李婷婷，夏楓峰，油九菊，張平平，張禎祺，張向東，宋懷穎，蔡惠文，施 慧

（1.浙江海洋大學(xué)國家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，浙江舟山 316022；2.舟山市海洋與漁業(yè)局，浙江舟山 316000；3.浙江海洋大學(xué)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，浙江舟山 316022；4.浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江舟山 316021）

凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei，又名南美白對(duì)蝦，因其具有餌料需求低、抗病性強(qiáng)、適應(yīng)性強(qiáng)、營養(yǎng)價(jià)值高、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)品市場占有重要地位[1]。腸道是對(duì)蝦營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的重要器官，對(duì)蝦腸道微生物群落在宿主營養(yǎng)代謝、免疫防御和生長發(fā)育起著關(guān)鍵作用[2]。因此，凡納濱對(duì)蝦腸道微生物在對(duì)蝦生產(chǎn)和疾病預(yù)防等方面的研究越來越多。

GUO Haipeng,et al[3]發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦腸道有益菌增加會(huì)促進(jìn)對(duì)蝦生長。HOSSAIN,et al[4]發(fā)現(xiàn)健康和受感染的對(duì)蝦在腸道菌群組成和豐度存在顯著差異。FRANK,et al[5]認(rèn)為腸道細(xì)菌的失衡可能引起腸炎。核心微生物是影響對(duì)蝦腸道微生物結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)鍵因素。XIONG Jinbo,et al[6]發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦腸道有益核心微生物組是紅桿菌科和黃桿菌科。YAO Zhiyuan,et al[7]發(fā)現(xiàn)健康對(duì)蝦腸道核心微生物是紅桿菌科，患病對(duì)蝦腸道核心微生物是弧菌科。吳金鳳等[8]從對(duì)蝦腸道中選出61 種指示物種來區(qū)分對(duì)蝦的健康狀態(tài)。

目前在對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)與對(duì)蝦生長關(guān)系的研究中，大部分集中在對(duì)蝦健康與疾病方面，而有關(guān)對(duì)蝦產(chǎn)量和肌肉品質(zhì)方面的研究鮮有報(bào)道，且對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)中關(guān)鍵微生物的種類和功能尚待挖掘。高通量測序技術(shù)[9]能夠可靠、全面地反映微生物群落組成基本特征，因此本研究采用高通量測序技術(shù)，對(duì)對(duì)蝦腸道的微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，探討生態(tài)基[10]和凈水劑“格義凈”在調(diào)節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境，優(yōu)化凡納濱對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)中的作用，分析凡納濱對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)對(duì)對(duì)蝦生長、肌肉品質(zhì)的具體影響，從而為提高凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量和質(zhì)量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖管理與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本研究在舟山市某水產(chǎn)養(yǎng)殖場開展，該養(yǎng)殖場單個(gè)實(shí)驗(yàn)養(yǎng)殖塘面積9 m2，深度0.9 m，進(jìn)水符合對(duì)蝦養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范水質(zhì)要求，且增氧設(shè)施及排水系統(tǒng)完備。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2021 年8 月1 日—2021 年10 月30 日，養(yǎng)殖周期為90 d，分為3 個(gè)階段：0～30 d 為養(yǎng)殖前期、30～60 d 為養(yǎng)殖中期、60～90 d 為養(yǎng)殖后期。養(yǎng)殖水溫為25～31 ℃，鹽度為26～30，pH 為7.6～8.6，溶解氧為4.37～7.14 mg·L-1。蝦苗初始體長2.92±0.04 cm、初始體重0.23±0.004 g，養(yǎng)殖密度為667 尾·m-2。每天進(jìn)行4 次餌料投喂（06:00、10:00、14:00、18:00）和1 次排換水（05:00），及時(shí)記錄飼料投喂量，并隨時(shí)觀察對(duì)蝦生長狀況。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：本實(shí)驗(yàn)共設(shè)1 個(gè)對(duì)照組和3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組，其中每個(gè)組設(shè)置2 個(gè)平行。對(duì)照組C 以傳統(tǒng)養(yǎng)殖方式進(jìn)行管理：養(yǎng)殖前中期每隔5 d 投放3 mg·L-1EM 菌和微藻膏，養(yǎng)殖后期每隔3 d 投放3 mg·L-1EM 菌和微藻膏。實(shí)驗(yàn)組B 相較于C 組減半投放EM 菌和微藻膏，同時(shí)在養(yǎng)殖池底部布設(shè)生態(tài)基。生態(tài)基通過系附墜石均勻得分布在池底，密度為0.18 m·2m-3。實(shí)驗(yàn)組P 在養(yǎng)殖過程中投加凈水劑“格義凈”，即養(yǎng)殖前中期每隔5 d 投放0.2 mg·L-1格義凈（1.8 g），養(yǎng)殖后期每隔3 d 投放0.2 mg·L-1格義凈（1.8 g）。實(shí)驗(yàn)組D 除了按照P 組的方法投放凈水劑外，同時(shí)在池底部布設(shè)生態(tài)基，密度為0.18 m·2m-3。

