楊 俊，何薛純，石 敏，丁紅梅

南通市食品藥品監(jiān)督檢驗中心 (南通 226006)

實驗室間比對方法主要有能力驗證、測量審核等形式，能力驗證是利用相同項目的實驗室間比對判斷參加者的能力，但由于受檢測領(lǐng)域和頻次的制約，有時實驗室需要確認(rèn)的能力未在能力驗證計劃之內(nèi)，測量審核則是能力驗證的有效補充。檢測結(jié)果的滿意度是判斷實驗室驗證或校準(zhǔn)該項目能力的標(biāo)準(zhǔn)，也是中國合格評定國家認(rèn)可委員會判斷實驗室能力的重要技術(shù)依據(jù)[1-2]。

有機磷農(nóng)藥是一類含有磷元素的有機化合物，常用于糧食谷物的病蟲害防治[3-5]。有機磷農(nóng)藥殺蟲效果好、易分解，但是部分有機磷農(nóng)藥有很強的毒性，污染糧食谷物，導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)，對神經(jīng)系統(tǒng)造成傷害[6]。因此準(zhǔn)確測定大米中的有機磷農(nóng)藥顯得十分重要。

針對本次測量審核外部質(zhì)量控制活動，采用三重四級桿氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測定大米粉中馬拉硫磷、毒死蜱和對硫磷含量。從實驗設(shè)計、測定結(jié)果和內(nèi)部質(zhì)控措施等方面進行結(jié)果分析，討論檢驗過程中的關(guān)鍵控制點，進一步完善和提高實驗室對糧食谷物中有機磷類農(nóng)藥殘留的檢測能力。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

二氯甲烷，色譜純，德國Merk公司；馬拉硫磷(1 000.0 μg/mL)，北京曼哈格；毒死蜱(1 000.7 μg/mL)，北京曼哈格；對硫磷(1 001.4 μg/mL)，北京曼哈格；0.22 μm有機微孔濾膜，上海安譜。

1.2 儀器與設(shè)備

三重四級桿氣質(zhì)聯(lián)用儀(7890B-7000D型)，配電子轟擊源(EI)，美國Agilent公司；A11B S025型研磨機，德國IKA公司；VM-2500型多管旋渦混合儀，廣東安勝儀器有限公司；BSA224S型電子天平，德國sartorius公司。

1.3 儀器條件

1.3.1色譜條件

色譜柱，HP-5MS(30 m×250 μm, 0.25 μm)，美國安捷倫公司。色譜柱溫度，60 ℃(保持 1 min)，然后程序升溫至170 ℃(速率:40 /min ℃)，再升溫至310 ℃(速率：10/min ℃，保持3 min)，流速1.0 mL/min；進樣口溫度280 ℃，進樣量1 μL；進樣方式為不分流進樣；載氣為氦氣，純度≥99.999%。

1.3.2質(zhì)譜條件

接口溫度280 ℃；離子源溫度280 ℃；電子轟擊源為70 eV；淬滅氣(高純氦氣)流量為2.25 mL/min，碰撞氣(高純氮氣)流量為1.5 mL/min；掃描方式為MRM多反應(yīng)監(jiān)測。3種農(nóng)藥離子對及碰撞能量見表1。

表1 3種農(nóng)藥的質(zhì)譜分析優(yōu)化參數(shù)

1.4 方法

1.4.1樣品前處理

稱取5 g樣品于50 mL具塞比色管中，準(zhǔn)確加入10.0 mL二氯甲烷，蓋好瓶塞，封口膜密封。上下顛倒混勻，置于多管旋渦混合儀中，2 500 r/min振搖30 min。取下比色管，靜置10 min。取上清液經(jīng)0.22 μm針式過濾器過濾至進樣小瓶，進樣分析。

1.4.2基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別移取馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液500 μL于5 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，濃度為100 μg/mL。吸取100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，濃度為10 μg/mL。稱取5 g空白大米粉于50mL具塞比色管中，分別加入10 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL，100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液0.04 mL、0.05 mL、0.10 mL，加入10.0 mL二氯甲烷，按樣品方法進行前處理。基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、400 ng/mL、500 ng/mL、1 000 ng/mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品提取方法的優(yōu)化

