■唐子婷 金 超 陳 云 杜 紅 易 鑫 張 帥 劉 瑩 舒 剛*

（1.四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院，四川 成都 610000；2.南充市順慶區(qū)動物疫病預防控制中心，四川 南充 637000）

雞肉在我國是第二大消費肉品，肉雞的健康養(yǎng)殖是保證雞肉安全的前提，飼料添加劑在動物養(yǎng)殖中發(fā)揮重要作用，保證著動物健康安全，同時還能提高養(yǎng)殖的經濟效益。隨著人們對食品安全越來越重視，藥物飼料添加劑在養(yǎng)殖行業(yè)中逐漸消失[1]。新型綠色的抗生素替代品已成為目前研究的熱點，植物黃酮種類繁多，具有抗氧化[2]、抗腫瘤[3]、抗菌[4]、促進生長、改善肉質[5]等多種生物學作用和安全高效、不易產生耐藥性、無殘留等優(yōu)點[6-7]。

辣木葉粗黃酮是辣木葉提取物的主要活性成分，主要是槲皮素和山奈酚，易溶于水、甲醇和乙醇等極性較大溶劑[8-10]。朱建忠等[11]研究發(fā)現，辣木黃酮對腦有一定的保護作用，可以改善糖尿病腦病大鼠的認知功能障礙及記憶能力，改善海馬組織病變。李欣[12]的研究發(fā)現，辣木葉粗黃酮可以提高運動后小鼠體內的肝糖原和肌糖原儲備量以及抗氧化能力，起到緩解運動性疲勞的作用。饒體宇等[13]研究表明，辣木葉提取物可以改善蛋鴨的血清和蛋黃抗氧化性能、調節(jié)脂質代謝并增加免疫球蛋白的分泌量。此外，辣木葉粗黃酮還可以提高蛋雛鴨的飼料利用率、免疫及抗氧化功能[14]。但目前關于辣木葉粗黃酮對雛雞生長性能、免疫、腸道菌群及抗氧化功能的影響鮮有報道。因此，本研究旨在探究辣木葉粗黃酮對天府雛雞生長性能、免疫功能、腸道菌群及抗氧化功能的影響，為開發(fā)禽用天然添加劑提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

辣木葉粗黃酮，由四川農業(yè)大學獸藥創(chuàng)新制劑工程技術研究中心自制（總黃酮含量為80%）。1日齡健康天府肉雞雄性雛雞由四川農業(yè)大學家禽育種場提供。

1.2 試驗動物及日糧

選用450只健康、體重相似的1日齡天府肉雞雄性雛雞，隨機分為3 組，每組6 個重復，每個重復25 只。Ⅰ組作為空白對照，飼喂基礎飼糧；Ⅱ組飼喂添加30 mg/kg辣木葉粗黃酮的飼糧；Ⅲ組飼喂添加120 mg/kg辣木葉粗黃酮的飼糧，試驗共計28 d。參照NRC（1994）營養(yǎng)需要和《雞飼養(yǎng)標準》（NY/T 33—2004）配制粉料，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗過程中，試驗雞自由采食，充足飲水，按正常免疫程序進行免疫接種，其他管理符合天府肉雞對環(huán)境要求。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.3 生長性能的測定

于試驗第1、7、14、21、28 d，每天09：00之前以重復為單位空腹稱重，統計各階段試驗雞的平均體重（BW）、平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）及料重比（F/G）。

平均體重（g）=總體重/試驗雞數

平均日增重（g）=增重/（試驗天數×試驗雞數）

平均日采食量（g）=飼料消耗量/（試驗天數×試驗雞數）

料重比=飼料消耗量/增重

1.4 免疫器官指數的測定

于試驗第14、28 d，雞稱重后頸靜脈放血致死，取脾臟、胸腺與法氏囊，濾紙吸干水分后剝離脂肪和無關組織，電子天平稱重。根據雞體重計算雞的免疫器官指數。

免疫器官指數（g/kg）=免疫器官重量（g）/雞活重（kg）

1.5 血清細胞因子的測定

于試驗第14、28 d，頸靜脈采血2 mL，室溫靜置4 h，3 500 r/min 離心10 min，分離血清于EP 管中，-20 ℃保存待用。按照試劑盒說明書采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定雞血清白介素-2（IL-2）、白介素-12（IL-12）、γ-干擾素（IFN-γ），試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.6 腸道菌群計數

于試驗第14、28 d，空腹屠宰后立即取出左側盲腸，無菌操作取0.5 g盲腸內容物，在4.5 mL無菌生理鹽水中振蕩5 min，離心10 min（1 000 r/min），采用倍比稀釋法取上清液連續(xù)稀釋8 次備用。每組取106、107、108稀釋液各30 μL于培養(yǎng)基上，劃線涂布法均勻涂抹，每個樣品做三個重復。菌群數量以每克腸道內容物所含細菌群落總數的對數[lg (CFU/g)]表示。大腸桿菌選用麥康凱氏培養(yǎng)基有氧培養(yǎng)18 h，乳酸桿菌選用乳酸細菌培養(yǎng)基無氧培養(yǎng)24 h 和雙歧桿菌選用TPY培養(yǎng)基無氧培養(yǎng)36 h，培養(yǎng)基購自杭州微生物試劑有限公司。

