)[27]，推斷黨參炔苷的含量在一定程度上可以反映四葉參藥材的品質(zhì)。

圖6 其他類(lèi)化合物

1.8 礦質(zhì)元素

礦質(zhì)元素雖然在機(jī)體中的含量不高，但是對(duì)于構(gòu)成機(jī)體組織和維持機(jī)體正常生理功能卻是必不可少的。劉利娥等[28]采用原子吸收分光光度法和可見(jiàn)分光光度法測(cè)得微量元素Cu、Zn、Fe、Mn、Se和常量元素Ca、Mg、P的含量，其中Mn的含量最高，其次是Se，有研究表明Se對(duì)多種因素導(dǎo)致的肝損傷具有一定的保護(hù)作用[29]，四葉參的肝保護(hù)作用可能與此有關(guān)。

2 藥理作用

2.1 抗氧化

四葉參的抗氧化活性可能與其含有的黃酮類(lèi)和酚類(lèi)成分有關(guān)[30-31]。四葉參提取物能提高小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px活力及GSH水平，并抑制MDA的生成，水提物比醇提物效果更好[32]，此外，其對(duì)絡(luò)氨酸酶的活性也有一定的抑制作用[17]。四葉參多糖也有較強(qiáng)的抗氧化活性，能清除羥自由基（·OH）和超氧陰離子（O-2）,并可抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞溶血[33]，還能清除DPPH、ABTS+等自由基[34]，其抗氧化能力呈一定的量效關(guān)系，當(dāng)四葉參多糖濃度達(dá)到800 μg·mL-1時(shí)，DPPH自由基清除能力接近抗壞血酸[35]。可見(jiàn)四葉參既能抑制體內(nèi)氧化反應(yīng)的發(fā)生，又能增強(qiáng)對(duì)自由基的清除，從多方面發(fā)揮抗氧化作用。

2.2 抗腫瘤

四葉參具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，能預(yù)防和治療多種癌癥。四葉參提取物對(duì)HeLa、Calu-6、MCF-7等癌細(xì)胞系具有不同程度的細(xì)胞毒性作用[30]，還能明顯抑制H22荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)H22荷瘤小鼠的生存時(shí)間，而對(duì)免疫系統(tǒng)沒(méi)有明顯的副作用，其作用機(jī)制可能與四葉參提取物改善小鼠免疫功能、抑制H22移植瘤的血管生成和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)[36-37]。四葉黨參總皂苷能夠通過(guò)上調(diào)Caspase8、9蛋白表達(dá)、激活Caspase-3從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用[38]。四葉參提取物能夠延長(zhǎng)烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌小鼠的存活時(shí)間，提高肺癌小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活性，激活小鼠體內(nèi)SOD活性，從而預(yù)防和抑制小鼠肺癌的發(fā)生[39]。此外，四葉參提取物對(duì)人口腔癌HSC-2細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29具有抑制作用，能夠增加促凋亡蛋白Bak的表達(dá)，抑制人口腔癌細(xì)胞HSC-2細(xì)胞生長(zhǎng)[40]，可通過(guò)增加人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29細(xì)胞中Bax/Bcl-2比值和激活Caspase-3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[41]。從四葉參中分離出來(lái)的lancemaside A能夠通過(guò)激活ROS介導(dǎo)的p38 MAPK通路抑制MMP-2和MMP-9的表達(dá)，顯著抑制卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力[42]。

2.3 抗炎

研究表明四葉參中的LancemasideA、刺囊酸有較好的抗炎作用，能夠抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、等多種炎癥因子的產(chǎn)生，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞上的LPS與TLR4的結(jié)合來(lái)減少炎癥的發(fā)生，四葉參的抗炎作用詳見(jiàn)表5。

表5 四葉參的抗炎作用

2.4 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用

四葉參對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用主要表現(xiàn)在對(duì)記憶功能的改善方面，它能夠通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶活性，誘導(dǎo)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和環(huán)AMP反應(yīng)結(jié)合蛋白的表達(dá)改善東莨菪堿和淀粉樣蛋白-β處理造成的小鼠記憶功能障礙，抑制乙酰膽堿酯酶活性與多奈哌齊相當(dāng)，將來(lái)極有可能應(yīng)用于治療阿爾茨海默病藥物的研究中，而且經(jīng)蒸制和發(fā)酵處理后，其作用效果明顯增強(qiáng)[48-51]。此外，四葉參提取物還具有一定的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和抗驚厥作用[52]，詳見(jiàn)表6。

表6 四葉參對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用

2.5 增強(qiáng)免疫

四葉參多糖是四葉參發(fā)揮免疫作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。免疫能力下降的糖尿病大鼠經(jīng)四葉參多糖給藥后，其胸腺指數(shù)顯著提高，脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增加，細(xì)胞免疫功能得到改善[53]。四葉參多糖對(duì)由環(huán)磷酰胺和絲裂霉素引起的動(dòng)物免疫功能低下也能產(chǎn)生一定的拮抗作用[54-55]，能提高小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，提高血清抗綿羊紅細(xì)胞（SRBC）抗體水平以及巨噬細(xì)胞的吞噬活性，還能促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖。四葉參粗多糖能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN-γ，與ConA協(xié)同增加T細(xì)胞的免疫活性，不同濃度的四葉參粗多糖作用于巨噬細(xì)胞（RAW264.7）后，能明顯促進(jìn)RAW264.7增殖，TNF-α、IL-6分泌量極顯著增加[56]，說(shuō)明四參粗多糖可活化并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性從而增強(qiáng)非特異性免疫。綜上可見(jiàn)，四葉參對(duì)機(jī)體特異性免疫與非特異性免疫均能產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。

