程曦，黃凝，李鴻泉，周楷棟，鄧向亮

(廣東藥科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，廣東 云浮 527300)

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病，免疫治療被認為是當前最具前景的腫瘤治療方法，但是也需要不斷尋找新的策略以解決臨床上存在的耐藥、響應(yīng)度低等問題[1-2]。枸杞是茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實，有益精明目、補養(yǎng)肝腎的功效，是藥食兩用的中藥材。枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide, LBP)是枸杞的主要活性成分，藥理作用廣泛，包括免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、降血糖血脂和抗腫瘤等[3-4]。枸杞多糖的免疫調(diào)節(jié)活性較為顯著，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)枸杞多糖對淋巴細胞、固有免疫細胞和紅細胞功能都有影響，并且越來越多的研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖通過調(diào)節(jié)免疫在部分腫瘤的化療、免疫治療中有減毒增效的作用。本文對枸杞多糖的免疫調(diào)節(jié)作用與機制以及基于其免疫調(diào)節(jié)作用在腫瘤治療中的應(yīng)用研究進行綜述，分析其聯(lián)合免疫治療在防治腫瘤中的應(yīng)用，為解決腫瘤免疫治療遇到的難題提供中醫(yī)藥策略支持。

1 枸杞多糖對免疫細胞功能的影響

現(xiàn)有研究表明，枸杞多糖主要影響淋巴細胞、樹突狀細胞和巨噬細胞免疫細胞功能，此外對紅細胞免疫功能也有一定影響。

1.1 對淋巴細胞功能的影響

T、B淋巴細胞在機體適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中扮演著關(guān)鍵的角色，研究表明枸杞多糖對T、B淋巴細胞功能具有顯著影響。枸杞多糖可以協(xié)同PHA刺激人外周血淋巴細胞增殖，由于PHA是T細胞絲裂原，推測枸杞多糖可以協(xié)同PHA促進T細胞增殖[5]。枸杞多糖還可以促進人T細胞分泌IL-2和IFN-γ[6]，提示該多糖可以增強T細胞功能。枸杞多糖對T細胞功能的影響在動物研究上得到了進一步的證明。據(jù)報道枸杞多糖可以激活小鼠脾中CXCR5+PD-1+濾泡輔助性T細胞(T follicular helper cells, Tfh)，增加IL-21分泌量，并且可以協(xié)同rAd5VP1提高Tfh細胞生成比例[7]；另外枸杞多糖可以對抗環(huán)磷酰胺對小鼠T細胞功能的抑制作用[8]。眾所周知，體液免疫功能主要由B細胞介導(dǎo)，研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖可以通過Tfh細胞促進B細胞介導(dǎo)的體液免疫功能[7]，提高小鼠血清IgG和IgM分泌水平[9]。NK細胞也屬于淋巴細胞，文獻報道枸杞多糖可以提高人NK細胞的殺傷活性[10]。而一項臨床研究結(jié)果則顯示跆拳道運動員在訓(xùn)練期間服用枸杞多糖，對T細胞、NK細胞和體液免疫功能均有調(diào)節(jié)作用[11]。

1.2 對樹突狀細胞和巨噬細胞功能的影響

樹突狀細胞(Dendritic cell，DC)和巨噬細胞都是固有免疫細胞，又是抗原提呈細胞。其中DC是專職的抗原提呈細胞，研究表明枸杞多糖糖蛋白和脂質(zhì)體都可以促進DC表型和功能成熟。在體外培養(yǎng)條件下枸杞多糖可以提高骨髓來源DC上調(diào)細胞表面CD80、CD86和MHC II類分子表達水平[12-14]；而且該多糖對人來源的DC也有類似的調(diào)節(jié)作用[15]。由于CD80、CD86和MHC II類分子是成熟DC的標志物，因而上述研究結(jié)果提示枸杞多糖可以促進DC表型和功能成熟。巨噬細胞既是重要的抗原提呈細胞，又是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在機體抗腫瘤、抗感染中發(fā)揮著重要作用。體外細胞實驗和動物實驗研究結(jié)果都表明枸杞多糖都可以促進巨噬細胞表達CD86和MHC II等活化相關(guān)分子，分泌NO和炎癥因子(例如IL-6、TNF-α)，提高巨噬細胞吞噬能力[16-18]。

