曹 楠 楊舒展 胡春燕 陸智兒 劉潔娜 錢 隆 李婉雁 黃運(yùn)茂 許丹寧*

(1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，廣州 510225；2.廣東省水禽健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510225；3.廣州海關(guān)技術(shù)中心，廣州 510000)

在畜禽生產(chǎn)過(guò)程中，抗生素可以減少致病菌的數(shù)量、預(yù)防或治療疾病以及促進(jìn)畜禽機(jī)體生長(zhǎng)[1]。然而，大量、長(zhǎng)期地使用抗生素造成了抗生素在環(huán)境中的蓄積以及超級(jí)耐藥菌的產(chǎn)生，造成環(huán)境污染及公共衛(wèi)生隱患[2]。為了解決這些問(wèn)題，需找到合適的綠色飼料添加劑來(lái)提高飼料的利用率以及提升畜禽的生長(zhǎng)性能，并同時(shí)提升畜禽免疫機(jī)能以減少抗生素的使用。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖能夠有效地提高飼料利用率，在提升動(dòng)物生長(zhǎng)性能方面發(fā)揮著重要作用。Ma等[3]證明了酵母多糖可以增強(qiáng)肥育豬抗氧化能力并提升免疫機(jī)能，同時(shí)還可以降低肥育豬的背脂厚、板油重，改善豬肉肉色、系水力，提高肌內(nèi)脂肪含量，改善肉品質(zhì)。小刺猴頭多糖也被發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，降低料重比(F/G)，提高機(jī)體抗氧化能力及免疫功能[4]。此外，相比較于傳統(tǒng)飼料添加劑和抗生素，植物多糖具有無(wú)毒、高效、無(wú)殘留的優(yōu)點(diǎn)，使得植物多糖可以在畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中有著更廣泛的應(yīng)用。

白術(shù)多糖(polysaccharide ofAtractylodesmacrocephalaKoidz，PAMK)作為白術(shù)的主要活性成分，擁有抗菌消炎、抗癌、抗氧化等作用[5]。除此之外，田允波等[6]通過(guò)給“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交仔豬飼喂白術(shù)多糖，發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖能提高仔豬平均日增重(ADG)，降低F/G，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，促進(jìn)生長(zhǎng)。但是目前還沒(méi)有白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能和屠宰性能影響的研究。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平的白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能、屠宰性能和免疫器官發(fā)育的影響，以期為白術(shù)多糖作為無(wú)殘留、無(wú)毒性的綠色功能性飼料添加劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

嶺南黃雞購(gòu)于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。白術(shù)多糖(含量為95%)購(gòu)于西安市某生物制劑公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

將240只1日齡嶺南黃雞隨機(jī)分成4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞(公母各占1/2)，各重復(fù)之間體重?zé)o顯著差異(P<0.05)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加100(PAMK100組)、400(PAMK400組)、800 mg/kg(PAMK800組)的白術(shù)多糖。試驗(yàn)期35 d。參照《肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制成顆粒配合飼料，試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。采用籠養(yǎng)方式飼養(yǎng)于同一舍內(nèi)，飼養(yǎng)密度根據(jù)雛雞生長(zhǎng)情況酌情進(jìn)行安排。自由飲水，采取勤添少喂的方法。試驗(yàn)期間定時(shí)定量給料，舍內(nèi)保持適宜溫度、濕度及通風(fēng)，保持雞舍內(nèi)的衛(wèi)生。肉雞按常規(guī)免疫程序進(jìn)行疫苗接種。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry-basis)

1.3 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

根據(jù)總增重、平均日采食量(ADFI)、ADG和F/G評(píng)估生長(zhǎng)性能。分別在21和35日齡時(shí)，每天11:00測(cè)量每只雞的體重，并以每個(gè)重復(fù)為單位記錄飼料耗料量，然后計(jì)算ADG、ADFI和F/G。

1.4 屠宰性能指標(biāo)檢測(cè)

在35日齡時(shí)，分別在每個(gè)重復(fù)中選取1只嶺南黃雞記錄體重，然后頸部放血處死，按《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》(NY/T 823—2004)測(cè)定屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率。

1.5 免疫器官指數(shù)測(cè)定

在35日齡時(shí)，分別在每個(gè)重復(fù)中選取1只嶺南黃雞，頸部放血處死后摘取肝臟、胸腺、脾臟及法氏囊，稱重記錄，按公式計(jì)算免疫器官指數(shù)：

免疫器官指數(shù)(mg/g)=免疫器官重(mg)/體重(g)。

1.6 免疫器官組織結(jié)構(gòu)檢測(cè)

肝臟、胸腺、脾臟及法氏囊的組織學(xué)檢測(cè)采用石蠟組織切片法，具體步驟參照何書(shū)海等[7]的方法進(jìn)行操作。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法多重比較，結(jié)果以“平均值+標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能的影響