1.7 血清抗氧化指標的測定

取1.5中血清，嚴格按照測定試劑盒說明書操作，采用羥胺法測定血清中總超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase，T-SOD）活性，采用比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，采用鉬酸銨法測定過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性，采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量，采用比色法測定總抗氧化能力（Totalantioxidant capacity，T-AOC），試劑盒購自南京建成工程生物研究所。

1.8 數據處理

采用Excel 2010 對數據進行初步處理，用SPSS 22.0 軟件的方差分析法（ANOVA）進行單因素方差分析，試驗數據用“平均值±標準差”表示，P＜0.05為差異顯著，P＞0.05為差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞生長性能的影響（見表2）

表2 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞生長性能的影響

由表2 可知，與Ⅰ組相比，在7、14 d 和28 d時，Ⅱ、Ⅲ組的BW 顯著提高（P＜0.05）。Ⅱ、Ⅲ組的ADG 均提高，1～28 d 時分別提高了31.4%、24.1%（P＜0.05）。Ⅱ、Ⅲ組的F/G均降低，1～28 d時分別降低了25.3%、21.8%（P＜0.05）。各組ADFI 差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞免疫功能的影響（見表3、表4）

表3 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞免疫器官的影響

表4 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞血清細胞因子的影響（pg/mL）

由表3 可見，與Ⅰ組相比，14 d 時，Ⅱ、Ⅲ組的胸腺指數分別提高了27.1%、38.4%（P＜0.05）；Ⅲ組的法氏囊指數提高了24.4%（P＜0.05）。28 d時，Ⅱ、Ⅲ組的脾臟指數分別提高了58.1%、76.1%（P＜0.05）；Ⅱ組的胸腺指數提高了19.5%（P＜0.05）；Ⅲ組的法氏囊指數降低了31.3%（P＜0.05）。

由表4 可知，與Ⅰ組相比，14 d 時，Ⅱ、Ⅲ組的血清IL-2、IL-12、IFN-γ的含量顯著提高（P＜0.05），Ⅱ組分別提高65.7%、90.5%、65.0%，Ⅲ組分別提高72.33%、121.6%、61.6%。與Ⅰ組相比，28 d 時，Ⅱ組的血清IL-2、IL-12、IFN-γ含量提高，但僅對IL-2 有顯著性影響（P＜0.05），提高了39.5%；Ⅲ組的血清IL-2、IL-12、IFN-γ含量分別提高62.2%、43.8%、49.1%（P＜0.05）。

2.3 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞盲腸菌群數量的影響（見表5）

表5 辣木葉黃酮對天府肉雛雞盲腸菌群的影響[lg(CFU/g)]

由表5可見，與Ⅰ組相比，在14 d時，Ⅱ、Ⅲ組的大腸桿菌數量降低了10.4%（P＞0.05）、60.1%（P＜0.05）；Ⅱ、Ⅲ組的乳酸桿菌數量提高（P＞0.05）；Ⅱ、Ⅲ組的雙歧桿菌數量分別提高了76.5%（P＜0.05）、6.1%（P＞0.05）。與Ⅰ組相比，在28 d時，Ⅱ、Ⅲ組的大腸桿菌數量分別降低了41.3%、69.4%（P＜0.05）；Ⅱ、Ⅲ組的乳酸桿菌量分別提高了141.9%、76.4%（P＜0.05）；Ⅱ、Ⅲ組的雙歧桿菌量分別提高了30.3%、16.1%（P＜0.05）。

2.4 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞血清抗氧化能力的影響（見表6）

由表6可知，與Ⅰ組相比，在14 d和28 d時，Ⅲ組的T-SOD 含量分別提高29.1%、122.7%（P＜0.05）；在28 d 時，Ⅲ組的GSH-Px 含量提高15.8%（P＜0.05）；在14 d 時，Ⅱ、Ⅲ組CAT 含量提高，且Ⅲ組提高了163.6%（P＜0.05）；在28 d時，Ⅱ、Ⅲ組CAT含量分別提高229.9%、257.1%（P＜0.05）。在28 d 時，Ⅱ、Ⅲ組MDA含量分別降低46.0%、50.0%（P＜0.05）；在14 d和28 d 時，Ⅱ、Ⅲ組T-AOC 含量均提高，其中Ⅲ組分別提高89.2%、264.0%（P＜0.05）。

表6 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞血清抗氧化功能的影響

3 討論

3.1 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞生長性能的影響

楊汝才等[14]研究結果表明，在蛋雛鴨飼糧中添加辣木黃酮能顯著提高平均日增重，降低料重比。本試驗與前人研究結果一致，結果表明，30 mg/kg和120 mg/kg辣木葉粗黃酮均可以提高天府肉雛雞日增重，降低料重比，提高生長性能和減少飼養(yǎng)成本。