1.3 對紅細胞免疫功能的影響

紅細胞免疫是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在機體抗腫瘤免疫方面也發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖對紅細胞免疫功能也有調(diào)節(jié)作用。阿霉素化療顯著抑制小鼠紅細胞免疫功能，而枸杞多糖對阿霉素化療小鼠紅細胞Band-3蛋白表達、自然殺傷細胞增強因子(Natural killer enhancing factor，NKEF) A和B表達水平均有顯著恢復(fù)作用[19]。

2 枸杞多糖調(diào)節(jié)免疫的作用機制

雖然枸杞多糖影響多種免疫細胞功能，但是總結(jié)現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其主要靶細胞很可能是DC和巨噬細胞：一方面沒有證據(jù)表明枸杞多糖可以直接激活淋巴細胞；另一方面DC和巨噬細胞表面存在多種植物多糖的受體，部分已經(jīng)被證實是枸杞多糖的作用受體，枸杞多糖可以直接促進DC和巨噬細胞功能。

研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖糖蛋白可以刺激小鼠脾細胞增殖和巨噬細胞活化，但是并不能刺激純化的T、B細胞增殖，該研究結(jié)果提示枸杞多糖的靶細胞是巨噬細胞而非淋巴細胞[20]；深入的機制研究結(jié)果顯示枸杞多糖通過TLR4-/MD2-MAPK信號通路激巨噬細胞[21]。與此相同，有研究顯示枸杞多糖對小鼠骨髓來源樹突狀細胞成熟的促進作用在使用了TLR4抑制劑后失效，隨后證明枸杞多糖是通過TLR4-Erk1/2-Blimp1信號通路促進小鼠樹突狀細胞的成熟[22]。也有研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖還可以通過TLR2/TLR4-MyD88-NF-Kb/p38通路促進樹突狀細胞表型和功能成熟[23-25]。這提示枸杞多糖對DC和巨噬細胞的激活可能存在多個受體或多條通路，而目前的研究也發(fā)現(xiàn)免疫細胞上存在多種植物多糖的受體，例如C型凝集素受體家族、甘露糖受體家族(MR)、Toll樣受體家族(TLR)、補體受體3(CR3)、清道夫受體等[26]。另外紅細胞表面存在豐富的補體受體，這也可能是枸杞多糖調(diào)節(jié)紅細胞免疫功能的受體。

枸杞多糖可以通過樹突狀細胞和巨噬細胞影響淋巴細胞功能。例如枸杞多糖可以通過促進樹突狀細胞增強Th1和Th2應(yīng)答的能力[12]，提高細胞毒性T細胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTL)殺傷腫瘤細胞的能力[27]。枸杞多糖雖然不能刺激純化的B細胞活化增殖，但是在巨噬細胞共孵育條件下可以刺激B細胞增殖[20]。此外，枸杞多糖對NK細胞功能的促進作用，可能是通過影響紅細胞免疫功能實現(xiàn)的，這是因為枸杞多糖可以提高小鼠紅細胞中NKEF表達，該類蛋白對NK細胞功能有增強作用[19]。

