鄧雨英 劉 偉 姚亞玲 肖 冰 柳 序 賀長青 郭松長 曲湘勇*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長沙 410128；2.湖南省懷化市畜牧水產(chǎn)事務(wù)中心，懷化 418200；3.湖南云飛鳳農(nóng)業(yè)有限公司，懷化 418200)

自2020年7月我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部全面禁止飼料中添加抗生素以來，各種添加劑研發(fā)加快了腳步，但是單一添加劑很難滿足生產(chǎn)需要，因此多種添加劑聯(lián)合使用很有必要?？莶菅挎邨U菌(Bacillussubtilis)和植物精油(essential oil)做為目前使用最廣泛的抗生素替代品，已有大量研究證明兩者均具有促進畜禽生長、抑菌、抗炎和改善腸道內(nèi)壞境的作用，可做為綠色添加劑應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)[1-4]。此外，本課題組前期研究已證明枯草芽孢桿菌應(yīng)用于蛋雞和肥育豬中的安全性[5-6]，以及枯草芽孢桿菌和蒙脫石聯(lián)用、凹凸棒石負載植物精油均可改善蛋雞產(chǎn)蛋性能[7-8]，而關(guān)于枯草芽孢桿菌和植物精油聯(lián)合使用的應(yīng)用研究較少。雪峰烏骨雞原產(chǎn)于湖南西南雪峰山脈地區(qū)，是經(jīng)長期自然選育而形成的地方烏雞品種，該品種于2010年被列入國家畜禽遺傳資源名錄。因此，本試驗旨在研究飼糧添加不同水平枯草芽孢桿菌和植物精油復(fù)合制劑(BS-EO)對雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標和糞便菌群的影響，以期為其在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用BS-EO主要成分為枯草芽孢桿菌10%(1×1010CFU/kg)、植物精油18%(肉桂醛10%、橙花叔醇5%、百里香酚5%和胡椒堿4.4%)和載體72%，由上海某企業(yè)發(fā)展有限公司提供。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在湖南懷化云飛鳳有限公司進行，選取768只24周齡體重相近、健康的黃羽雪峰烏骨雞，隨機分為4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)32只雞。對照組(A組)飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組(B組、C組和D組)分別在基礎(chǔ)飼糧中添加300、600、900 mg/kg BS-EO。預(yù)試期各組統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，每天觀察雞群并進行記錄，及時調(diào)整雞群，使各組采食量、產(chǎn)蛋率和蛋重差異不顯著(P>0.05)。預(yù)試期7 d，正試期56 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

試驗雞采用上、中、下3層階梯式籠養(yǎng)，每籠2只，每日飼喂1次(06：30)，收蛋2次(09：30、15：30)。各組飼養(yǎng)管理條件相同，自由采食和飲水，每日光照時間為16 h(05：00開燈，21：00關(guān)燈)，自然光照和人工光照相結(jié)合，按常規(guī)飼養(yǎng)管理進行消毒、防疫等工作。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)

產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)指標測定與計算方法均按照農(nóng)業(yè)部推薦標準《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T 823—2004)進行。

1.3.2 血清生化指標

試驗第56天，分別從每個重復(fù)隨機選取2只雞，靜脈采血5 mL，傾斜采血管，靜置30 min后于3 000 r/min離心10 min，吸取上清液注入1.5 mL離心管中，標記組別和日期，置于-20 ℃冰箱保存，用于測定血清生化指標。

采用邁瑞B(yǎng)S-200全自動生化分析儀及邁瑞生物公司生產(chǎn)的配套試劑盒測定血清生化指標，血清生化指標包括：總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、堿性磷酸酶(ALP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素(UREA)、葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、鈣(Ca)和磷(P)。

