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        精子DNA碎片指數(shù)對不同年齡女性體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的影響

        2022-02-26 07:37:58杜超侯開波張寧關小川劉星池于月新
        生殖醫(yī)學雜志 2022年2期
        關鍵詞:囊胚女方精子

        杜超,侯開波,張寧,關小川,劉星池,于月新

        (中國人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院生殖醫(yī)學科,沈陽 110016)

        近年來,不孕癥患者的數(shù)量逐年增加,根據(jù)WHO數(shù)據(jù)顯示,約15%有生育需求的夫婦受到不孕癥的困擾,其中男性因素約占不孕不育因素的50%[1]。過去很長一段時間內(nèi),人們對男性生殖力的評估仍然依賴于傳統(tǒng)的精液分析,但仍有約15%的不育男性精液常規(guī)結(jié)果為正常[2],這說明單純分析精子數(shù)量和活力并不能全面評估男性生育力。隨著研究的深入,精子DNA碎片指數(shù)(DFI)逐漸受到關注,有研究認為,DFI對精子受精能力、胚胎形成和發(fā)育以及妊娠結(jié)局有著重要影響[3-4];但也有研究認為DFI對于男性生育力評估和輔助生殖結(jié)局預測的價值有限[5-6]。因此,本研究在嚴格控制女方因素的影響后,用精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析(SCSA)法檢測精子DFI,觀察不同DFI患者的妊娠結(jié)局,探討精子DFI對體外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠結(jié)局的影響。

        一、資料與方法

        1.研究對象及分組:收集2016年1月至2020年12月于北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院行IVF-ET治療的不孕不育夫婦為研究對象,共納入1 079個取卵周期(1 441個移植周期)。納入標準:(1)夫妻雙方染色體檢查均正常;(2)男方于助孕前3個月內(nèi)行DFI檢查;(3)女方促排卵方案為長方案或改良長方案。排除標準:(1)男方存在嚴重的少精子癥;(2)女方存在子宮畸形、宮腔粘連、內(nèi)膜過薄等不利胚胎著床因素;(3)女方存在嚴重的甲亢、甲減、糖尿病等內(nèi)分泌疾??;(4)女方存在多囊卵巢綜合征(PCOS)或卵巢功能減退等;(5)未隨訪至最終妊娠結(jié)局者。

        根據(jù)DFI值將患者分為3組:A組:DFI≤15%(精子DNA完整性好),共845個周期;B組:15%

        2.精子DFI檢測:DFI的有效檢測方法主要有SCSA、單細胞凝膠電泳(SCGE)試驗和精子染色質(zhì)擴散(SCD)試驗等[7]。本研究采用敏感性和特異性良好,并且具有高度可比性的SCSA方法進行DFI檢測[8]。使用美國BD公司的流式細胞儀,檢測試劑盒為精子核完整性染色試劑盒(浙江星博生物),嚴格按照產(chǎn)品說明書進行操作。

        3.促排卵及IVF:促排卵方案采用標準長方案或改良長方案,期間超聲監(jiān)測卵泡發(fā)育情況,待卵泡發(fā)育成熟后肌肉注射HCG(珠海麗珠),36 h后B超引導下取卵。將男性精液采用上游法和密度梯度離心法進行優(yōu)化處理后行IVF,受精16~18 h后觀察受精情況,常規(guī)胚胎培養(yǎng)。胚胎培養(yǎng)第3天(D3)觀察胚胎質(zhì)量。D3胚胎評分標準參照卵裂期胚胎評分標準[9]:D2細胞數(shù)為2~4,D3細胞數(shù)為7~9,細胞大小相對均勻、形態(tài)相對規(guī)則、碎片<25%為優(yōu)質(zhì)胚胎。視胚胎發(fā)育情況決定是否行囊胚培養(yǎng),囊胚評分參照Gardner評分[10]:滋養(yǎng)外胚層細胞及內(nèi)細胞團評分均為A或B的囊胚為優(yōu)質(zhì)囊胚,有任一者評分為C的囊胚為非優(yōu)質(zhì)囊胚,兩者評分均為C的囊胚為不可利用囊胚。

        4.胚胎移植及妊娠判斷:根據(jù)患者情況選擇新鮮胚胎移植或凍融胚胎移植,移植后行黃體支持。胚胎移植14 d后隨訪患者血HCG值,移植28 d后行超聲檢查,如宮腔內(nèi)監(jiān)測到孕囊及胎心,定義為臨床妊娠并記錄著床胚胎數(shù),隨訪至妊娠結(jié)束。

        5.觀察指標及判斷標準:正常受精率=正常受精卵數(shù)/受精卵總數(shù)×100%;D3優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/正常受精數(shù)×100%;囊胚形成率=囊胚形成數(shù)/囊胚培養(yǎng)數(shù)×100%;優(yōu)質(zhì)囊胚率=優(yōu)質(zhì)囊胚數(shù)/囊胚培養(yǎng)數(shù)×100%;種植率=著床胚胎數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%;臨床妊娠率=臨床妊娠周期數(shù)/所有移植周期數(shù)×100%;活產(chǎn)率=活產(chǎn)周期/所有移植周期數(shù)×100%。

