高書鋒 雷 平 李詠梅 王升平 龔 平 曾 奧 曾發(fā)姣 舒 燕 周小玲 周映華 繆 東 劉惠知

(湖南省微生物研究院，飼用微生態(tài)制劑湖南省工程實(shí)驗(yàn)室，湖南省農(nóng)用微生物工程技術(shù)研究中心，長(zhǎng)沙 410009)

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物為初始體重相近的健康22日齡湘黃肉雞(公母各占1/2)。試驗(yàn)地點(diǎn)為寧鄉(xiāng)市夏鐸鋪鎮(zhèn)六度庵養(yǎng)殖場(chǎng)。黃芩素純度為98.5%，由陜西某公司提供。

1.2 基礎(chǔ)飼糧

參照《中國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表(第31版)》和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將200只22日齡平均體重為(530.94±12.14) g的湘黃肉雞隨機(jī)分成5個(gè)組，每個(gè)組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只(公母各占1/2)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上分別添加0.10、0.20、0.30和0.40 g/kg黃芩素。

1.4 飼養(yǎng)管理

飼喂前1周，將雞舍及設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格清洗和消毒。基礎(chǔ)飼糧為雞場(chǎng)飼喂的常規(guī)飼糧，預(yù)試期3 d，試驗(yàn)期42 d，試驗(yàn)期間自由采食，自由飲水，按正常免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)第1、22和42天，每天09：00晨飼前空腹稱重，以重復(fù)為單位詳細(xì)記錄各組的耗料量和死亡只數(shù)，計(jì)算肉雞的ADG、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和死亡率。

1.5.2 血清免疫指標(biāo)檢測(cè)

血清樣品采集：試驗(yàn)結(jié)束后，禁食8 h后翅靜脈采血4～5 mL，每個(gè)重復(fù)2只雞，血樣在室溫靜置2 h后3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃凍存，用于相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。

血清免疫指標(biāo)測(cè)定：免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量均采用Thermo Scientific Multiskan Sky全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀采用微板比濁法進(jìn)行測(cè)定，上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5.3 血清、肝臟抗氧化指標(biāo)檢測(cè)

肝臟組織取樣：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2只體重接近平均體重的試驗(yàn)雞，屠宰后對(duì)肝臟組織進(jìn)行取樣，超低溫冰箱(-80 ℃)保存待用。肝臟組織前處理：準(zhǔn)確稱取肝臟組織重量，按重量(g)∶(體積)=1∶9的比例加入生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2 500 r/min離心10 min，取上清液再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%組織勻漿，或按1∶19稀釋成0.5%組織勻漿，待測(cè)。

血清、肝臟抗氧化指標(biāo)檢測(cè)：總抗氧化能力(T-AOC)采用比色法測(cè)定，用硫酸亞鐵(FeSO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度來(lái)表示，總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，GSH-Px活性、還原型谷胱甘肽(GSH)含量采用二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法測(cè)定，過(guò)氧化氫(H2O2)含量采用分光光度法測(cè)定，MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定，上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5.4 血脂指標(biāo)檢測(cè)

取1.5.2中制備的新鮮血清樣品，經(jīng)干冰冷凍密封后送至揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物疾病檢測(cè)與技術(shù)服務(wù)中心，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各項(xiàng)血脂指標(biāo)。其中，TC含量采用COD-PAP比色法測(cè)定，TG含量采用GPO-PAP比色法測(cè)定，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和LDL-C含量均采用雙試劑直接比色法測(cè)定。

1.5.5 肉品質(zhì)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取3只體重接近平均體重的試驗(yàn)雞，屠宰后完整剝離兩側(cè)胸肌，去除周圍脂肪組織，分別測(cè)定pH、肉色、滴水損失率和剪切力，重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。

pH：每個(gè)胸肌樣品于屠宰后45 min用pH-STAR型胴體肉質(zhì)pH直測(cè)儀選擇3個(gè)不同位置測(cè)其pH(pH45 min)，4 ℃儲(chǔ)存24 h后再測(cè)其pH(pH24 h)。

滴水損失率：取左側(cè)胸肌上半部分，沿肌纖維方向修剪成大小為長(zhǎng)×寬×厚約為4 cm×3 cm×2 cm的肉塊，稱量滴水前重并記錄，然后用鐵絲鉤住一端懸掛吊在吹氣袋中，4 ℃下儲(chǔ)存，24 h后用濾紙吸去表面多余水分，稱量滴水后重并記錄。采用以下公式計(jì)算滴水損失率：

