黨富民，劉長勇，李會會，楊濤，逯霞，趙志永

1. 新疆農(nóng)墾科學(xué)院分析測試中心（石河子 832000）；2. 新疆農(nóng)墾科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所（石河子 832000）

有機(jī)磷農(nóng)藥是我國現(xiàn)階段使用量最大的農(nóng)藥，品種和用量居各農(nóng)藥之首。研究表明，有機(jī)磷農(nóng)藥在某些環(huán)境條件下也會有較長殘存期，并在動物體內(nèi)產(chǎn)生蓄積作用。人們對谷物果蔬等農(nóng)作物的農(nóng)藥殘留有一定認(rèn)識，但對葡萄酒、果汁、果酒等農(nóng)作物深加工產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留還沒有給予足夠重視[1]。

葡萄酒是新鮮葡萄或葡萄汁經(jīng)過發(fā)酵獲得的飲料。由于葡萄酒中含有許多營養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸、礦物質(zhì)元素（包括微量元素）和人體必需的維生素等，以及甾醇、多酚等成分，使它不僅是營養(yǎng)豐富的飲料，而且在適量飲用的條件下，還能防止各種疾病，增強(qiáng)人體健康[2-3]。然而，在葡萄的田間管理過程中，經(jīng)常噴施大量的農(nóng)藥包括殺蟲劑、殺菌劑和除草劑等[5-6]，Hyotylainen等[4]研究認(rèn)為雖然經(jīng)過葡萄酒釀造過程，尤其是酒精發(fā)酵過程，減少農(nóng)藥殘留量，但仍有一部分殘余在葡萄酒中，對人身健康產(chǎn)生潛在威脅。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的分析葡萄酒中的農(nóng)藥殘留的檢測方法具有重要意義。

對于葡萄酒、果酒中農(nóng)藥殘留的檢測及研究方法主要以色譜法為主，有液液萃取法[7-8]、固相萃取法[9-10]、固相微萃取法[11]等，但這些前處理方法繁瑣、成本高、有毒有害化學(xué)試劑用量大，對環(huán)境造成污染大，不利于環(huán)保。為此，試驗(yàn)探究微液液萃取技術(shù)作為樣品前處理方法，使樣品前處理簡單快捷，省去大量有毒試劑，節(jié)約成本，利于環(huán)保，適用于液體樣品的分析。通過基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)校正方法補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，方法簡便、快捷，靈敏度和準(zhǔn)確度均滿足農(nóng)殘分析要求，可用于葡萄酒中農(nóng)藥殘留的快速檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent6890N/5973氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；N-EVAP111型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（美國Organomination公司）；TG16-WS型高速離心機(jī)（上海盧湘儀器有限公司）；SK型快速混勻器（江蘇正基儀器有限公司）。

丙酮（色譜純）；乙腈、正己烷、氯化鈉（均為分析純）；敵敵畏、滅線磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、倍硫磷、殺撲磷、三唑磷、伏殺硫磷標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99.9%）。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液：9種農(nóng)藥用丙酮配制成標(biāo)準(zhǔn)儲備液，根據(jù)檢測需要用丙酮將標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用空白基質(zhì)溶液稀釋配制成基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 測定條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱初始溫度70 ℃保持1 min，以30 ℃/min程序升溫至130 ℃，5 ℃/min升溫至250 ℃，10 ℃/min升溫至300 ℃，保持3 min；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣方式，不分流進(jìn)樣；柱流量1.2 mL/min（恒流模式）；進(jìn)樣口溫度250 ℃；載氣采用高純氦。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊源70 eV；EI離子源溫度230 ℃；GC-MS接口溫度280 ℃；測定模式，選擇離子監(jiān)測（SIM）。

1.3 樣品處理

準(zhǔn)確吸取10.0 mL樣品置于50 mL聚丙烯具塞離心管中，加入20 mL乙腈，用液體混勻器在2 500 r/min均質(zhì)提取1 min。加入3～5 g氯化鈉，再均質(zhì)1 min，將離心管放入離心機(jī)，以6 000 r/min離心3 min，取10 mL上清液，在50 ℃下氮吹濃縮至近干，用體積比7∶3的正己烷-丙酮混合溶液定容至1 mL（如樣品有雜質(zhì)，需經(jīng)0.2 μm濾膜過濾），供氣相色譜質(zhì)譜測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 MLLE法提取條件的優(yōu)化

