侯鵬霞 王建東 孫文陽 王瑞剛 姜 武 于 洋 張恩平 梁小軍*

(1.西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，楊凌 712100；2.寧夏農(nóng)林科學院動物科學研究所，銀川 750002；3.寧夏犇旺生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，永寧 750100)

犢牛是動物生產(chǎn)的后備力量，關(guān)系著后續(xù)的生產(chǎn)能力和經(jīng)濟效益。犢牛斷奶前飼喂方式會影響犢牛的生長性能和飼養(yǎng)成本，因此，合理的飼喂方式是提高養(yǎng)殖效益的關(guān)鍵[1]。犢牛斷奶時自由采食母乳會影響開食料的采食量，斷奶后無法適應液態(tài)奶到固體料的突然轉(zhuǎn)變，進而影響瘤胃發(fā)育及后期對飼草料的消化吸收能力，產(chǎn)生較大的應激反應，不利于健康生長[2]。魯瓊芬等[3]研究報道培育方式對檳榔江水牛犢牛平均干物質(zhì)采食量有影響，犢牛采食低奶量和代乳粉能夠提高犢牛干物質(zhì)采食量。仁瑞清等[4]研究報道飼養(yǎng)模式會影響犢牛采食量，斷奶前飼喂顆粒開食料有利于降低犢牛腹瀉的發(fā)生率，提高犢牛對固體飼料的適應性。馬俊南[5]研究報道，適量增加犢牛固體飼料飼喂比例有助于改善斷奶前后瘤胃發(fā)酵環(huán)境，促進瘤胃微生物蛋白的合成，提高斷奶后飼糧能量代謝率、氮的生物學價值及氮利用率。目前對犢牛哺乳的研究主要集中在哺乳方式方法上，對斷奶前犢牛限制哺乳次數(shù)的研究鮮有報道。本研究從安格斯犢牛35日齡開始限制哺乳次數(shù)，研究哺乳次數(shù)對犢牛生長性能、血清免疫與抗氧化指標以及母牛繁殖性能的影響，以期為減少犢牛斷奶應激，促進犢牛生長和母牛產(chǎn)后早期發(fā)情，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

采用完全隨機單位組試驗設計，選擇初生重相近、健康的安格斯初生犢牛24頭，分為3組，每組8頭(公母各占1/2)。對照組隨母哺乳，試驗組限制哺乳(人工輔助，圈在犢牛補飼欄)，其中試驗Ⅰ組每日哺乳2次(07:00—08:00、17:00—18:00)，試驗Ⅱ組每日哺乳3次(07:00—08:00、14：00—15:00、19:00—20:00)。試驗組犢牛10日齡早期補飼，35日齡開始限制哺乳，90日齡斷奶試驗結(jié)束；對照組犢牛隨母哺乳，10日齡早期補飼，90日齡斷奶試驗結(jié)束。犢牛補飼顆粒料組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 補飼顆粒料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of supplementary pellets (DM basis) %

續(xù)表1項目 Items含量 Content粗灰分 Ash7.06鈣 Ca1.00磷 P 0.60

1.2 飼養(yǎng)管理

犢牛出生后2 h內(nèi)采食初乳，10日齡前隨母哺乳。各組試驗犢牛編號入舍，10日齡開始早期隔欄補飼，試驗組35日齡開始限制哺乳。其中，苜蓿干草自由采食，自由飲水，記錄顆粒料采食量，其他飼養(yǎng)管理水平保持一致。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 犢牛生長性能

測定犢牛初生重，分別于35、60、90日齡晨飼前稱量犢牛體重，測量體尺指標(體高、體長、胸圍)，計算平均日增重(ADG)。試驗期間每周連續(xù)3 d稱量犢牛顆粒料投入量和剩余量，統(tǒng)計犢牛采食量，計算平均日干物質(zhì)采食量和料重比。

1.3.2 犢牛血清指標

試驗結(jié)束(犢牛斷奶)第3天用不含抗凝劑的真空采血管在犢牛尾根采血10 mL，靜置，3 500×g離心5 min，取血清2份分別裝入1 mL離心管，-20 ℃保存待測。

血清生化指標：采用比色法測定血清總蛋白(total protein，TP)、甘油三酯(triglycerides，TG)、白蛋白(albumin，ALB)、葡萄糖(glucose，GLU)含量與乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)活性，檢測儀器為貝克曼Au5800全自動生化儀。

