劉 凌，徐紅帥，趙俊玲

艾滋病，亦稱“獲得性免疫缺陷綜合征”，是一種由于機(jī)體感染人類免疫缺陷病毒(immunodeficiency virus,HIV)所引起的全身性疾病[1]。艾滋病病毒能夠?qū)е氯梭w不同程度的免疫功能缺陷，未經(jīng)過(guò)治療的患者在疾病的晚期極易發(fā)生各種并發(fā)癥和惡性腫瘤，最終導(dǎo)致死亡[2]。艾滋病是一種危害性極大的傳染病，男性和女性均可發(fā)病。其傳染源較為特殊，感染HIV的人都是該病的傳染源，其中包括了HIV感染者和艾滋病患者。HIV病毒主要存在于傳染源的血液、精液、陰道分泌物、羊水等體液中，傳染的途徑為性接觸、經(jīng)血液以及血制品、母嬰傳播[3-4]。其發(fā)病的病因只有一種，為HIV侵襲機(jī)體之后造成感染，HIV侵犯人體的免疫系統(tǒng)，最終導(dǎo)致人體細(xì)胞的功能缺陷，然后引起各種機(jī)會(huì)性感染和腫瘤的發(fā)生[5]。該文研究了艾滋病病毒感染患者α1-抗胰蛋白酶、重組人趨化因子(recombinant human chemokines,CXCL12)、白細(xì)胞介素-15受體阿爾法(interleukin-15 receptor alpha,IL-15Rα)表達(dá)，旨在探究三者與艾滋病病毒感染患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2019年1月—2020年1月與錦州傳染病醫(yī)院病理學(xué)檢測(cè)確診為艾滋病病毒感染患者154例，為艾滋病組，男性89例，女性65例，年齡26～58(42.20±9.44)歲。另隨機(jī)選取于該院進(jìn)行體檢的健康志愿者154例作為對(duì)照組，男性有78例，女性76例，年齡21～55(38.00±13.6)歲。按照疾病的分期將患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，各期男/女分別為16/10、8/6、29/22、28/16。所有患者一般資料對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)中對(duì)艾滋病病毒感染患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 妊娠期間患者；② 合并心、肝、腎等器官功能不全者；③ 依從性差者。所有患者及家屬簽署知情通知書。

1.2 研究方法

1.2.1患者疾病分期 根據(jù)病理學(xué)和臨床癥狀檢測(cè)將患者分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期[7]，Ⅰ期亦可稱之為急性感染期；Ⅱ期可稱之為潛伏期，該病期發(fā)生時(shí)一般不會(huì)發(fā)生任何的臨床癥狀，潛伏期一般是指從感染HIV開(kāi)始到出現(xiàn)艾滋病臨床癥狀的這一段時(shí)間；Ⅲ期可稱之為艾滋病前期；Ⅳ期為典型的艾滋病期。

1.2.2取材 抽取所有患者空腹肘靜脈血5 ml，進(jìn)行離心處理，分離血清后放置-4 ℃環(huán)境下保存待用。

1.2.3CD3、CD4水平檢測(cè) 使用間接法檢測(cè)CD3、CD4水平：將待測(cè)空腹靜脈血5 ml/例傳代到5孔板中，放在溫度37 ℃、5% CO2、飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)1、2、3 d，然后再加入濃度為0.25%的胰蛋白酶進(jìn)行消化，然后用離心機(jī)2 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min收取細(xì)胞，收取細(xì)胞后使用PBS緩沖液洗滌3 min，再重復(fù)洗滌2次，洗滌完成后將以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心機(jī)分離后收集細(xì)胞后加入1 ml 碘化丙啶(propidium iodide,PI)染液，注意避光的常溫下放置1 h后，然后再用特異熒光標(biāo)記，在鞘液包裹下流動(dòng)，期間會(huì)發(fā)射出光子，流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)計(jì)數(shù)管內(nèi)T細(xì)胞亞群CD3、CD4水平。

1.2.4α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達(dá)檢測(cè) 首先使用PBS緩沖液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行沖洗，隨后裂解30 min，裂解后測(cè)定其蛋白濃度。取得20 μg/孔蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳，電泳的同時(shí)加入蛋白緩沖液，10 min后把電轉(zhuǎn)膜放置到濃度為10%的牛奶中進(jìn)行浸泡，常溫環(huán)境下封閉2 h。封閉后結(jié)合一抗孵育1 d，第二天取出后使用TBST液進(jìn)行沖洗，隨后結(jié)合二抗。1 h后進(jìn)行清洗、顯色，對(duì)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5IL-15Rα表達(dá)檢測(cè) 使用PC-PCR檢測(cè)IL-15Rα表達(dá)：提取細(xì)胞總RNA，檢測(cè)RNA純度、含量，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，使用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算，內(nèi)參U6。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25 ℃、10 min,40 ℃、60 min,85 ℃、5 min；設(shè)置擴(kuò)增條件:94 ℃、20 s,72 ℃、30 s,60 ℃、30 s,35個(gè)循環(huán)，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算出需要檢測(cè)的miR-21表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 艾滋病患者和健康志愿者T淋巴細(xì)胞亞群水平檢測(cè)與對(duì)照組相比，艾滋病組患者CD4、CD8水平異常下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組與艾滋病組CD4、CD8水平比較

2.2 艾滋病患者和健康志愿者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)對(duì)比與對(duì)照組相比，艾滋病組患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)均有所上升(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組與艾滋病組α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)對(duì)比

2.3 艾滋病病毒感染患者不同疾病分期中α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)對(duì)比與Ⅰ期患者相比，Ⅱ期患者體內(nèi)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)升高(P<0.05)；與Ⅱ期患者相比，Ⅲ期患者體內(nèi)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)升高(P<0.05)；與Ⅲ期患者相比，Ⅳ期患者體內(nèi)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)升高(P<0.05)。見(jiàn)表3、圖1。