3.2 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞免疫功能的影響

免疫器官指數反映動物機體免疫功能，一般認為免疫器官指數增加是免疫增強的表現。家禽免疫器官（胸腺、脾臟、法氏囊等）的重量是評價營養(yǎng)素對家禽免疫力影響的重要指標。Liaqat等[15]用辣木葉粉替代菜籽粕，發(fā)現可以增強雞對新城疫和傳染性法氏囊病疫苗接種的免疫反應。Khan 等[16]在肉雞飼糧中添加1.2%辣木葉粉，發(fā)現可提高肉雞增重，促進腸道健康，有免疫調節(jié)作用。說明辣木能提高禽類的免疫功能，而一個物質能在動物機體發(fā)揮一定功能常與其中含有的活性物質有關系。楊汝才等[14]研究發(fā)現0.4%辣木黃酮能顯著提高蛋雛鴨血清免疫蛋白A含量，說明辣木黃酮有提高機體免疫的功能。Gupta等[17]研究發(fā)現辣木葉乙醇提取物具有免疫調節(jié)作用，能夠提高小鼠胸腺和脾臟指數、吞噬細胞活性、血液白細胞含量。黃茂林等[18]通過建立小鼠免疫抑制模型，發(fā)現辣木葉乙醇提取物能通過促進免疫球蛋白IgG 的合成，增加單核細胞吞噬功能，增加免疫器官指數而發(fā)揮免疫調節(jié)作用。本試驗結果表明，在雛雞的不同生長階段，辣木葉黃酮對雛雞的免疫器官的生長指數影響不同，但都表現為升高的趨勢。說明辣木葉粗黃酮可以促進天府肉雛雞免疫器官的發(fā)育。

IL-2、IL-12 和IFN-γ等促炎因子的含量增加有利于消除宿主病原體，維持機體健康。另外促炎因子的產生還能維持促炎和抗炎之間的平衡，因其啟動免疫的同時還會觸發(fā)相關抗炎因子的分泌，導致抑制促炎因子的合成、黏附分子的表達以及特異性細胞因子抑制劑的水平增加，以形成一個正反饋回路[19]。但過多的或長期的促炎因子分泌會觸發(fā)機體炎癥反應，甚至還能導致細胞損傷[20]。本試驗結果表明，在基礎日糧中添加辣木葉粗黃酮能提高雛雞血清IL-2、IL-12、IFN-γ的含量，說明辣木葉粗黃酮能調節(jié)天府肉雞的免疫功能，但其對抗炎因子的調節(jié)還需做進一步研究，從而更全面準確地了解辣木葉粗黃酮對肉雞免疫功能的調節(jié)作用。

3.3 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞盲腸菌群數量的影響

正常腸道菌群在促進免疫系統發(fā)育、維持正常免疫功能，協同頡頏病原菌入侵方面發(fā)揮著重要作用[21]。動物腸道中大腸桿菌數目的增加往往導致致病菌的增加，損傷動物機體，引起動物發(fā)病。乳酸桿菌和雙歧桿菌能夠增強動物體內的免疫力，是動物體內的有益菌群[22]，有益菌群的增加，使得腸道生態(tài)平衡，可以促進動物機體健康[23]。因此其數量直接反映動物的健康程度。有研究表明，辣木能調節(jié)腸道菌群[24]。本試驗結果表明，辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞的腸道菌群有良好的調節(jié)作用，顯著減少大腸桿菌的數量，增加乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量。

3.4 辣木葉粗黃酮對天府肉雛雞血清抗氧化功能的影響

動物機體清除體內自由基、分解過氧化物以及清除發(fā)揮催化作用的金屬離子主要通過非酶促和酶促兩種體系，其中酶促體系則主要包含CAT、SOD、GSH-Px等[25-26]。辣木葉粗黃酮在體外能清除自由基[27]。Elizabeth 等[28]研究表明辣木中黃酮類化合物含量高，具有很好的抗氧化能力，能降低大鼠MDA 水平，改善CAT、SOD、GSH、GSH-Px水平。楊汝才等[14]研究也發(fā)現，辣木黃酮能提高雛蛋鴨血清SOD 含量，含量為0.4%時能顯著降低MDA含量。本研究與其研究結果相似，在基礎飼糧中添加辣木葉粗黃酮可提高天府肉雛雞血清中T-SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC含量，降低MDA 含量，說明辣木葉粗黃酮能提高天府肉雛雞抗氧化能力。

4 結論

①日糧中添加30 mg/kg 和120 mg/kg 辣木葉粗黃酮均可提高天府肉雛雞生長性能。增加了平均體重和平均日增重，并減少了料重比。

②日糧中添加30 mg/kg 和120 mg/kg 辣木葉粗黃酮均可促進免疫，增加了免疫器官指數和血清細胞因子水平。

③日糧中添加30 mg/kg 和120 mg/kg 辣木葉粗黃酮均可調節(jié)盲腸菌群，增加了盲腸有益菌群數量并減少有害菌群數量。

④日糧中添加30 mg/kg 和120 mg/kg 辣木葉粗黃酮均可提高抗氧化能力。