        二、結(jié)果

        1.不同DFI組患者的基本資料比較:3組患者除C組男、女方年齡顯著高于A組(P<0.05)外,其余指標如女方體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、基礎FSH(bFSH)、抗苗勒管激素(AMH)、基礎竇卵泡數(shù)(AFC)等均無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

        表1 不同DFI組患者基本資料比較

        2.取卵周期中不同年齡各DFI組患者受精及胚胎發(fā)育情況比較:為盡力消除男、女方年齡對妊娠結(jié)局的干擾,將3組患者按照女方年齡分為<35歲和≥35歲進行分層分析。<35歲患者中,B、C組的優(yōu)質(zhì)囊胚率顯著低于A組(P<0.05),3組間的正常受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率無顯著性差異(P>0.05),囊胚形成率隨DFI升高有降低趨勢,但尚無顯著性差異(P>0.05)?!?5歲患者中,C組患者正常受精率顯著低于A、B組(P<0.05),3組患者優(yōu)質(zhì)胚胎率無顯著性差異(P>0.05),囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率隨DFI升高有下降趨勢,但尚無顯著性差異(P>0.05)(表2)。

        表2 取卵周期中不同年齡各DFI組胚胎發(fā)育及受精情況比較(%)

        3.移植周期中不同DFI組胚胎移植情況及不同年齡各DFI組妊娠結(jié)局比較:1 079個取卵周期共進行了1 441次胚胎移植(A組1 114個周期,B組281個周期和C組46個周期)。為了更加準確地分析不同DFI組患者胚胎移植后的妊娠結(jié)局,對患者移植周期的女方年齡、平均移植胚胎數(shù)和移植日子宮內(nèi)膜厚度進行比較,3組間均無顯著性差異(P>0.05)(表3)。不同年齡各DFI組妊娠結(jié)局比較,A組患者種植率、臨床妊娠率和活產(chǎn)率均有高于其余兩組的趨勢,但尚無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

        表3 移植周期中不同DFI組患者胚胎移植情況比較

        表4 不同年齡各DFI組妊娠結(jié)局比較(%)

        三、討論

        近年來,男性因素在輔助生殖中的作用越來越受到人們的重視。精子非整倍體、表觀遺傳學特征、精蛋白及組蛋白等因素都可能影響胚胎質(zhì)量甚至妊娠結(jié)局[11],精子DFI被認為是一種評估男性生育力的有力指標[12]。但精子DFI檢測方法眾多,加之研究人群和方法不盡相同,針對DFI的具體影響仍然存在爭論。本研究將患者按照不同DFI進行分組,比較各組間妊娠結(jié)局的差異,探討DFI對于輔助生殖結(jié)局的影響。

        研究結(jié)果顯示,當女方年齡≥35歲時,DFI增加會顯著降低患者的正常受精率,提示在高齡患者中,DFI過高可能影響精子的受精能力。有研究表明,精子DFI與精子活力和形態(tài)存在一定相關性,這可能是導致其受精能力降低的主要原因[13]。3組的優(yōu)質(zhì)胚胎率并無顯著性差異(P>0.05)。隨著精子DFI升高,囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率有下降趨勢,但尚無統(tǒng)計學差異(P>0.05),這可能與樣本量相對不足有關,有待后續(xù)進一步擴大樣本量的研究。對于年齡<35歲的患者,精子DFI的升高并不會降低患者的正常受精率,但行囊胚培養(yǎng)時,DFI≤15%組患者的優(yōu)質(zhì)囊胚率顯著高于15%

        本研究對患者移植周期的妊娠結(jié)局進行比較發(fā)現(xiàn),不同年齡段的女性各DFI組的種植率、臨床妊娠率和活產(chǎn)率并無顯著性差異(P>0.05),提示在移植周期中,DFI的增加對患者最終妊娠結(jié)局無明顯影響。既往研究認為,配偶精子DFI數(shù)值高的女性復發(fā)性流產(chǎn)率顯著高于其配偶精子DFI數(shù)值較低者(P<0.05)[17]。但近年來也有研究得出不同結(jié)論[18-19],Brahem等[20]發(fā)現(xiàn)經(jīng)過密度梯度洗滌和上游處理后的精子DFI會顯著降低;王青欣等[21]則認為處理后的精子在DFI和活力方面均得到明顯改善,因此洗滌前的精子DFI檢測價值有限。另外,女性卵泡的修復作用不容忽視,卵母細胞能夠在整個卵子發(fā)生過程中修復DNA損傷,并提供基因產(chǎn)物,負責修復受精后兩個親本基因組的DNA損傷[22-23]。因此,在多種復雜因素的作用下,精子DFI對最終妊娠結(jié)局的直接影響較為有限。

        綜上所述,本研究通過比較不同DFI患者IVF的妊娠結(jié)局發(fā)現(xiàn),雖然DFI對患者IVF-ET妊娠結(jié)局存在一定的影響,但其對臨床妊娠率和活產(chǎn)率等的影響較為有限。目前關于精子DFI 對IVF-ET妊娠結(jié)局的影響仍難有定論,需要多中心、更大樣本量的前瞻性研究加以探討。

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