滴水損失率(%)=[(滴水前重-滴水后重)/滴水前重]×100。

剪切力：使用GR-151 Warner-Bratzler Shear Speed嫩度儀測(cè)定剪切力。取右側(cè)胸肌上半部分，沿肌纖維方向修剪成大小為長(zhǎng)×寬×厚約為4 cm×1 cm×1 cm的肉塊，穿掛于嫩度儀傳感器下方相連掛鉤上，保持樣品左右對(duì)稱平衡，操作升降按鈕，記錄傳感器所顯示剪切力數(shù)據(jù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件的one-way ANOVA程序進(jìn)行方差分析，當(dāng)方差分析具顯著性差異時(shí)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié) 果

2.1 黃芩素對(duì)湘黃肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，22～42日齡，0.20 g/kg黃芩素組ADFI顯著降低(P<0.05)，0.30 g/kg黃芩素組ADFI顯著增加(P<0.05)，各試驗(yàn)組ADG、F/G和死亡率均無(wú)顯著差異(P>0.05)；43～63日齡，各試驗(yàn)組ADFI均顯著降低(P<0.05)，而ADG、F/G和死亡率均無(wú)顯著差異(P>0.05)；22～63日齡，0.20 g/kg黃芩素組ADFI和F/G均顯著降低(P<0.05)，0.40 g/kg黃芩素組ADG顯著降低(P<0.05)，各試驗(yàn)組死亡率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 黃芩素對(duì)湘黃肉雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of baicalein on growth performance of Hunan yellow chickens

2.2 黃芩素對(duì)湘黃肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，0.20 g/kg黃芩素組血清IgA含量顯著增加(P<0.05)，0.30 g/kg黃芩素組血清IgA和IgG含量均顯著增加(P<0.05)，各試驗(yàn)組血清IL-2含量均顯著增加(P<0.05)，而血清IgM、IL-1β、IL-4和TNF-α含量則均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 黃芩素對(duì)湘黃肉雞血清免疫指標(biāo)的影響Table 3 Effects of baicalein on serum immune indexes of Hunan yellow chickens

2.3 黃芩素對(duì)湘黃肉雞抗氧化能力的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，0.10和0.20 g/kg黃芩素組血清T-SOD活性均顯著增加(P<0.05)，各試驗(yàn)組血清T-AOC、GSH-Px活性以及GSH、H2O2和MDA含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)；0.10 g/kg黃芩素組肝臟T-AOC顯著增加(P<0.05)，0.20 g/kg黃芩素組肝臟T-AOC和T-SOD活性均顯著增加(P<0.05)，各試驗(yàn)組肝臟H2O2含量均顯著降低(P<0.05)，而肝臟GSH-Px活性、GSH和MDA含量則均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 黃芩素對(duì)湘黃肉雞抗氧化能力的影響Table 4 Effects of baicalein on antioxidant ability of Hunan yellow chickens

2.4 黃芩素對(duì)湘黃肉雞血脂狀態(tài)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，0.30 g/kg黃芩素組肉雞血清TC含量顯著降低(P<0.05)，各試驗(yàn)組血清TG、HDL-C和LDL-C含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 黃芩素對(duì)湘黃肉雞血脂狀態(tài)的影響Table 5 Effects of baicalein on blood lipid status of Hunan yellow chickens mmol/L

2.5 黃芩素對(duì)湘黃肉雞肉品質(zhì)的影響

表6 黃芩素對(duì)湘黃肉雞肉品質(zhì)的影響Table 6 Effects of baicalein on meat quality of Hunan yellow chickens

3 討 論

3.1 黃芩素對(duì)湘黃肉雞生長(zhǎng)性能的影響

與對(duì)照組相比，0.20 g/kg黃芩素組湘黃肉雞的全試驗(yàn)期ADFI和F/G顯著降低，且死亡率最低，0.30 g/kg黃芩素組ADG最高，而0.40 g/kg黃芩素組ADG顯著降低，說(shuō)明適宜添加量的黃芩素具有一定的促生長(zhǎng)效果。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，22～42日齡時(shí)添加黃芩素的各試驗(yàn)組的ADFI有升高有降低，而43～63日齡時(shí)ADFI均顯著降低，說(shuō)明黃芩素在不同飼喂階段對(duì)肉雞采食量的影響存在差異，具體原因有待進(jìn)一步研究。Zhou等[12]對(duì)肉仔雞的研究發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)飼糧中添加0.1～0.2 g/kg黃芩素時(shí)，能夠顯著增加ADG和飼料轉(zhuǎn)化率，與本研究結(jié)果基本一致。徐禎等[10]研究表明，基礎(chǔ)飼料中添加0.2 g/kg黃芩素飼喂草魚，草魚增重率較對(duì)照提高8.63%，飼料系數(shù)較對(duì)照降低0.14。也有研究表明，基礎(chǔ)飼料中添加0.5 g/kg黃芩素飼喂鯉魚，對(duì)生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，且對(duì)鯉魚健康狀況產(chǎn)生了負(fù)面作用[11]。綜上可知，適宜添加量的黃芩素對(duì)其促生長(zhǎng)效果非常關(guān)鍵，在本試驗(yàn)條件下飼糧中添加0.20～0.30 g/kg黃芩素時(shí)22～63日齡湘黃肉雞的生長(zhǎng)效果較理想。