血清免疫指標：采用酶聯(lián)免疫分析法測定血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)、白細胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、白細胞介素-4(interleukin-4，IL-4)、白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細胞介素-17(interleukin-17，IL-17)、γ-干擾素(interferon-γ，IFN-γ)含量，檢測儀器為賽默飛世爾Multiskan FC型酶標儀；采用放射免疫法測定血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)含量，試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

血清抗氧化指標：采用比色法測定血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性、總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)及丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量，檢測儀器為貝克曼Au5800全自動生化儀。

1.3.3 母牛增重及產(chǎn)后首次發(fā)情天數(shù)

試驗開始、結(jié)束后空腹測定母牛體重，記錄母牛增重；記錄母牛產(chǎn)后初次發(fā)情平均天數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2010對試驗數(shù)據(jù)進行初步處理，并采用SAS 8.2軟件中的ANOVA程序進行方差分析和LSD多重比較，結(jié)果以“平均值±標準差”表示，P<0.05為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié) 果

2.1 限制哺乳對犢牛生長性能的影響

由表2可知，犢牛35日齡(試驗開始)體重、體尺指標各組間差異不顯著(P>0.05)。60日齡時，體長表現(xiàn)為試驗Ⅱ組極顯著高于其他2組(P<0.01)，試驗Ⅰ組顯著高于對照組(P<0.05)。90日齡時，2個試驗組的體重均極顯著高于對照組(P<0.01)；2個試驗組間體長差異不顯著(P>0.05)，試驗Ⅱ組顯著高于對照組(P<0.05)；2個試驗組間胸圍差異不顯著(P>0.05)，試驗Ⅱ組顯著高于對照組(P<0.05)。

表2 限制哺乳對犢牛體重與體尺指標的影響Table 2 Effects of lactation restriction on body weight and body measurement indexes of calves

由表3可知，61～90日齡階段，試驗Ⅱ組犢牛平均日干物質(zhì)采食量較對照組顯著提高(P<0.05)，料重比各組間差異不顯著(P>0.05)，但以試驗Ⅱ組數(shù)值最小。

表3 限制哺乳對犢牛ADG、采食量、料重比的影響Table 3 Effects of lactation restriction on ADG, feed intake and feed/gain ratio of calves

2.2 限制哺乳對犢牛血清生化指標的影響

由表4可知，血清TP、ALB、TG含量與ALP、ALT活性各組間差異不顯著(P>0.05)。血清GLU含量以試驗Ⅱ組最高，極顯著高于試驗Ⅰ組和對照組(P<0.01)；血清LDH活性2個試驗組均低于對照組，其中試驗Ⅱ組極顯著低于對照組(P<0.01)，顯著低于試驗Ⅰ組(P<0.05)；試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組血清AST活性分別較對照組降低24.95%(P>0.05)和42.70%(P<0.05)。

表4 限制哺乳對犢牛血清生化指標的影響Table 4 Effects of lactation restriction on serum biochemical indexes of calves

2.3 限制哺乳對犢牛血清免疫指標的影響

由表5可知，血清IgA含量試驗Ⅱ組極顯著高于對照組(P<0.01)；血清IgG、IgM含量各組間差異不顯著(P>0.05)，但2個試驗組在數(shù)值上均高于對照組。血清IL-4含量試驗Ⅱ組極顯著高于對照組(P<0.01)；血清IL-17含量2個試驗組均極顯著低于對照組(P<0.01)；血清IL-6含量試驗Ⅱ組極顯著低于對照組(P<0.01)。血清TNF-α含量2個試驗組均極顯著低于對照組(P<0.01)，2個試驗組間差異不顯著(P>0.05)。

表5 限制哺乳對犢牛血清免疫指標的影響Table 5 Effects of lactation restriction on serum immune indexes of calves

2.4 限制哺乳對犢牛血清抗氧化指標的影響

由表6可知，血清GSH-Px活性表現(xiàn)為試驗Ⅱ組>試驗Ⅰ組>對照組，各組間差異極顯著(P<0.01)；血清SOD活性2個試驗組均極顯著高于對照組(P<0.01)，2個試驗組間差異不顯著(P>0.05)；血清MAD含量試驗Ⅱ組極顯著低于對照組(P<0.01)，顯著低于試驗Ⅰ組(P<0.05)。總體上，血清抗氧化水平呈現(xiàn)出試驗Ⅱ組>試驗Ⅰ組>對照組的趨勢。