1.2 樣品采集與指標(biāo)測定

1.2.1 樣品采集

（1）對(duì)蝦采集：于養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束后，每組隨機(jī)撈取50 尾對(duì)蝦稱重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后每組隨機(jī)撈取1 kg對(duì)蝦進(jìn)行肌肉營養(yǎng)成分測定，最后各組撈出全部對(duì)蝦統(tǒng)計(jì)對(duì)蝦產(chǎn)量。

（2）微生物采集：養(yǎng)殖結(jié)束前5 d，每天每組隨機(jī)撈取20 尾對(duì)蝦，在無菌條件下取對(duì)蝦腸道及內(nèi)容物。每天從B 組養(yǎng)殖試驗(yàn)池剪取生態(tài)基（0.004 5 m2），在無菌條件下震蕩富集微生物濾膜，微生物樣品均放-80 ℃冰箱冷凍保存，待進(jìn)行16S rDNA 測序。

1.2.2 指標(biāo)測定

（1）對(duì)蝦生長指標(biāo)測定

根據(jù)實(shí)驗(yàn)測得的各組對(duì)蝦的初始和末尾平均體質(zhì)量，計(jì)算對(duì)蝦增重率（weight gain rate,WGR），特定生長率（specific growth rate,SGR），餌料系數(shù)（feed conversion rate,FCR），存活率（survival rate,SR），并統(tǒng)計(jì)各組對(duì)蝦產(chǎn)量（yield,Y）。公式見（1）-（4）:

式中：W0為對(duì)蝦初均重，g；W1為對(duì)蝦末均重，g；t 為實(shí)驗(yàn)天數(shù)，d；F 為飼料投喂總量，g；Wt0為對(duì)蝦初總重，g；Wt1為對(duì)蝦末總重，g；a 為對(duì)蝦初尾數(shù)，ind.；b 為對(duì)蝦末尾數(shù)，ind.。

（2）對(duì)蝦肌肉指標(biāo)測定

將各組對(duì)蝦甲殼剝離，肌肉搗碎、打漿混合，105 ℃烘干至恒重，采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)》[11]方法測定對(duì)蝦肌肉中一般營養(yǎng)成分（水分、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪）、氨基酸組成、脂肪酸組成。

（3）高通量測序及序列分析

提取對(duì)蝦腸道和生態(tài)基微生物總DNA，以16S rDNA 基因V3+V4 區(qū)引物擴(kuò)增DNA，采用Illumina MiSeq 測序平臺(tái)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序。用Vsearch 軟件[12]，按照97%相似度將有效序列進(jìn)行OTU（operational taxonomic unit）聚類，分別從門（Phylum）、屬（Genus）分類水平上統(tǒng)計(jì)各樣本微生物群落組成及相對(duì)豐度。采用mothur 軟件，基于OTU 數(shù)目計(jì)算Chao1[13]、Shannon、Simpson[14]、Coverage[15]等多樣性指數(shù)，用R 軟件繪制稀釋曲線和PCA 圖。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法