黃芩素的促生長(zhǎng)功效可能與其能影響腸道微生物生長(zhǎng)、提高益生菌比例、促進(jìn)消化酶分泌、提高飼料消化率和抑制炎性因子表達(dá)有關(guān)。腸炎沙門氏菌感染情況下，Varmuzova等[13]發(fā)現(xiàn)黃芩和姜黃提取物選擇性增加了雞糞桿菌和乳酸菌及其他益生菌的數(shù)量，并改善了其生長(zhǎng)性能。劉紅柏等[14]研究表明，飼料中添加黃芩可抑制鯉腸道內(nèi)氣單胞菌、鄰單胞菌等條件致病菌的生長(zhǎng)，并促進(jìn)芽孢桿菌等有益菌的生長(zhǎng)。Huang等[15]也報(bào)道，飼糧中添加1 000 mg/kg黃芩提取物，可減少斷奶仔豬腹瀉，并抑制核因子-κB(NF-κB)和p38信號(hào)通路降低炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。同時(shí)，黃芩素具有一定的抗氧化能力，能夠降低自由基對(duì)機(jī)體的損傷，也為改善湘黃肉雞的生長(zhǎng)性能創(chuàng)造了有利條件。

3.2 黃芩素對(duì)湘黃肉雞免疫功能的影響

3.3 黃芩素對(duì)湘黃肉雞抗氧化能力的影響

徐禎等[10]報(bào)道，飼料中添加0.2、0.4和0.6 g/kg黃芩素顯著提高草魚血清SOD活性，降低血清MDA含量，與本研究結(jié)果一致。Zhou等[12]在肉仔雞基礎(chǔ)飼糧中添加0.1～0.2 g/kg黃芩素，血清SOD、GSH-Px和CAT活性增加，肝臟SOD、GSH-Px和CAT活性顯著增加，與本研究結(jié)果基本一致，不同之處在于本研究中黃芩素并未提高血清及顯著提高肝臟的GSH-Px活性。張倩等[1]研究發(fā)現(xiàn)，黃芩素對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧陰離子均具有較強(qiáng)清除活性，并呈良好劑量依賴關(guān)系。在糖尿病小鼠上的試驗(yàn)表明，黃芩素[40 mg/(kg BW·d)]能夠抑制其氧化應(yīng)激，增加抗氧化酶的基因表達(dá)和活性[21]。Guo等[22]和Ma等[23]發(fā)現(xiàn)，黃芩素能夠激活并促進(jìn)核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)轉(zhuǎn)錄因子向人類白癲風(fēng)黑素細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，上調(diào)Nrf2基因及其靶基因表達(dá)，增加人類白癲風(fēng)黑素細(xì)胞抗氧化能力。Shi等[24]對(duì)小鼠的研究表明，黃芩素激活肝細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Nrf2，并通過(guò)與抗氧化反應(yīng)元件(ARE)相互作用，增加下游抗氧化酶基因的表達(dá)。綜上可知，黃芩素表現(xiàn)出一定的抗氧化效果，可不同程度地提高細(xì)胞抗氧化酶的基因表達(dá)和活性。

黃芩素提高機(jī)體抗氧化性的可能機(jī)制：一是促進(jìn)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，黃芩素能夠激活細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Nrf2，并通過(guò)與ARE相互作用，增加下游抗氧化酶基因表達(dá)和活性；二是黃芩素抗氧化性和清除自由基能力與其自身結(jié)構(gòu)有關(guān)[25-26]。黃芩素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：5,6,7-三酚羥基的存在；4位羰基的存在；C環(huán)C2與C3間不飽和鍵的存在；可結(jié)合過(guò)渡態(tài)金屬離子基團(tuán)。酚羥基數(shù)目越多，可與自由基反應(yīng)的氫原子越多，清除自由基能力越強(qiáng)；羥基氧原子通過(guò)p-π共軛效應(yīng)具有強(qiáng)烈斥電子作用，可形成氫鍵，與活性自由基反應(yīng)后生成的黃酮自由基更加穩(wěn)定，抗氧化性更強(qiáng)。