1.3.3 糞便菌群

試驗期間分別采集第4、8周末新鮮糞樣進行菌群檢測。喂料后隨即布置接糞板采集新鮮直腸糞樣進行菌群檢測，采樣時選擇黃綠色成形糞便，排糞后用一次性勺子采集，確保每個樣品與空氣接觸不超過15 min，每個重復(fù)采取4處不同位置的糞樣(4～6 g)放入凍存管液氮速凍后-80 ℃保存供后續(xù)分析。大腸桿菌采用膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基(DHL)有氧培養(yǎng)，枯草芽孢桿菌選用胰蛋白水解物-大豆瓊脂培養(yǎng)基(TS)在37 ℃的條件下進行有氧培養(yǎng)，厭氧性總菌群使用膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基(BL)在厭氧條件下培養(yǎng)，乳酸桿菌使用乳酸桿菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基(LBS)在厭氧條件下培養(yǎng)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)WPS Office整理后，使用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析，差異顯著的數(shù)據(jù)再通過Duncan氏法進行多重比較。試驗結(jié)果采用“平均值±標準差(mean±SD)”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋性能的影響

由表2可知，在5～8周，D組產(chǎn)蛋率顯著高于其他各組(P<0.05)，與對照組相比增加了6.03%；D組料蛋比顯著低于其他各組(P<0.05)，與對照組相比降低了7.60%；各組之間的平均蛋重和平均日采食量均無顯著差異(P>0.05)。在1～4周和1～8周，各組之間的平均蛋重、產(chǎn)蛋率、平均日采食量和料蛋比均無顯著差異(P>0.05)。

表2 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋性能影響Table 2 Effects of dietary BS-EO on laying performance of Xuefeng black-bone chickens

2.2 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，B組和D組蛋黃指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，各組之間的蛋殼厚度、蛋殼強度、哈氏單位和蛋殼顏色無顯著差異(P>0.05)。

表3 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞蛋品質(zhì)影響Table 3 Effects of dietary BS-EO on egg quality of Xuefeng black-bone chickens

2.3 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞血清生化指標的影響

由表4可知，與對照組相比，B組和D組血清ALP活性顯著增加(P<0.05)，D組血清TG含量顯著降低(P<0.05)，C組血清磷含量顯著降低(P<0.05)。各組之間的血清TP、ALB、GLB、UREA、GLU、UA、TC、鈣含量及ALT、AST活性均無顯著差異(P>0.05)。

表4 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞血清生化指標的影響Table 4 Effects of dietary BS-EO on serum biochemical indexes of Xuefeng black-bone chickens

2.4 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞糞便菌群的影響

由表5可知，在第4周末，與對照組相比，C組和D組糞便乳酸桿菌數(shù)量顯著降低(P<0.05)，B組、C組和D組糞便枯草芽孢桿菌數(shù)量顯著增加(P<0.05)；各組之間糞便大腸桿菌和厭氧性總菌群數(shù)量無顯著差異(P>0.05)。在第8周末，與對照組相比，C組和D組糞便枯草芽孢桿菌數(shù)量顯著增加(P<0.05)；各組之間糞便大腸桿菌、乳酸桿菌和厭氧性總菌群數(shù)量無顯著差異(P>0.05)。

表5 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞糞便菌群的影響Table 5 Effects of dietary BS-EO on fecal flora of Xuefeng black-bone chickens lg(CFU/g)

3 討 論

3.1 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋性能的影響

大量研究表明枯草芽孢桿菌和植物精油在畜禽生長發(fā)育方面均起促進作用。本研究結(jié)果顯示，在5～8周，飼糧添加900 mg/kg BS-EO可顯著提高雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋率，顯著降低料蛋比。Guo等[9]研究長期添加枯草芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響發(fā)現(xiàn)，試驗后期蛋雞產(chǎn)蛋量、平均日采食量、平均蛋重沒有顯著變化，料蛋比顯著下降。Mousavi等[10]發(fā)現(xiàn)飼糧添加200 mg/kg植物精油混合物可顯著增加蛋雞產(chǎn)蛋量，并有降低料蛋比的趨勢，但對平均日采食量和平均蛋重?zé)o顯著差異。楊福劍等[11]在地方肉種雞飼糧中添加800 g/t枯草芽孢桿菌與200 g/t植物精油組合后發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋率和孵化率顯著提高，死淘率降低。以上研究結(jié)果與本研究結(jié)果基本一致，說明枯草芽孢桿菌和植物精油聯(lián)合使用可有效改善蛋雞產(chǎn)蛋性能，降低生產(chǎn)成本。