2.6 抗疲勞

研究發(fā)現(xiàn)四葉參多糖具有增強(qiáng)小鼠耐缺氧和抗疲勞能力的作用，能夠降低缺氧條件下小鼠的耗氧量，延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間，小鼠負(fù)重游泳時(shí)間也明顯延長(zhǎng)[57-58]。四葉參提取物可以提高運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝糖原的儲(chǔ)備，增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)能力，延長(zhǎng)小鼠力竭時(shí)間，灌服四葉參提取物同時(shí)結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能提高肝臟糖有氧代謝相關(guān)酶琥珀酸脫氫酶（SDH）和蘋(píng)果酸脫氫酶（MDH）活性，加快體內(nèi)三羧酸循環(huán)，保證機(jī)體能量供應(yīng)，延緩疲勞的發(fā)生，提高運(yùn)動(dòng)能力[59]。四葉參水提物還能促進(jìn)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠能量代謝產(chǎn)物BUN（尿素氮）、BLA（內(nèi)酰胺酶）、MDA（丙二醛）及時(shí)從體內(nèi)排出，并提高抗氧化酶SOD的活性，從而緩解骨骼肌疲勞，其抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的機(jī)制可能與促進(jìn)大鼠骨骼肌AMPK、PGC-1α蛋白的表達(dá)有關(guān)[60]。

2.7 降血壓、降血脂、抗肥胖

四葉參可以維持心血管的正常功能從而預(yù)防高血壓的發(fā)生，能夠降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平的升高，減少肥胖小鼠的肝臟脂肪堆積，還能控制與脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)水平，預(yù)防血脂的提高，對(duì)于高熱量飲食導(dǎo)致的肥胖也有一定的抵抗作用，詳見(jiàn)表7。

表7 四葉參的降血壓、降血脂、抗肥胖作用

2.8 其他作用

高脂飲食會(huì)導(dǎo)致小鼠乳腺發(fā)育受限，最終造成產(chǎn)后泌乳量不足，乳汁質(zhì)量下降，四葉參能提高這種肥胖大鼠的產(chǎn)后泌乳量，增加母乳喂養(yǎng)的成功率，對(duì)于溴隱亭致的產(chǎn)后缺乳也有一定的改善作用。四葉參還能降低大鼠腦血栓的形成，促進(jìn)細(xì)胞間的信息傳遞，對(duì)高糖高脂飲食所致的糖尿病大鼠的心肌損傷以及急性酒精性肝損傷和順鉑引起的腎損傷也有一定的保護(hù)作用，見(jiàn)表8。

表8 四葉參的其他作用

3 結(jié)語(yǔ)

隨著中醫(yī)藥的發(fā)展進(jìn)步，學(xué)者們?cè)絹?lái)越注重對(duì)中藥價(jià)值的研究。本文通過(guò)整理并分析有關(guān)四葉參植物的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)其化學(xué)成分以及藥理作用進(jìn)行了歸納闡述，目前學(xué)者們對(duì)其的研究多集中在成熟的地下部分，而忽視了其地上部分的利用價(jià)值，在未來(lái)的研究中，可以對(duì)其分部位、分采收期進(jìn)行比較，為合理利用藥用資源提供依據(jù)。通過(guò)對(duì)四葉參原料進(jìn)行不同的前處理，如蒸熟、發(fā)酵等，可使四葉參的作用效果增強(qiáng)，在這過(guò)程中，是因?yàn)楫a(chǎn)生了新的化合物起到協(xié)同增效的作用或者是不同的前處理方式提高了有效成分的提取率，有待我們進(jìn)一步探索。四葉參具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、神經(jīng)保護(hù)，增強(qiáng)免疫等多種生物活性，但針對(duì)其藥理作用的研究大多基于其水提物、醇提物、粗多糖等成分上，對(duì)單體化合物提取分離及其生物活性的研究還有所欠缺，如四葉參具有較好的抗腫瘤作用，雖已有研究表明從中分離出來(lái)的lancemaside A具有一定活性，但更多的研究主要集中在提取物上，若能明確活性單體成分及其藥理作用機(jī)制，對(duì)于臨床抗腫瘤藥物的研發(fā)將會(huì)有很大的幫助。此外，目前針對(duì)四葉參化學(xué)成分的研究集中在揮發(fā)油類(lèi)及皂苷類(lèi)成分，對(duì)可能存在抗氧化、抗炎活性的黃酮類(lèi)和生物堿成分的研究報(bào)道相對(duì)較少，一直以來(lái)，四葉參作為民間用藥使用較多，盡管對(duì)四葉參的研究取得了一定的進(jìn)展，但是對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究尚有不足，因此，將其化學(xué)成分與藥理作用研究相結(jié)合，尋找一種穩(wěn)定的活性成分，作為四葉參質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，也是今后的研究方向之一。