梅天明，魏俊，章濤，夏燕，柳長青

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院 宿州市立醫(yī)院a.胃腸外科，b.病理科，安徽 宿州 234000)

結(jié)直腸癌是胃腸外科常見疾病，好發(fā)于40歲以上的中老年群體，發(fā)病率較高，我國50%以上的腸癌患者為直腸癌，且每年以2%的速度遞增[1]。對于結(jié)直腸癌患者，早期手術(shù)是提高其生存率和改善預(yù)后的有效措施，但結(jié)直腸癌早期臨床癥狀不明顯，大部分患者確診時已為中晚期，錯過了最佳治療時間，增加了治療難度且預(yù)后較差，已成為危害人類健康、影響生命質(zhì)量的八大主要惡性腫瘤之一[2-3]。結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展涉及多因素、多階段，其中環(huán)境因素及遺傳因素是主要影響因素，但目前其具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床缺乏有效的預(yù)測分子標(biāo)志物[4]。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)，葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(glucose transporter 1，GLUT1)在腸道攝取葡萄糖過程中扮演重要角色，氨肽酶P2(aminopeptidase P2，XPNPEP2)對腫瘤的侵襲和血管生成有重要作用，兩者在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)異常，可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生和預(yù)后有關(guān)[5-6]，而了解結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制并尋找影響結(jié)直腸癌預(yù)后不良的危險因素對其治療和預(yù)后有重要意義。但目前關(guān)于GLUT1、XPNPEP2與結(jié)直腸癌預(yù)后關(guān)系的研究較少。本研究旨在分析GLUT1、XPNPEP2表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年1月于安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院胃腸外科就診且接受手術(shù)治療的84例結(jié)直腸癌患者作為研究對象，其中男51例、女33例，年齡26～88歲，平均(55±6)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)內(nèi)鏡活檢或術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌；②初診且入院前未接受過相關(guān)治療；③一般資料完整；④在本院經(jīng)手術(shù)治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性結(jié)直腸癌；②自身免疫性疾病；③有既往相關(guān)惡性腫瘤病史。本研究經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署了知情同意書。

1.2方法

1.2.1GLUT1、XPNPEP2檢測 術(shù)前采用免疫組織化學(xué)法檢測GLUT1、XPNPEP2的表達(dá)，病理標(biāo)本收集后對組織進(jìn)行切片、脫蠟、脫水處理，切片放入甲醇磷酸鹽緩沖液中20 min左右以清除內(nèi)源性過氧化物酶活性，切片放入壓力鍋，設(shè)置溫度100 ℃，以乙二胺四乙酸緩沖液(pH=8.0)進(jìn)行隔水加熱30 min，隨后自然冷卻，以進(jìn)行抗原修復(fù)，室溫下加一抗孵育切片3 h，滴加二抗37 ℃孵育切片30 min(一抗、二抗均購自合肥萊爾生物科技有限公司)，采用EnVision二步法進(jìn)行顯色處理，每張切片計數(shù)均至少300個細(xì)胞。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]：出現(xiàn)棕褐色或棕黃色細(xì)小顆粒，記錄著色強(qiáng)度，無色記為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。觀察陽性細(xì)胞數(shù)，計算陽性細(xì)胞百分比，<5%記為0分，5%～25%記為1分，26%～50%記為2分，51%～75%為3分，76%～100%記為4分，陽性細(xì)胞積分與著色強(qiáng)度的乘積>4分為陽性，否則為陰性[8]。

1.2.2隨訪及預(yù)后分組 患者住院接受手術(shù)治療后對其進(jìn)行觀察和隨訪，隨訪時間2年，記錄患者失訪及生存、死亡情況，繪制生存曲線，并根據(jù)隨訪結(jié)果將患者分為生存組和死亡組。

1.2.3影響GLUT1、XPNPEP2表達(dá)及預(yù)后的相關(guān)因素收集 包括性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病、體質(zhì)指數(shù)(body mass idex，BMI)、入院時生化指標(biāo)[乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)]、TNM分期、原發(fā)部位、分化程度、漿膜及脈管浸潤情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及GLUT1、XPNPEP2表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1GLUT1、XPNPEP2的陽性表達(dá) 84例結(jié)直腸癌患者中，60例患者GLUT1蛋白表達(dá)為陽性，陽性率為71.43%；61例患者XPNPEP2表達(dá)為陽性，陽性率為72.62%，見圖1。

注：GLUT1為葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1，XPNPEP2為氨肽酶P2圖1 結(jié)直腸癌組織GLUT1、XPNPEP2蛋白的表達(dá)(二氨基聯(lián)苯胺染色，×200) 1a為GLUT1陽性表達(dá)，1b為XPNPEP2陽性表達(dá)

2.2GLUT1、XPNPEP2表達(dá)與結(jié)直腸癌組織臨床病理特征的關(guān)系 臨床病理特征分析顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.01)，不同分化程度、浸潤深度患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)；不同性別、年齡及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 GLUT1、XPNPEP2表達(dá)與結(jié)直腸癌組織臨床病理特征的關(guān)系 [例(%)]

2.3GLUT1、XPNPEP2表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的生存關(guān)系分析 Kaplan-Meier生存曲線顯示，GLUT1陽性組中位生存期為14個月，陰性組為21個月，兩組生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.169,P=0.013)；XPNPEP2陽性組中位生存期為16個月，陰性組為22個月，兩組生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.547，P=0.021)。見圖2、圖3。