通過SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)對(duì)蝦生長指標(biāo)、微生物組成相對(duì)豐度、Alpha 多樣性指數(shù)等數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。在滿足方差齊性的條件下對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Turkey 多重比較，若不滿足方差齊性，則采用Dunnett-T3 檢驗(yàn)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重差異性比較，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與討論

2.1 對(duì)蝦生長狀況

研究發(fā)現(xiàn)不同處理組凡納濱對(duì)蝦生長狀況具有差異（表1）。實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦增重率和特定生長率均高于C組，B、D 組產(chǎn)量均高于C 組，餌料系數(shù)均低于C 組。其中，B 組的對(duì)蝦增重率、特定生長率以及總產(chǎn)量最高，分別比C 組提高11.22%、2.80%、2.45%，且B、D 組的餌料系數(shù)最低，較C 組降2.27%。

表1 不同處理組凡納濱對(duì)蝦生長狀況Tab.1 Growth status of L.vannamei in different treatment groups

2.2 對(duì)蝦肌肉營養(yǎng)組成

對(duì)蝦肌肉中的蛋白質(zhì)和脂肪含量是評(píng)價(jià)蝦類營養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)[16]。為了進(jìn)一步評(píng)估不同處理組對(duì)蝦肌肉品質(zhì)和營養(yǎng)價(jià)值，分別對(duì)對(duì)蝦肌肉氨基酸和脂肪酸組成進(jìn)行了詳細(xì)分析。

2.2.1 氨基酸組成

氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，氨基酸的種類和含量決定對(duì)蝦類肌肉營養(yǎng)價(jià)值和鮮味程度[17]。不同處理組對(duì)蝦肌肉中氨基酸組成相同，但含量不同（表2）。B 組對(duì)蝦肌肉中總氨基酸總量（ΣTAA）、必需氨基酸總量（ΣEAA）、非必需氨基酸總量（ΣNEAA）、鮮味氨基酸總量（ΣDAA）均高于其他組，具體表現(xiàn)在賴氨酸（6.44%）、苯丙氨酸（3.62%）、蘇氨酸（3.39%）、纈氨酸（3.24%）等必需氨基酸，以及谷氨酸（14.82%）、天門冬氨酸（9.10%）、甘氨酸（9.01%）、丙氨酸（5.35%）等鮮味氨基酸含量最高。本研究結(jié)果表明B 組對(duì)蝦肌肉中營養(yǎng)價(jià)值和鮮味最高。

表2 不同處理組凡納濱對(duì)蝦肌肉中的氨基酸含量（%）Tab.2 Amino acid content in L.vannamei muscle in different treatment groups（%）

2.2.2 脂肪酸組成

脂肪酸是細(xì)胞膜的主要組成部分，脂肪酸的種類和含量對(duì)對(duì)蝦肌肉營養(yǎng)價(jià)值和鮮味多汁性具有決定性意義。不同處理組對(duì)蝦肌肉中脂肪酸組成相同，但含量有差異（表3）。B 組對(duì)蝦肌肉中總n-3 多不飽和脂肪酸含量（25.21%）最高，具體包括EPA（12.67%）、EPA+DHA（24.27%）等含量高于其他組。P 組總n-6 多不飽和脂肪酸含量（24.83%）最高，具體包括亞油酸（22.33%）、花生三烯酸（1.69%）、花生四烯酸（2.51%）等含量高于其他組。本研究結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦肌肉營養(yǎng)價(jià)值和鮮味多汁性高于C 組。

