馬新利，班爽爽，黃宇娜，侯遠方，張暋

(鄭州金域臨床檢驗中心有限公司 實驗診斷部，河南 鄭州 450000)

心腦血管疾病已在全世界范圍內(nèi)成為人類的頭號殺手[1]，氯吡格雷是臨床上最常用的一種治療腦梗死和冠心病的抗血小板聚集藥物，是預防和治療心腦血管疾病的一線藥物[2]。氯吡格雷藥效個體差異大，4%～30%的患者存在氯吡格雷抵抗，服用常規(guī)劑量的氯吡格雷后無法達到理想的抗血小板聚集效果，氯吡格雷抵抗可以通過藥物基因組學來解釋[3]。細胞色素P450(cytochrome P450，CYP)是一組參與生物轉(zhuǎn)化的超基因家族編碼的同工酶，CYP2C19作為 CYP藥物代謝酶中的重要一員，是氯吡格雷在體內(nèi)生物代謝的關(guān)鍵酶。CYP2C19基因遺傳變異可導致酶活性的個體差異，使人群中出現(xiàn)超快代謝者、快代謝者、中間代謝者和慢代謝者4種表型[4]。本研究對河南省1 182例心腦血管病患者CYP2C19基因型和代謝表型分布特征進行統(tǒng)計分析，研究其分布，以期為心腦血管病患者CYP2C19基因篩查和氯吡格雷個體化用藥提供一定理論依據(jù)，協(xié)助臨床減少不良心血管事件的發(fā)生。

1 資料與方法

1.1 一般資料以2020年1月至2021年5月送檢至鄭州金域臨床檢驗中心有限公司的1 182例心腦血管病患者標本為研究對象。(1)納入標準：①在醫(yī)生指導下長期服用氯吡格雷的患者；②年齡≥18歲；③臨床診斷為心腦血管疾病。(2)排除標準：①有嚴重心、肝、腎疾病；②有抗血小板治療禁忌證?；颊吣挲g為18～99(62.98±11.73)歲，其中18～40歲44例，41～65歲609例，大于65歲529例。男752例，女430例。

1.2 DNA提取方法抽取患者外周血2 mL于乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)抗凝管中，顛倒混勻后吸取200 μL，按照QIAamp DNA Blood Mini Kit(51106)試劑盒說明書提取DNA，用Nanodrop檢測待檢基因組DNA，確保DNA水平在10 mg·L-1以上，260 nm和280 nm處吸光度比值(A260/A280)為1.6～2.0。

1.3 基因分型提取好的DNA經(jīng)PCR擴增，SAP純化，單堿基延伸反應，樹脂脫鹽純化后將樣品點樣到芯片上，用Agena MassARRAY?Analyzer 4進行質(zhì)譜檢測，用Typer Analyzer軟件分析CYP2C19基因型。根據(jù)CYP2C19的基因類型，定義CYP2C19*17/*17、*1/*17為超快代謝型，CYP2C19*1/*1為快代謝型，CYP2C19*1/*2、*1/*3、*2/*17、*3/*17為中間代謝型，CYP2C19*2/*2、*2/*3、*3/*3為慢代謝型。

2 結(jié)果

2.1CYP2C19基因多態(tài)性分布1 182例心腦血管疾病患者CYP2C19基因多態(tài)性檢測結(jié)果見表1，共檢出10種基因型和4種代謝表型。CYP2C19*1/*1基因型出現(xiàn)頻率最高，為40.69%，CYP2C19*17/*17基因型出現(xiàn)頻率最低，為0.08%。超快代謝型、快代謝型、中間代謝型和慢代謝型分別占1.95%、40.69%、43.74%和13.62%。見表1。

表1 河南省1 182例心腦血管疾病患者CYP2C19基因型和代謝表型分布

2.2CYP2C19代謝表型在不同性別患者中的分布根據(jù)性別將1 182例患者分為兩組，男性組752例，占63.62%；女性組430例，占36.38%。男、女兩組患者CYP2C19代謝表型分布差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同性別者CYP2C19代謝表型分布[n(%)]

2.3CYP2C19代謝表型在不同年齡患者中的分布根據(jù)1 182例心腦血管疾病患者的平均年齡將其分為兩組，<62.98歲組共533例，占45.09%；>62.98歲組共649例，占54.91%。不同年齡組患者CYP2C19代謝表型分布差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同年齡者CYP2C19代謝表型分布[n(%)]