3.4 黃芩素對(duì)湘黃肉雞血脂狀態(tài)的影響

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，0.30 g/kg黃芩素組血清TC含量顯著降低，各試驗(yàn)組血清TG和HDL-C含量有一定減少或增加，表明黃芩素對(duì)改善血脂狀態(tài)有一定促進(jìn)作用；血清LDL-C含量隨黃芩素添加量的增加先降后升，且黃芩素添加量為0.30 g/kg時(shí)血清LDL-C含量最低。有關(guān)黃芩素對(duì)肉雞血脂水平影響的機(jī)理還不明確，有待深入研究。一般認(rèn)為，血清LDL-C含量升高和HDL-C含量降低是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素，可引起一系列心血管疾病。當(dāng)前多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道黃芩素或黃芩提取物對(duì)動(dòng)物血脂狀態(tài)有一定改善作用。對(duì)大鼠的研究表明，黃芩素(100 mg/kg)能降低肥胖大鼠體重、Lees指數(shù)、脂肪重量、脂體系數(shù)、血清TG和TC含量[27]；黃芩素防治4周后，高脂血癥性脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C及肝臟TC和TG含量降低或顯著降低，血清HDL-C含量升高[28]。Zhou等[12]對(duì)肉仔雞的研究表明，基礎(chǔ)飼糧中添加0.1～0.2 g/kg黃芩素時(shí)，顯著降低了血清TC、非高密度脂蛋白膽固醇(non-HDL-C)/HDL-C、LDL-C/HDL-C、TC/HDL-C、TG和LDL-C含量。Króliczewska等[29]報(bào)道，與高膽固醇組相比，新西蘭白兔飼糧中添加高膽固醇和黃芩根提取物后血清TG、TC和低密度脂蛋白(LDL)含量顯著降低，高密度脂蛋白(HDL)含量無(wú)顯著差異。Regulska-Ilow等[30]研究發(fā)現(xiàn)，分別以大鼠飼糧中添加15%新鮮豬油+0.5%膽固醇、氧化豬油+0.5%膽固醇、向日葵油+0.5%膽固醇為對(duì)照組，飼糧另補(bǔ)充0.05%黃芩提取物為試驗(yàn)組，結(jié)果顯示試驗(yàn)組血清TG、TC含量較上述對(duì)照組均下降。綜上可知，黃芩素對(duì)湘黃肉雞血脂狀態(tài)有一定的改善作用，黃芩素在飼糧中的添加量為0.30 g/kg時(shí)效果最佳。

3.5 黃芩素對(duì)湘黃肉雞肉品質(zhì)的影響

黃芩素屬于黃酮類化合物，黃酮類化合物在畜禽肉品質(zhì)應(yīng)用上有較多研究，多數(shù)應(yīng)用效果顯著，少數(shù)效果不顯著，但黃芩素在畜禽肉品質(zhì)上尚無(wú)研究報(bào)道。官麗輝等[35]研究發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)飼糧中添加5、10、15、20和25 mg/kg(Ⅰ～Ⅴ組)的大豆異黃酮，Ⅲ組壩上長(zhǎng)尾雞胸肌a*比Ⅰ組和Ⅴ組顯著提高11.12%和9.08%；肌肉pH比Ⅰ組和Ⅴ組顯著降低3.81%和2.14%；肌肉系水力顯著高于Ⅰ組11.9%；剪切力顯著低于其他劑量組。AA肉雞飼喂試驗(yàn)表明，飼糧中添加10或20 mg/kg紅車軸草異黃酮后，胸肌滴水損失率比對(duì)照組分別降低8.35%和2.99%，剪切力分別降低9.47%和4.27%[36]；飼糧中添加0.2%沙棘黃酮后，胸肌滴水損失率顯著降低，胸肌pH24 h、剪切力有降低趨勢(shì)[37]。李莉等[38]在黃羽肉雞飼糧中添加山楂葉總黃酮的試驗(yàn)表明，胸肌和腿肌肉色色度百分比顯著提高，胸肌滴水損失率降低，但對(duì)胸肌剪切力和pH的影響不顯著。Xu等[39]報(bào)道，在草魚飼料中添加0.2～0.6 g/kg槲皮素，顯著增加了肌肉氨基酸含量，顯著減少了鮮肉蒸煮損失量。綜上可知，黃芩素對(duì)畜禽等的肉品質(zhì)有一定改善作用，但同時(shí)存在胸肌肉色等指標(biāo)效果不一問(wèn)題。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，飼糧添加0.20～0.30 g/kg黃芩素能夠提高22～63日齡湘黃肉雞的生長(zhǎng)性能，添加0.30 g/kg黃芩素能夠改善22～63日齡湘黃肉雞的免疫功能和血脂狀態(tài)，添加0.20 g/kg黃芩素能夠增加22～63日齡湘黃肉雞的抗氧化能力，添加0.40 g/kg黃芩素能夠改善22～63日齡湘黃肉雞的肉品質(zhì)。綜上可知，黃芩素能夠改善22～63日齡湘黃肉雞的生長(zhǎng)性能、免疫功能、抗氧化能力、血脂狀態(tài)和肉品質(zhì)，飼糧中黃芩素的適宜添加量為0.20～0.30 g/kg。