表3 不同處理組凡納濱對(duì)蝦肌肉中脂肪酸含量（%）Tab.3 Fatty acid content in L.vannamei muscle in different treatment groups（%）

2.3 微生物群落結(jié)構(gòu)特征

腸道微生物群落結(jié)構(gòu)與凡納濱對(duì)蝦生長密切相關(guān)[18]。本研究連續(xù)5 d 對(duì)對(duì)照組C、實(shí)驗(yàn)組B、實(shí)驗(yàn)組P對(duì)蝦腸道微生物和B 組養(yǎng)殖塘中掛設(shè)的生態(tài)基（S）附著微生物進(jìn)行測序，分析其微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性特征，探討腸道微生物群落結(jié)構(gòu)對(duì)對(duì)蝦生長的影響。

2.3.1 微生物群落多樣性及穩(wěn)定性

應(yīng)用Illumina MiSeq 平臺(tái)對(duì)連續(xù)5 d 實(shí)驗(yàn)獲取的各組對(duì)蝦腸道和生態(tài)基微生物樣品進(jìn)行測序，并對(duì)獲得的原始序列進(jìn)行質(zhì)控，共獲得1 494 508 條有效序列。根據(jù)測序結(jié)果對(duì)對(duì)蝦腸道微生物Alpha 多樣性指數(shù)Coverage、Chao1、Shannon、Simpson 進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果表明各處理組對(duì)蝦腸道Coverage 指數(shù)均接近于1.00（表4），說明各樣品測序覆蓋率高，測序數(shù)據(jù)量合理。各樣品的稀釋曲線均趨向飽和（圖1-a），進(jìn)一步說明了數(shù)據(jù)的合理性。

圖1 不同處理組凡納濱對(duì)蝦腸道微生物多樣性分析（a.稀釋曲線；b.PCA 分析圖）Fig.1 Analysis of intestinal microbial diversity of L.vannamei in different treatment groups（a.rarefaction curve;b.PCA analysis）

Alpha 多樣性指數(shù)反映生物環(huán)境內(nèi)物種的豐富度、均勻度和多樣性，已有研究表明健康幼蝦多樣性指數(shù)顯著高于患病成蝦[19]。本研究中顯示各組對(duì)蝦腸道微生物Alpha 多樣性指數(shù)沒有顯著性差異（P＞0.05），可能是因?yàn)楦鹘M對(duì)蝦處于相同生長階段并且健康狀況相似。所有實(shí)驗(yàn)組的Chao1、Shannon、Simpson 指數(shù)平均值均高于C 組，其中，P 組的Chao1 指數(shù)最高（1 559.30±53.26），而B 組的Shannon 指數(shù)（8.54±0.05）和Simpson 指數(shù)（0.995±0.000 2）都是最高的（表4），說明實(shí)驗(yàn)組B 的微生物種類最豐富，且種類分布也最均勻。PCA 分析可以反映樣本差異性[20]。如圖1-b 所示，C1、C3、P1 樣本與其他樣本距離相對(duì)較遠(yuǎn)，說明C、P 組樣本之間離散程度較大，而B 組樣本之間更加緊湊，說明B 組連續(xù)5 d 樣本的差異性及變化程度小于其他組，表明B 組對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性高于其他組。B 組對(duì)蝦增重率、特定生長率和產(chǎn)量均高于其他組（表1），說明腸道微生物多樣性和穩(wěn)定性有利于調(diào)節(jié)微生物群落動(dòng)態(tài)平衡，提高對(duì)蝦的抗病能力，改善對(duì)蝦生長狀況。

表4 不同處理組凡納濱對(duì)蝦腸道微生物Alpha 多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)（n=5）Tab.4 Alpha diversity index of L.vannamei intestinal microbials in different treatment groups（n=5）

2.3.2 微生物群落結(jié)構(gòu)