3.2 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞蛋品質(zhì)的影響

蛋黃指數(shù)是評價蛋新鮮度的重要指標，主要受蛋清和蛋黃中水分含量影響，蛋清中水分通過卵黃膜滲入蛋黃從而導(dǎo)致蛋黃指數(shù)逐漸下降[12-13]。而卵黃膜的彈性和滲透性主要取決于卵黃膜中脂肪酸組成，飼糧脂肪組成及腸道中脂肪的消化代謝均可影響卵黃膜脂肪酸組成[14]。研究表明，枯草芽孢桿菌和植物精油均能通過促進腸道蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等消化酶分泌從而提高營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收效率[15-16]。在本研究中，飼糧添加300和900 mg/kg BS-EO可顯著提高蛋黃指數(shù)，但各組之間的蛋殼厚度、蛋殼強度、哈氏單位和蛋殼顏色無顯著差異。這說明枯草芽孢桿菌和植物精油聯(lián)用提高了蛋黃指數(shù)，有利于雞蛋的保存。關(guān)于枯草芽孢桿菌和植物精油聯(lián)合使用的研究較少，Yang等[17]在蛋雞飼糧中添加混合益生菌可顯著增加蛋殼強度，但對蛋殼厚度、蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色無顯著影響。Marume等[18]研究表明，蛋雞飼糧中添加植物精油可顯著提高蛋白高度和哈氏單位，而對其他蛋品質(zhì)指標無顯著影響。上述研究結(jié)果與本研究結(jié)果不完全一致，造成這種差異的原因可能是復(fù)合制劑中兩者添加量和比例不同。

3.3 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞血清生化指標的影響

3.4 飼糧添加BS-EO對雪峰烏骨雞糞便菌群的影響

家禽腸道中定植著大量與機體健康密切相關(guān)的微生物，糞便微生物可在一定程度上反映腸道健康狀況，且采樣操作方便經(jīng)濟，可最大限度降低對試驗動物的影響。已有大量研究表明枯草芽孢桿菌一方面可產(chǎn)生大量抑菌物質(zhì)，如細菌素、抗菌肽等；另一方面可通過消耗腸道中的氧氣抑制有害菌的生長[2,28]。植物精油中的酚、醛和酮類等具有良好的抗菌活性，能夠抑制大部分病原菌生長[1]。兩者均具有調(diào)節(jié)畜禽腸道微生態(tài)平衡、改善腸道健康的作用。郭志有等[29]研究表明，817小型肉雞飼糧中添加250 mg/kg菌酶復(fù)合物或250 mg/kg復(fù)合植物精油均可顯著提高空腸、盲腸和直腸中乳酸桿菌數(shù)量，但對大腸桿菌數(shù)量無顯著影響。Tang等[30]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼糧中添加500 mg/kg枯草芽孢桿菌可顯著提高空腸和結(jié)腸中的枯草芽孢桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，并有提高乳酸桿菌數(shù)量的趨勢，對大腸桿菌數(shù)量無顯著影響。Adaszyńska-Skwirzyńska等[31]在肉雞飲用水中添加0.4 mL/L精油可顯著降低回腸中大腸桿菌數(shù)量，顯著增加了益生菌數(shù)量。然而本試驗結(jié)果顯示，與對照組相比，第4周末C組和D組糞便乳酸桿菌數(shù)量顯著降低，第4周末和第8周末C組和D組糞便枯草芽孢桿菌數(shù)量均顯著增加，各組之間糞便大腸桿菌和厭氧性總菌群數(shù)量無顯著差異。這與前人結(jié)果不完全一致，造成這種差異的原因可能是成年雞腸道微生物區(qū)系均已穩(wěn)定，短期的外源補充調(diào)控尚未發(fā)揮作用，可以通過延長試驗期進一步驗證；或者是受試驗環(huán)境、材料及用量影響導(dǎo)致試驗結(jié)果不一致。

4 結(jié) 論

飼糧添加900 mg/kg BS-EO可通過降低血清TG含量、提高血清ALP活性和腸道有益菌數(shù)量改善雪峰烏骨雞產(chǎn)蛋性能及蛋品質(zhì)。