表6 限制哺乳對犢牛血清抗氧化指標的影響Table 6 Effects of lactation restriction on serum antioxidant indexes of calves

2.5 限制哺乳對母牛增重及產(chǎn)后發(fā)情天數(shù)的影響

由表7可知，哺乳次數(shù)對母牛ADG、產(chǎn)后首次發(fā)情時間的影響均不顯著(P>0.05)，但產(chǎn)后首次發(fā)情時間以試驗Ⅱ組最短。

表7 母牛增重及產(chǎn)后首次發(fā)情時間Table 7 Cow weight gain and first estrus time after delivery

3 討 論

3.1 限制哺乳對犢牛生長性能的影響

體重是衡量犢牛生長性能的重要指標，反映犢牛健康狀況，ADG則主要反映犢牛的生長速度[7]。ADG越大，料重比越低，犢牛的生長性能越好。影響犢牛生長發(fā)育的因素很多，飼糧性質(zhì)是重要因素之一，可通過影響犢牛瘤胃及消化機能發(fā)育進而影響犢牛生長發(fā)育[8]。研究表明犢牛斷奶時飼糧突然改變會使犢牛干物質(zhì)攝入量不足，引發(fā)斷奶應激，影響犢牛健康生長[9]。Jasper等[10]研究發(fā)現(xiàn)，犢牛增加液體飼料采食量有助于提高斷奶前的營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，增加固體顆粒料采食量有提高斷奶后營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的作用。所以適當減少犢牛液體奶的攝入可有效促進固體飼料采食量，促進瘤胃發(fā)育。高青山等[11]研究表明，母子分離技術(shù)能顯著提高延邊黃牛犢牛的生長發(fā)育速度。馬俊南[5]研究報道，犢牛斷奶前不同固液條件下總干物質(zhì)采食量無顯著差異，但高液體飼料比例組總能表觀消化率和氮利用率較高，即采食高比例的固體飼料發(fā)酵能夠產(chǎn)生較多的揮發(fā)性脂肪酸，改善瘤胃發(fā)酵環(huán)境，促進瘤胃發(fā)育。本研究中犢牛30、60日齡時各組體重差異不顯著，但90日齡時2個試驗組體重分別較對照組提高了7.17%和7.98%，表明限制哺乳早期進行顆粒料補飼能夠滿足犢牛營養(yǎng)需要，在不影響犢牛生長的同時促進了犢牛生長發(fā)育；犢牛61～90日齡時，每日限制哺乳3次顯著提高了平均日干物質(zhì)采食量，且料重比最小，但料重比各組間差異不顯著，說明犢牛的生長性能沒有發(fā)揮到最優(yōu)，但每日限制哺乳3次降低了料重比，有提高飼料利用率的潛力，后續(xù)研究可考慮斷奶前將犢牛哺乳次數(shù)從每日3次逐漸減少至2次再到1次，進一步提高飼料利用率。

3.2 限制哺乳對犢牛血清生化指標的影響

血液(清)生化指標可以反映動物體的營養(yǎng)代謝水平。GLU是機體重要的能源物質(zhì)，能夠反映機體糖原合成和分解之間的動態(tài)平衡。TG是被儲藏起來的能量源，主要從食物中獲取和由肝細胞合成[12]。本研究中，犢牛血清GLU、TG含量表現(xiàn)為試驗Ⅱ組>試驗Ⅰ組>對照組，其中每日哺乳3次的試驗Ⅱ組犢牛血清GLU含量極顯著高于試驗Ⅰ組和對照組，說明限制哺乳提高了犢牛對顆粒料的采食量，進而提高了機體的供能水平。血清ALT、AST活性可以反映肝臟功能和受損程度。LDH廣泛存在于動物機體的各器官組織中，是反映細胞損傷程度的重要指標，當細胞受到應激時細胞膜通透性增加，會釋放LDH[13]。高青山等[11]研究報道，完全分離或隨母哺乳的方式對新生犢牛血清ALT和AST活性的影響差異不顯著。李夢雅等[7]研究報道，離母犢牛30和60日齡時的肝臟功能不及母帶犢牛，到90日齡時肝臟功能逐漸正常，血清ALT、AST和ALP活性與母帶犢牛無顯著差異。本研究顯示，犢牛血清AST、LDH活性2個試驗組均低于對照組，這可能是斷奶前限制犢牛哺乳次數(shù)，犢牛提前適應顆粒料采食和離母造成的應激，緩解了肝臟功能損傷，減緩了斷奶應激。