本研究分別從門和屬分類水平上統(tǒng)計(jì)對(duì)蝦腸道和生態(tài)基附著微生物群落結(jié)構(gòu)組成與相對(duì)豐度（圖2）。首先，在門水平上，對(duì)蝦腸道微生物與生態(tài)基附著微生物組成相似，依次為擬桿菌門Bacteroidota、變形菌門Proteobacteria、厚壁菌門Firmicutes 和放線菌門Actinobacteriota（圖2-a），說明對(duì)蝦存在固有腸道微生物群落結(jié)構(gòu)[21]，但是各組樣品優(yōu)勢(shì)菌相對(duì)豐度有差異，其中，生態(tài)基表面擬桿菌門（45.61%±3.35%）、變形菌門（45.7%±2.21%）最高，實(shí)驗(yàn)組P 對(duì)蝦腸道厚壁菌門（25.7%±4.49%）、放線菌門（5.41%±2.36%）最高，這可能和養(yǎng)殖環(huán)境與宿主的差異性有關(guān)，該結(jié)果與XUE Ming,et al[22]報(bào)道的健康的對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)組成及特點(diǎn)相同。在屬水平上，對(duì)蝦腸道優(yōu)勢(shì)菌屬和生態(tài)基表面優(yōu)勢(shì)菌屬?zèng)]有重疊。對(duì)蝦腸道優(yōu)勢(shì)菌屬相對(duì)豐度從高到低依次為鼠桿狀菌屬M(fèi)uribaculaceae、擬桿菌屬Bacteroidia、普雷沃式菌屬Prevotella 和埃希氏-志賀氏菌屬Escherichia-Shigella（圖2-c）。生態(tài)基上的優(yōu)勢(shì)菌屬相對(duì)豐度從高到低依次為棲河菌屬Fluviicola、交替單胞菌屬Alteromonas、弧菌屬Vibrio、海洋桿形菌屬Thalassotalea（圖2-d）。孫振麗等[23]發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖水環(huán)境與對(duì)蝦腸道微生物群落有顯著差異，本研究結(jié)果表明生長環(huán)境對(duì)微生物的定殖具有選擇性。

圖2-a 顯示，B 組對(duì)蝦腸道擬桿菌門相對(duì)豐度（36.53%±1.25%）高于其他組，同時(shí)生態(tài)基表面擬桿菌門（45.61%±3.35%）顯著高于對(duì)蝦腸道（P＜0.05）（圖2-a）。圖2-c 顯示，各組對(duì)蝦腸道優(yōu)勢(shì)菌屬?zèng)]有顯著性差異，可能是因?yàn)閷?duì)蝦生長階段和健康狀況相似。B 組對(duì)蝦腸道前3 位的優(yōu)勢(shì)菌屬均隸屬于擬桿菌門，相對(duì)豐度均高于其他組（P＞0.05）（圖2-c），同時(shí)生態(tài)基表面隸屬于擬桿菌門的棲河菌屬相對(duì)豐度（26.05%±4.79%）顯著高于其他菌屬（P＜0.05）（圖2-d）。上述結(jié)果說明B 組在相對(duì)于C 組減半投放EM 菌和微藻膏的情況下，受生態(tài)基擬桿菌相對(duì)豐度的較高影響，B 組對(duì)蝦腸道擬桿菌相對(duì)豐度提高。生態(tài)基上附著的大量微生物形成了對(duì)蝦的天然餌料，其表面附著的微生物結(jié)構(gòu)能夠直接影響對(duì)蝦腸道的微生物群落結(jié)構(gòu)，與裴鵬兵等[24]發(fā)現(xiàn)生態(tài)基能提高對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)豐富度和復(fù)雜性的結(jié)果相一致。

圖2 凡納濱對(duì)蝦腸道和生態(tài)基附著微生物門（a,b）、屬（c,d）水平群落結(jié)構(gòu)組成（n=5）Fig.2 Composition of microbial community in L.vannamei intestine and ecobase at the levels of phylum（a,b）,genus（c,d）（n=5）