表3 不同艾滋病期α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)對(duì)比

圖1 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達(dá)Western blot圖A:Ⅰ期患者；B：Ⅱ期患者；C：Ⅲ期患者；D：Ⅳ期患者；與Ⅰ期患者比較：*P<0.05；與Ⅱ期患者比較：#P<0.05；與Ⅲ期患者比較：&P<0.05

2.4 艾滋病預(yù)后Logistic回歸分析對(duì)艾滋病患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)進(jìn)行Logistic回歸分析，見(jiàn)表4。

表4 艾滋病預(yù)后Logistic回歸分析

2.5 艾滋病預(yù)后α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)相關(guān)性圖α1-抗胰蛋白酶、IL-15Rα表達(dá)之間呈正相關(guān)(r=0.508，P=0.001)；α1-抗胰蛋白酶、CXCL12之間呈正相關(guān)(r=0.331，P=0.001)；CXCL12、IL-15Rα表達(dá)之間呈正相關(guān)(r=0.371，P=0.001)。見(jiàn)圖2。

圖2 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)相關(guān)性圖

3 討論

艾滋病是一種由HIV感染所引起的慢性致死性傳染病[7]。是一種危害性極大的傳染病，HIV是一種能夠能夠攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒，HIV病毒主要以人體免疫系統(tǒng)中重要的CD4+T淋巴細(xì)胞作為主要目標(biāo)進(jìn)行攻擊，大量地破壞該細(xì)胞，導(dǎo)致人體的免疫功能喪失，最終引起人體感染各種疾病，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[8]。艾滋病病毒感染易發(fā)生于青壯年，即性生活較為活躍的年齡段。目前艾滋病在中國(guó)已經(jīng)列入乙類法定傳染病，并且被列為國(guó)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)傳染病之一[9]。

CD4細(xì)胞時(shí)人體免疫細(xì)胞中的一種重要的免疫細(xì)胞，其主要是由Th細(xì)胞表達(dá)，是Th細(xì)胞TCR識(shí)別的抗原的抗體。大量臨床研究表明，CD4是HIV主要受體，有著“通風(fēng)報(bào)信”的作用，對(duì)CD4細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)Π滩〉脑\斷、治療效果的判定和對(duì)患者的免疫功能的判定有著重要的意義，其原因是CD4細(xì)胞是艾滋病病毒的第一攻擊對(duì)象[10-11]。CD8細(xì)胞有著殺傷被感染細(xì)胞和癌細(xì)胞的作用，當(dāng)艾滋病病毒進(jìn)入到人體后，會(huì)感染體內(nèi)的CD4細(xì)胞，當(dāng)CD4細(xì)胞被感染后便失去可“通風(fēng)報(bào)信”的作用，而CD8細(xì)胞便無(wú)法殺傷被感染細(xì)胞和癌細(xì)胞，最終導(dǎo)致機(jī)會(huì)性感染和癌癥[12]。趙 鵬 等[13]研究提示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平下降，說(shuō)明CD4、CD8與艾滋病有著密切的關(guān)聯(lián)。該研究結(jié)果顯示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平有所下降，與上述一致，說(shuō)明CD4、CD8水平與艾滋病有著密切的關(guān)聯(lián)，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，能夠較為準(zhǔn)確的評(píng)判艾滋病病毒感染的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后，且具有一定的相關(guān)性。

α1-抗胰蛋白酶是一種單鏈糖蛋白，α1-抗胰蛋白酶聯(lián)合原發(fā)性甲胎蛋白能夠提高對(duì)癌癥的檢出率，且與胰島素存在著競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。CXCL12作為趨化因子CXC家族中的一員，由骨髓細(xì)胞分泌生成而來(lái)，并且這種分泌可持續(xù)不斷，是一種持續(xù)表達(dá)的趨化因子。CXCL12與艾滋病有著密切的關(guān)聯(lián)，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)Π滩〔《靖腥具^(guò)程和發(fā)展進(jìn)行較為準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)。黃富強(qiáng)[14]的研究結(jié)果顯示，艾滋病病毒感染患者體內(nèi)CXCL12表達(dá)升高，說(shuō)明CXCL12表達(dá)與艾滋病患者有著密切的關(guān)聯(lián)。IL-15Rα制造的蛋白質(zhì)與肌肉收縮密切相關(guān)，且還與艾滋病有著密切的關(guān)聯(lián)，任園園 等[15]的研究表明，IL-15Rα在艾滋病病毒感染患者體中存在，且呈高表達(dá)，說(shuō)明IL-15Rα與艾滋病病毒感染有著密切的關(guān)聯(lián)。該研究中對(duì)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα檢測(cè)顯示，艾滋病病毒感染患者體內(nèi)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα均呈現(xiàn)高表達(dá)，說(shuō)明α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)與艾滋病病毒感染有著密切的關(guān)聯(lián)，且對(duì)α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)與艾滋病病毒感染進(jìn)行Logistic回歸分析提示，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)與艾滋病病毒感染的預(yù)后有著一定的相關(guān)性，呈正相關(guān)存在。

綜上所述，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達(dá)與艾滋病病毒感染患者有著密切的關(guān)聯(lián)，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)能夠較為準(zhǔn)確的對(duì)艾滋病病毒感染的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行評(píng)價(jià)，且α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα與艾滋病病毒感染患者預(yù)后有著相關(guān)性。雖然上述結(jié)果顯示α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα與艾滋病病毒感染的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后密切相關(guān)，但本文研究中選取病例較少，存在著一定的局限性，所以研究結(jié)果仍需大樣本、多中心的試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。