3.3 限制哺乳對犢牛血清免疫指標的影響

犢牛免疫力與血清中主要免疫球蛋白IgA、IgG及IgM的含量密切相關(guān)，其含量的高低可反映動物機體免疫力的強弱。本研究中，在犢牛斷奶第3天時測得2個試驗組血清IgA、IgG、IgM含量均高于對照組，其中試驗Ⅱ組血清IgA含量極顯著高于對照組，表明每日限制哺乳3次可提高犢牛血清IgA、IgG和IgM含量，可能是犢牛提前適應了母子分離及顆粒料，減緩了斷奶應激期間病原體的感染，提高了機體免疫力。細胞因子在促炎和抗炎過程中發(fā)揮重要的作用，其含量可體現(xiàn)機體免疫功能[14]。TNF-α、IL-6是重要的促炎因子，其中TNF-α參與機體局部或系統(tǒng)反應，具有較廣泛的生物學活性及免疫調(diào)節(jié)功能，能刺激免疫細胞合成白細胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、IL-6等多種細胞因子[15]。IL-17可作用于上皮細胞，通過促進炎性細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，募集大量中性粒細胞和巨噬細胞來介導炎癥的發(fā)生[16]。

本研究結(jié)果表明，限制哺乳可顯著降低斷奶后血清TNF-α含量，極顯著降低血清IL-17含量，每日限制哺乳3次極顯著降低血清IL-6含量。IL-4為主要的抗炎因子，由T淋巴細胞活化過程中分泌，能夠促進B細胞和自然殺傷細胞的增殖分化，進而促進細胞免疫[17]。本研究表明，犢牛每日限制哺乳3次時血清IL-4含量極顯著高于對照組，說明斷奶前限制犢牛哺乳次數(shù)可降低斷奶犢牛血清中促炎因子含量，同時增加抗炎因子含量，從而更好地抑制機體炎癥反應，緩解犢牛斷奶應激。

3.4 限制哺乳對犢牛血清抗氧化性指標的影響

動物體內(nèi)的抗氧化酶主要有GSH-Px、SOD、CAT，機體對氧自由基的清除能力與這些酶的活性有直接關(guān)系[18]。GSH-Px是機體內(nèi)一種分解過氧化物的酶，SOD具有清除自由基的功能，使自由基的形成與清除處于平衡狀態(tài)[19]。本研究結(jié)果表明，2個限制哺乳的試驗組血清GSH-Px、SOD活性均極顯著高于對照組的隨母哺乳，呈試驗Ⅱ組>試驗Ⅰ組>對照組的趨勢，且每日哺乳3次血清MAD含量極顯著低于隨母哺乳。李夢雅等[6]采用代乳粉的方式研究母帶犢牛與離母犢牛生長性能和血清生化、抗氧化、免疫指標的差異，結(jié)果表明離母犢牛90日齡時，血清T-AOC及SOD、GSH-Px活性顯著低于母帶犢牛，與本研究結(jié)果不一致。上述結(jié)果說明斷奶前限制犢牛哺乳次數(shù)更容易適應斷奶后的飼養(yǎng)條件，減輕機體脂質(zhì)氧化程度，提高機體抗氧化能力，促進犢牛后期生長發(fā)育。

3.5 限制哺乳對母牛增重及產(chǎn)后發(fā)情天數(shù)的影響

縮短母牛分娩間隔，提高繁殖率進而增加牛源，是畜牧業(yè)研究的重點方向。而加快母牛產(chǎn)后體況恢復，促進母牛早發(fā)情、早配種，是提高繁殖率的重要方法之一。本研究中限制犢牛哺乳次數(shù)對母牛體重無顯著影響，但犢牛限制哺乳母牛的增重較隨母哺乳母乳要高，且犢牛每日哺乳3次的母牛產(chǎn)后發(fā)情時間最短，分別較對照組、試驗Ⅰ組縮短11.58和8.25 d，表明犢牛限制哺乳有利于母牛產(chǎn)后恢復，縮短胎間距。

4 結(jié) 論

安格斯犢牛35日齡以后每日哺乳3次，其他時間離母，可使機體免疫和抗氧化能力有所提高，促進犢牛生長發(fā)育，且母牛產(chǎn)后首次發(fā)情時間最短。因此，可考慮斷奶前逐漸減少犢牛哺乳次數(shù)，以進一步提高犢牛飼料利用率、縮短母牛產(chǎn)后發(fā)情時間。