腸道微生物與對(duì)蝦消化吸收、營養(yǎng)代謝、免疫防御等生理活動(dòng)密切相關(guān)，核心微生物是影響對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)和功能的主導(dǎo)者[25]。有報(bào)道稱，擬桿菌是與機(jī)體營養(yǎng)代謝相關(guān)的重要菌群[26]，其中鼠桿狀菌屬[27]、擬桿菌屬[28]、普雷沃式菌屬[29]有助于宿主分解含氮物質(zhì)，調(diào)節(jié)血糖血脂，維持腸道穩(wěn)態(tài)。同時(shí)，擬桿菌可以通過直接合成氨基酸，分泌消化酶等方式促進(jìn)對(duì)蝦氨基酸的合成，提高對(duì)蝦肌肉中氨基酸的含量。本研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組B 中的擬桿菌門屬的相對(duì)豐度高于其他組，說明B 組對(duì)蝦代謝能力和腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)優(yōu)于其他組。實(shí)驗(yàn)組B 的對(duì)蝦增重率、特定生長率、產(chǎn)量和肌肉中氨基酸品質(zhì)高于其他組（表1、2），也印證了擬桿菌在對(duì)蝦生長中的作用。實(shí)驗(yàn)組B 中，對(duì)蝦腸道微生物的多樣性、均勻度和穩(wěn)定性也是最優(yōu)的（表4，圖1），說明擬桿菌能夠調(diào)節(jié)腸道內(nèi)環(huán)境平衡，提高對(duì)蝦腸道結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，維持對(duì)蝦正常的生命活動(dòng)，促進(jìn)對(duì)蝦優(yōu)良生長。

圖2-a 顯示，各實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦腸道內(nèi)厚壁菌門、放線菌門相對(duì)豐度均高于生態(tài)基上的該兩類細(xì)菌，尤其是P 組，顯著高于生態(tài)基上附著菌群的豐度（P＜0.05），表明厚壁菌門、放線菌門在對(duì)蝦腸道中具有更強(qiáng)的定殖能力，這與腸道中具有更豐富的營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦腸道厚壁菌門、放線菌門相對(duì)豐度均高于C組，其中P 組最高，分別占細(xì)菌總數(shù)的25.7%±4.49%和5.41%±2.36%（圖2-a）。GUO Haipeng,et al[3]發(fā)現(xiàn)飼料中C/N 比的增加與厚壁菌門、放線菌門的富集呈正相關(guān)，本研究也表明“格義凈”為對(duì)蝦提供碳源從而促進(jìn)對(duì)蝦腸道中厚壁菌門、放線菌門的定殖。已有研究發(fā)現(xiàn)，厚壁菌門在宿主生長過程中參與蛋白質(zhì)、脂肪等復(fù)雜大分子有機(jī)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化，為有機(jī)體提供營養(yǎng)和能量[30]。放線菌門可以降解淀粉和蛋白質(zhì)等化合物，產(chǎn)生多種抗生素、維生素酶，并抑制致病菌的活性[31]。本研究中所有實(shí)驗(yàn)組的對(duì)蝦增重率及產(chǎn)量均高于C組，且餌料系數(shù)均低于C 組（表1），說明定殖在對(duì)蝦腸道的厚壁菌門和放線菌門有助于提高機(jī)體代謝潛力，促進(jìn)對(duì)蝦飼料的消化與利用，降低餌料系數(shù)并提高對(duì)蝦產(chǎn)量[32]。