傳統(tǒng)的MLLE法是在分液漏斗中進(jìn)行的，耗時費(fèi)力，且成本較高。試驗(yàn)開發(fā)的MLLE法是在50 mL離心管中進(jìn)行，快捷方便，節(jié)約成本，利于環(huán)保，適合用于液體樣品的分析。農(nóng)藥殘留常見的提取劑有乙腈、丙酮、正己烷、乙酸乙酯等。做樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)，添加水平為0.20 mg/L，平行3次，采用不同溶劑試驗(yàn)。結(jié)果表明，使用乙腈和丙酮提取效果最好，但由于丙酮極性大，溶解色素雜質(zhì)比較多，基質(zhì)干擾嚴(yán)重，而乙腈通用性強(qiáng)，對農(nóng)藥溶解度較大，可溶入的雜質(zhì)量適中，既保證農(nóng)殘的提取效率又降低基質(zhì)干擾。方法采用乙腈提取葡萄酒中殘留農(nóng)藥，加入氯化鈉渦旋使其溶解，利用氯化鈉的鹽析作用，高速離心使水相和有機(jī)相分離，以除去水和水溶性雜質(zhì)，同時還可減少提取液中干擾基質(zhì)含量并提高待測組分在有機(jī)相中的分配比。離心后的溶液最上層是乙腈層，下層為飽和氯化鈉水溶液，氯化鈉應(yīng)過量，確保水溶液中鹽的濃度達(dá)到飽和，以保證鹽析的效果。因此，選擇乙腈作為提取溶劑。不同提取溶劑對葡萄酒樣品中有機(jī)磷類提取效果比較見表1。

表1 不同提取溶劑對葡萄酒中有機(jī)磷農(nóng)藥提取效果的比較 單位：%

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜條件的優(yōu)化

在選定的色譜條件下，通過全掃描方式做出總離子流圖（TIC），根據(jù)其質(zhì)譜圖中碎片離子選擇豐度相對較高、相對分子質(zhì)量較大的離子作為不同有機(jī)磷農(nóng)藥測定的目標(biāo)監(jiān)測離子，根據(jù)各標(biāo)樣物質(zhì)，確定幾種農(nóng)藥的特征離子（見表2），對樣品進(jìn)行選擇性離子監(jiān)測（SIM），每種農(nóng)藥選擇3～4個特征離子進(jìn)行掃描，可獲得較高的靈敏度，但必須同時考慮保留時間和離子豐度比。在上述色譜條件下，得出混合標(biāo)樣的SIM譜圖（見圖1），在選擇離子模式下，對被測組分進(jìn)行分離，敵敵畏、滅線磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、倍硫磷、殺撲磷、三唑磷和伏殺硫磷9種農(nóng)藥均可較好地被分離，相互間不干擾，減少其他雜質(zhì)的干擾，提高檢測靈敏度，符合農(nóng)藥殘留檢測要求，因此，可在此條件下對9種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測。

表2 選擇離子監(jiān)測待測農(nóng)藥的保留時間、定量離子、定性離子

圖1 9種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

將標(biāo)準(zhǔn)溶液分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.020，0.050，0.100，0.200，0.500和1.000 mg/L，在該方法所確定的試驗(yàn)條件下進(jìn)行測定，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。在上述濃度范圍內(nèi)，敵敵畏、滅線磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、倍硫磷、殺撲磷、三唑磷和伏殺硫磷的濃度分別與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.996。配制低濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對照品，以信噪比（S/N=3）計算9種有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出限，檢出限在0.006 0～0.013 mg/L，9種有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出限數(shù)據(jù)結(jié)果見表3。

表3 9種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率和精密度（n=6）

2.4 方法精密度和回收率的測定

在陰性葡萄酒的樣品中分別添加3個質(zhì)量濃度的添加水平，分別為0.05，0.20和0.50 mg/L，對敵敵畏、滅線磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、倍硫磷、殺撲磷、三唑磷和伏殺硫磷測定回收率，每個水平均平行處理測定6個樣，計算平均回收率及精密度，結(jié)果見表2。經(jīng)測定，平均回收率在70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，該方法中農(nóng)藥組分測試結(jié)果處于可接受范圍內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了葡萄酒中9種農(nóng)藥殘留的快速定性與定量分析。

2.5 實(shí)際樣品的測定

采用建立的方法對30份葡萄酒樣品中的9種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測，在葡萄酒中檢出甲拌磷和倍硫磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥，有機(jī)磷農(nóng)藥含量在0.022～0.31 mg/L。

3 結(jié)論

試驗(yàn)建立微液液萃取葡萄酒中9種有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的檢測方法。毒死蜱等9種有機(jī)磷農(nóng)藥在葡萄酒中檢出限在0.006 0～0.013 mg/L；添加水平0.050～0.50 mg/L時，回收率為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。該方法樣品前處理簡單、快捷，提取效率高，省去大量有毒試劑，節(jié)約成本，利于環(huán)保，回收率高，準(zhǔn)確靈敏，可用于葡萄酒中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速分析檢測。