樣品提取方法有超聲萃取法、振蕩提取法、浸提法等，若采用超聲萃取或浸提法提取，當(dāng)樣品稱取大米粉5 g時，樣品量較多，大米粉容易成團粘連，影響農(nóng)藥的提取效率。本試驗選用渦旋振蕩法提取，渦旋振蕩提取轉(zhuǎn)速對大米粉在提取溶劑中的分散程度有很大的影響，當(dāng)轉(zhuǎn)速低時，大米粉與提取溶劑不能充分接觸，提取的效果較差，當(dāng)轉(zhuǎn)速增加到2 500 r/min時，大米粉樣品能充分與溶劑接觸，分散均勻，提取效率高，因此，本文采用2 500 r/min轉(zhuǎn)速下渦旋振蕩提取大米粉中的農(nóng)藥殘留。

2.2 提取時間的選擇

分別比較了不同提取時間對提取效果的影響，隨著提取時間的增加，各組分的回收率上升，當(dāng)時間增加到25～35 min時，回收率穩(wěn)定在92%～102%。提取時間超過35 min，提取試劑二氯甲烷揮發(fā)，導(dǎo)致濃度增大，回收率超過110%，因此本文選擇提取時間為30 min。

2.3 色譜分離

3種農(nóng)藥經(jīng)弱極性色譜柱分離，其中毒死蜱與對硫磷保留時間重合，但是它們的離子對信息不同，可以通過質(zhì)譜分別進行準(zhǔn)確的定性和定量。3種農(nóng)藥定性和定量離子對峰型對稱，響應(yīng)良好，見圖1。

圖1 3種農(nóng)藥多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜方法分析時，樣品的基質(zhì)效應(yīng)對待測組分的定量和定性有較大的影響[7-9]。本文選用超高惰性的稱管、色譜柱和接口，減少分析體系中的活性位點，降低基質(zhì)效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)分為基質(zhì)增強效應(yīng)和基質(zhì)減弱效應(yīng)。同時配制相同濃度的溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，考察馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷的基質(zhì)效應(yīng)。馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷基質(zhì)效應(yīng)分別為173%、131%、172%，均有顯著的基質(zhì)增強效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)不僅影響各組分的響應(yīng)值，而且對定性也有很大的影響。3種農(nóng)藥在大米粉中的定性定量離子對及離子對豐度比率見表2。因此，本文選用在空白大米粉中加入系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，配制成基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對樣品定性定量分析。

2.5 線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)

本文采用大米粉基質(zhì)外標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以目標(biāo)化合物定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3種農(nóng)藥在100～1 000 ng/mL線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷相關(guān)系數(shù)分別為0.999 9、0.997 4、0.998 2。

2.6 回收率與精密度

在空白大米粉樣品中添加3種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)含量分別為0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg，按上述前處理方法及測定條件進行回收率試驗，每個添加水平做6次平行測定，結(jié)果見表3。各化合物的回收率為89.1%～103.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～4.2%。

2.7 測量審核樣品的測定及結(jié)果反饋

稱取2份測量審核樣品進行測定，馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷結(jié)果平均值分別為：0.652 mg/kg、0.282 mg/kg、0.673 mg/kg，平行樣相對偏差分別為：1.5%、2.3%、1.1%。檢測結(jié)果保留3位有效數(shù)字進行結(jié)果上報。組織單位采用穩(wěn)健Z比分?jǐn)?shù)法進行評價，其中|Z|≤2為滿意結(jié)果；2<|Z|<3為可疑結(jié)果，|Z|≥3為不滿意結(jié)果。本次測量審核樣品Z值分別為為-0.80、-0.16、-0.51，結(jié)果滿意。

3 結(jié)論

本實驗室參加大米粉中馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷的測定測量審核外部質(zhì)量控制活動，結(jié)果滿意，表明本實驗室大米粉中馬拉硫磷、毒死蜱、對硫磷的定量定性測定能力較好。在實驗中對樣品的提取方法、時間進行前處理進行了優(yōu)化，考察了色譜分離及基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響，并通過加標(biāo)回收實驗措施進行有效的內(nèi)部質(zhì)量控制。此次測量審核完善了實驗室對檢測數(shù)據(jù)可靠性評價的管理體系，進一步提高了本實驗室對大米粉中有機磷檢測能力及實驗室的綜合檢測水平。

表2 3種農(nóng)藥的定性定量離子及離子對豐度比率

表3 大米粉空白基質(zhì)中3種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率和精密度(n=6)