厚壁菌門和擬桿菌門在營養(yǎng)物質(zhì)代謝與吸收方面存在著相互促進(jìn)的共生關(guān)系。BROWN,et al[30]發(fā)現(xiàn)患有肥胖小鼠腸道厚壁菌門與擬桿菌門比值（F:B）更高。圖2-b 顯示，各組對(duì)蝦的比值顯著高于S（P＜0.05），其中P 組（0.81±0.21）最高，同時(shí)P 組對(duì)蝦肌肉中n-6PUFA（24.83%）高于其他組（P＞0.05）（表3）。謝夢(mèng)琪等[33]發(fā)現(xiàn)成蝦比值（0.55）高于幼蝦比值（0.47），顯示出成蝦更強(qiáng)的分解食物和吸收能量的能力，本研究結(jié)果也表明高F:B 會(huì)加強(qiáng)宿主腸道脂肪代謝和能量吸收，提高對(duì)蝦肌肉脂肪酸含量。

變形菌門是海水養(yǎng)殖環(huán)境和對(duì)蝦腸道中的細(xì)菌群體之一，包含大腸桿菌、沙門氏菌、弧菌和幽門螺桿菌等許多致病菌，是腸道微生物群落失調(diào)的標(biāo)志性菌群。楊坤杰等[34]發(fā)現(xiàn)變形菌門比例越高，對(duì)蝦生長面臨的疾病風(fēng)險(xiǎn)越高。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)（圖2-a），實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦腸道變形菌門平均豐度均低于C 組（P＞0.05），說明致病菌對(duì)實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦生長的危害相較對(duì)照組低。實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦增重率以及特定生長率等均優(yōu)于C組（表4），說明實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦生長狀況優(yōu)于對(duì)照組，表明降低變形菌門相對(duì)豐度有助于降低對(duì)蝦患病風(fēng)險(xiǎn)，改善對(duì)蝦生長狀況。

對(duì)蝦腸道微生物結(jié)構(gòu)組成及穩(wěn)定性是影響宿主代謝能力和健康水平的重要因素。本研究表明優(yōu)化凡納濱對(duì)蝦腸道微生物結(jié)構(gòu)組成和穩(wěn)定性，提高擬桿菌門、厚壁菌門、放線菌門的相對(duì)豐度和厚壁菌門/擬桿菌門比值，不僅能夠促進(jìn)宿主對(duì)氨基酸、脂肪酸等營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，還能夠抑制變形菌門等致病菌的繁殖，保護(hù)機(jī)體免受病原菌感染，促進(jìn)對(duì)蝦生長和提高肌肉品質(zhì)。

3 結(jié)論

本研究采用Illumina 高通量測序技術(shù)，比較不同處理系統(tǒng)下凡納濱對(duì)蝦腸道微生物群落結(jié)構(gòu)對(duì)對(duì)蝦生長、肌肉品質(zhì)的具體影響，結(jié)論如下：

（1）實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦增重率和特定生長率均高于C 組，B 組的對(duì)蝦增重率、特定生長率以及總產(chǎn)量最高，分別比C 組提高11.22%、2.8%和2.45%。實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦肌肉品質(zhì)均高于C 組，其中，B 組的對(duì)蝦肌肉氨基酸含量最高，P 組脂肪酸含量高于其他組。

（2）對(duì)蝦腸道具有固定的微生物群落結(jié)構(gòu)，主要優(yōu)勢(shì)菌群包括擬桿菌門、變形菌門、厚壁菌門、放線菌門。腸道微生物的定殖易受環(huán)境影響，生態(tài)基的微孔結(jié)構(gòu)有助于促進(jìn)擬桿菌門、厚壁菌門等有益菌的繁殖，從而影響到凡納濱對(duì)蝦腸道微生物結(jié)構(gòu)，以及厚壁菌門與擬桿菌門的比值（F:B）。

（3）改善凡納濱對(duì)蝦腸道微生物結(jié)構(gòu)組成和穩(wěn)定性，提高擬桿菌門、厚壁菌門等有益菌相對(duì)豐度和F:B 值，降低變形菌門相對(duì)豐度對(duì)促進(jìn)對(duì)蝦消化吸收和營養(yǎng)代謝，降低對(duì)蝦患病風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)對(duì)蝦生長和提高肌肉品質(zhì)有重要意義。