2.4CYP2C19代謝表型在不同地區(qū)的分布對河南、重慶、福建和湖北CYP2C19代謝表型分布進行統(tǒng)計學比較，結(jié)果顯示，河南省CYP2C19代謝表型分布與文獻報道的重慶[5]、福建省[6]和湖北省[7]CYP2C19代謝表型分布情況相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同地區(qū)CYP2C19代謝表型分布[n(%)]

3 討論

氯吡格雷是一種抗血小板藥物，在心腦血管疾病的防治中效果顯著。氯吡格雷作為一種前體藥物，經(jīng)腸道消化吸收后85%～90%酯化為無活性成分，僅有10%～15%通過肝藥酶CYP2C19代謝為活性產(chǎn)物，與表面的二磷酸腺苷受體不可逆地結(jié)合，從而發(fā)揮抗血小板聚集的治療作用[2,8]。2010年美國食品藥品監(jiān)督管理局修改的氯吡格雷說明書中用黑框警示：CYP2C19基因檢測結(jié)果應作為醫(yī)生調(diào)整治療策略的參考[9]。因此，氯吡格雷基因多態(tài)性檢測在指導個體化抗血小板治療中具有重要意義。

CYP2C19具有多個等位基因，亞洲人群常見的等位基因是CYP2C19*2、*3，CYP2C19*17是一種新的等位基因，是近年來的研究熱點，但在中國人群中分布較少[10]。本研究對1 182例心腦血管疾病患者進行CYP2C19基因多態(tài)性檢測，檢測CYP2C19*2、*3及*17等位基因和相應代謝表型，10種基因型全部均有檢出，包括*17/*17、*1/*17、*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*17、*3/*17、*2/*2、*2/*3、*3/*3。國內(nèi)關(guān)于CYP2C19*17/*17基因型的報道很少[3]，本研究檢出1例CYP2C19*17/*17基因型患者。超快代謝型出現(xiàn)頻率為1.94%，該代謝型患者血小板抑制作用強，治療推薦使用說明書推薦劑量，即每日75 mg，但超快代謝型患者在服用氯吡格雷時應密切注意出血風險；快代謝型出現(xiàn)頻率為40.69%，該代謝型患者血小板抑制作用正常，治療推薦使用說明書推薦劑量，每日75 mg；中間代謝型患者最多，出現(xiàn)頻率為43.75%，該代謝型患者血小板抑制作用較弱，心腦血管事件發(fā)生風險較高，考慮換用其他藥物；慢代謝型出現(xiàn)頻率為13.60%，該代謝型患者血小板抑制作用很弱，心腦血管事件發(fā)生風險高，考慮換用其他藥物。在本研究納入的河南省心腦血管疾病患者中，中間代謝型和慢代謝型共占57.35%，即超過一半的人存在不同程度的氯吡格雷抵抗。因此，建議對使用或擬用氯吡格雷的患者進行CYP2C19基因檢測，根據(jù)患者的基因代謝型及時調(diào)整劑量或更換其他藥物，以獲得預期治療效果及避免不良心血管事件的發(fā)生。為全面了解河南省心腦血管疾病患者氯吡格雷CYP2C19基因多態(tài)性分布特點，本研究對比了河南省與重慶、福建省和湖北省CYP2C19代謝表型分布，結(jié)果顯示不同地區(qū)CYP2C19代謝表型分布差異有統(tǒng)計學意義，說明河南省心腦血管疾病患者CYP2C19代謝表型具有一定的地域特異性，這可能與該地區(qū)人群遺傳背景、生活環(huán)境、飲食結(jié)構(gòu)和習慣等有一定關(guān)系。男女患者CYP2C19代謝表型差異無統(tǒng)計學意義，不同年齡患者CYP2C19代謝表型差異也無統(tǒng)計學意義，說明常染色體上CYP2C19基因的基因型與性別無關(guān)，年齡變化對CYP2C19基因的基因型也無影響。

綜上所述，河南省心腦血管疾病患者CYP2C19基因存在多態(tài)性，全部10種基因型均有檢出。CYP2C19中間代謝型和慢代謝型患者所占比率較高，標準劑量氯吡格雷用藥可能無法達到預期治療效果。河南省CYP2C19代謝表型分布與其他地區(qū)存在一定差異，提示用藥前檢測當?shù)鼗颊逤YP2C19基因型和代謝表型具有重要意義。CYP2C19*17/*17基因型出現(xiàn)頻率雖然較低，但對于檢出的患者具有較重要的出血風險警示意義。用藥前檢測CYP2C19基因多態(tài)性不僅可以協(xié)助醫(yī)生制定精準的用藥方案，也可以作為調(diào)整氯吡格雷劑量或更換藥物的依據(jù)，有助于減少心腦血管不良事件的發(fā)生。