3 枸杞多糖通過調(diào)節(jié)免疫發(fā)揮抗腫瘤作用機制

機體免疫(尤其是CTL和NK細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫)在抗腫瘤中發(fā)揮著重要的作用。由于枸杞多糖對免疫細胞有顯著調(diào)節(jié)作用，使得其具有應(yīng)用于多種腫瘤治療的潛在價值。動物實驗發(fā)現(xiàn)枸杞多糖可以調(diào)節(jié)荷瘤動物淋巴細胞功能，例如下調(diào)膠質(zhì)瘤大鼠和肝癌小鼠調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells，Tregs)比例[28-29]，增強荷瘤動物CTL和NK細胞殺傷功能[30-31]，提高肝癌小鼠腫瘤組織中T細胞的浸潤水平、抑制T細胞功能耗竭[29]。不但如此，多項荷瘤動物和臨床研究結(jié)果顯示枸杞多糖可以減輕化療藥物免疫抑制的副作用，提高化療治療的療效：例如減輕腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后放療和化療毒副反應(yīng)及復(fù)發(fā)率，增強放化療作用[32]；改善惡性腫瘤患者放療后T細胞亞群比例變化，增加淋巴細胞轉(zhuǎn)化率[33]；增強原發(fā)性肺癌對放療的敏感性，提高放療患者外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率[34]。由此可見，枸杞多糖可以通過調(diào)節(jié)免疫發(fā)揮抗腫瘤作用，見圖1。

注：A.枸杞多糖促進樹突狀細胞和巨噬細胞提呈腫瘤抗原活化CD8+T細胞，使其分化為細胞毒性T細胞，通過細胞毒作用殺傷腫瘤細胞；B.枸杞多糖促進紅細胞分泌自然殺傷細胞增強因子，后者可以增強自然殺傷細胞殺傷腫瘤細胞的能力。圖1 枸杞多糖通過調(diào)節(jié)機體免疫細胞功能發(fā)揮抗腫瘤作用機制

4 枸杞多糖在腫瘤免疫治療上的應(yīng)用前景

近年來，通過激發(fā)荷瘤機體自身免疫功能發(fā)揮抗腫瘤作用的免疫治療在臨床應(yīng)用療效顯著，尤其是基于T細胞的免疫治療，例如PD-1/PD-L1單抗藥物以及過繼腫瘤浸潤淋巴細胞(Tumor infiltrates lymphocytes，TILs)或CAR-T療法。雖然基于T細胞的腫瘤免疫治療具有巨大應(yīng)用前景，但是隨著臨床推廣應(yīng)用，也遇到了耐藥、療效達不到預(yù)期效果等難題，例如PD-1/PD-L1單抗的耐藥、過繼TILs療法低效的問題，而聯(lián)合用藥已經(jīng)成為解決這類難題的重要策略[1-2]。以枸杞多糖為代表的中藥或提取物通過調(diào)節(jié)機體免疫功能發(fā)揮抗腫瘤的作用與腫瘤免疫治療的概念相切合，筆者認為亦可以將這類中藥歸為腫瘤免疫治療藥物，并可以根據(jù)這些藥物調(diào)節(jié)免疫特點與現(xiàn)有的基于T細胞免疫治療聯(lián)合應(yīng)用腫瘤治療。例如有研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖與IFN-α2b單抗免疫治療聯(lián)合應(yīng)用小鼠腎細胞癌治療具有協(xié)同增效的作用[35]；筆者的近期研究也發(fā)現(xiàn)枸杞多糖協(xié)同過繼TILs可以顯著抑制小鼠肝癌生長[36]。這為解決腫瘤免疫治療上面臨的耐藥、低效等問題提供了中醫(yī)藥策略支持。

5 小結(jié)和展望

近年來雖然以PD-1/PD-L1單抗為代表的腫瘤免疫治療取得了長足進步，但是由于腫瘤的復(fù)雜性，越來越多的研究認識到聯(lián)合療法具有單一療法所不具有的優(yōu)勢，能夠提高腫瘤的治療效果，在擴大免疫治療受益人群、延長患者生存期等方面具有獨特優(yōu)勢，因而逐漸成為抗腫瘤研究的主流。例如目前開展的抗PD-1/PD-L1單抗藥物臨床試驗中，有76%正在評估免疫聯(lián)合治療方案的療效，常見的有聯(lián)合化療、放療、靶向治療等[37]。本文通過綜述文獻發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖通過樹突狀細胞、巨噬細胞等固有免疫細胞增強CTL和NK細胞對腫瘤細胞的殺傷作用，這與免疫治療通過增強機體免疫功能抗腫瘤的策略不謀而合，因此枸杞多糖聯(lián)合免疫治療在腫瘤治療上具有廣闊的應(yīng)用前景，值得進一步深入研究。