注：GLUT1為葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1圖2 GLUT1陽性與陰性結(jié)直腸癌患者術(shù)后生存曲線

注：XPNPEP2為氨肽酶P2圖3 XPNPEP2陽性與陰性結(jié)直腸癌患者術(shù)后生存曲線

2.4影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)因素分析 至隨訪結(jié)束時，84例患者中3例失訪，共獲得81例完整隨訪資料，失訪率為3.57%。81例患者中，59例生存、22例死亡，生存率為72.84%。兩組不同TNM分期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，死亡組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、GLUT1陽性率、XPNPEP2陽性率均高于生存組(P<0.05)；兩組性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病比例、BMI、LDH升高情況、TC、LDL-C、HDL-C、原發(fā)部位、分化程度、漿膜浸潤、脈管浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)因素分析

2.5影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的Cox回歸分析 將可能影響患者預(yù)后的因素設(shè)為自變量，是否死亡設(shè)為因變量(死亡=1，生存=0)，進(jìn)行Cox回歸分析。Cox回歸分析顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、GLUT1陽性、XPNPEP2陽性均是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的危險因素(均P<0.01)。見表3。

表3 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的Cox回歸分析

3 討 論

結(jié)直腸癌是臨床發(fā)病率較高的惡性腫瘤，多發(fā)于45～65歲的中老年群體。近年來，隨著人們生活方式的改變及社會老齡化的加劇，其發(fā)病率逐漸升高，不僅影響患者的身心健康，還需負(fù)擔(dān)高昂的醫(yī)療費用[9-10]。盡管結(jié)直腸癌的治療已取得重大進(jìn)展，但術(shù)后易復(fù)發(fā)或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率仍較高，預(yù)后較差，因此與結(jié)直腸癌相關(guān)的特異性標(biāo)志物的篩選及鑒定對其治療和預(yù)后具有重要意義[11]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，結(jié)直腸癌新的預(yù)后評價指標(biāo)及方法不斷得到補(bǔ)充和完善，用更為客觀的分子生物學(xué)指標(biāo)反映腫瘤本質(zhì)，可更加準(zhǔn)確地判斷預(yù)后。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展受多種因素影響，其中糖代謝與腫瘤密切相關(guān)。研究表明，GLUT1參與腫瘤細(xì)胞提取葡萄糖的過程，且GLUT1對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移等均有調(diào)控作用[12-13]。XPNPEP2蛋白主要由XPNPEP2基因編碼，屬于氨基?；彼崴饷?，能夠活化胞外信號調(diào)節(jié)激酶信號通路，該通路可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮到間質(zhì)的轉(zhuǎn)化，降低結(jié)直腸癌組織黏附能力，重構(gòu)腫瘤細(xì)胞的胞外基質(zhì)，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[14-15]。本研究中，84例結(jié)直腸癌患者組織中GLUT1陽性率為71.43%，XPNPEP2陽性率為72.62%，且TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期患者，不同分化程度、浸潤深度患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者GLUT1、XPNPEP2表達(dá)的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，提示GLUT1、XPNPEP2在結(jié)直腸癌患者組織中呈高表達(dá)，且兩者的表達(dá)與腫瘤分期、分化程度、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明GLUT1、XPNPEP2的表達(dá)可在一定程度上反映結(jié)直腸癌患者部分臨床病理特征。

GLUT1是葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白中的重要成員，結(jié)直腸癌在發(fā)生、發(fā)展中通常會出現(xiàn)缺氧狀況，腫瘤組織為適應(yīng)此狀態(tài)會發(fā)生生物學(xué)行為及代謝改變，主要通過糖酵解葡萄糖獲得能量[6]。Bostr?m等[16]研究發(fā)現(xiàn)，GLUT1可促進(jìn)葡萄糖沿著濃度梯度轉(zhuǎn)運，使腫瘤細(xì)胞在缺氧環(huán)境下仍可快速增殖；同時GLUT1在多種腫瘤(如結(jié)直腸癌、肝癌)組織中表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而滿足腫瘤組織的大量能量需求。既往研究表明，GLUT1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，陽性率為72.6%(267/368)，高于正常組織，且與結(jié)直腸癌的不良預(yù)后密切相關(guān)[17]。XPNPEP2為一種膜結(jié)合金屬蛋白酶，可將蛋白質(zhì)水解成氨基酸，其在良性組織中低表達(dá)或不表達(dá)，而在癌組織中扮演促癌基因的角色。研究發(fā)現(xiàn)，XPNPEP2在宮頸癌、胃癌等腫瘤中異常表達(dá)[18-19]。梁正等[20]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中XPNPEP2表達(dá)上調(diào)，陽性率為75%(135/180)，與結(jié)直腸癌的疾病進(jìn)展和預(yù)后相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，GLUT1、XPNPEP2陽性組與陰性組的生存曲線比較差異統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；同時Cox回歸分析顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、GLUT1陽性、XPNPEP2陽性均是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的危險因素(均P<0.01)，表明GLUT1、XPNPEP2的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者組織中GLUT1、XPNPEP2高表達(dá)，GLUT1、XPNPEP2陽性是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)因素，同時兩者對結(jié)直腸癌的預(yù)后有較高的評估價值。