如表2所示，與對(duì)照組相比，PAMK400組嶺南黃雞1～21日齡和1～35日齡的總增重和ADG均有所升高，但是差異不顯著(P>0.05)。PAMK400組嶺南黃雞1～21日齡和1～35日齡的ADFI均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。PAMK400組嶺南黃雞1～21日齡和1～35日齡的F/G均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組相比，PAMK100和PAMK800組嶺南黃雞1～21日齡、22～35日齡和1～35日齡的總增重、ADG均無(wú)顯著差異(P>0.05)。PAMK100和PAMK800組嶺南黃雞1～21日齡的ADFI和F/G均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，PAMK100和PAMK800組嶺南黃雞1～35日齡的ADFI和F/G僅有所降低，與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。

表2 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of PAMK on growth performance of Lingnan yellow chickens

2.2 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞屠宰性能的影響

如表3所示，35日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，PAMK100、PAMK400和PAMK800組嶺南黃雞的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率均顯著升高(P<0.05)，但是胸肌率和腿肌率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞屠宰性能的影響Table 3 Effects of PAMK on slaughter performance of Lingnan yellow chickens %

2.3 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞免疫器官指數(shù)的影響

如表4所示，與對(duì)照組相比，PAMK100、PAMK400和PAMK800組嶺南黃雞21和42日齡的胸腺指數(shù)均有所升高，但是差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，PAMK100組嶺南黃雞21日齡的脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)，PAMK100、PAMK400和PAMK800組嶺南黃雞42日齡的脾臟指數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比，PAMK100和PAMK400組21日齡的法氏囊指數(shù)顯著升高(P<0.05)，PAMK100和PAMK400組42日齡的法氏囊指數(shù)有所升高，但是差異不顯著(P>0.05)。

表4 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effects of PAMK on immune organ indexes of Lingnan yellow chickens mg/g

2.4 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞免疫器官組織結(jié)構(gòu)的影響

2.4.1 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖1所示，21和42日齡時(shí)，嶺南黃雞肝臟組織發(fā)育良好，肝索結(jié)構(gòu)清晰，肝血竇內(nèi)可見(jiàn)庫(kù)普弗細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等，匯管區(qū)(門管區(qū))小葉間膽管上皮細(xì)胞形態(tài)良好。21日齡時(shí)，PAMK800組嶺南黃雞的肝血竇間隙較大，肝細(xì)胞胞漿變少，著色較淺，雙核肝細(xì)胞數(shù)量較其余試驗(yàn)組明顯減少；35日齡時(shí)，PAMK800組肝細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常，但雙核肝細(xì)胞數(shù)量仍然較少。相比較而言，PAMK400組在21和35日齡時(shí)的肝臟組織結(jié)構(gòu)及肝細(xì)胞的形態(tài)最好，雙核肝細(xì)胞的數(shù)量也最多。

2.4.2 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞胸腺組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖2所示，21日齡時(shí)，各試驗(yàn)組嶺南黃雞胸腺發(fā)育良好，胸腺小葉髓質(zhì)區(qū)中胸腺小體較多見(jiàn)，髓質(zhì)區(qū)面積較?。?5日齡時(shí)，各試驗(yàn)組髓質(zhì)區(qū)面積明顯增大，可見(jiàn)較多胸腺上皮細(xì)胞、成熟的胸腺細(xì)胞等，但胸腺小體數(shù)量較21日齡時(shí)少。其中，PAMK400組胸腺在21和35日齡時(shí)發(fā)育最好，髓質(zhì)中可見(jiàn)的成熟胸腺細(xì)胞數(shù)量最多，皮髓分界明顯。

CV：中央靜脈；▲：匯管區(qū)；↓：肝血竇；：小葉間膽管。CV: central vein; ▲: manifold area; ↓: sinusoids; : interlobular bile duct.圖1 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.1 Effects of PAMK on liver tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×)

2.4.3 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞脾臟組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖3所示，各試驗(yàn)組嶺南黃雞脾小結(jié)及動(dòng)脈周圍淋巴鞘內(nèi)淋巴細(xì)胞排列密集有序，細(xì)胞染色正常，形態(tài)良好，隨著日齡的增長(zhǎng)，35日齡時(shí)嶺南黃雞脾小結(jié)直徑增大，動(dòng)脈周圍淋巴鞘增厚，飼糧中添加不同水平的白術(shù)多糖均能夠很好地促進(jìn)脾臟的發(fā)育，沒(méi)有不良影響。

2.4.4 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞法氏囊組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖4所示，21日齡時(shí)，各試驗(yàn)組嶺南黃雞法氏囊發(fā)育良好，黏膜皺襞內(nèi)的淋巴濾泡排列整齊，多為不規(guī)則形狀，其中，PAMK400和PAMK800組中長(zhǎng)橢圓形的大淋巴濾泡數(shù)量明顯高于對(duì)照組和PAMK100組，濾泡排列也更加緊密；淋巴濾泡中皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)層厚度相差不大。35日齡時(shí)，淋巴濾泡內(nèi)皮髓分界更加明顯，淋巴細(xì)胞數(shù)量和皮質(zhì)區(qū)厚度較21日齡時(shí)都有所增加，其中，PAMK400組的皮質(zhì)層最厚，發(fā)育最好。

3 討 論

3.1 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響

植物多糖在畜牧生產(chǎn)上有著較為廣泛的應(yīng)用，飼料配方中也常采用添加適量植物多糖以提高畜禽的生長(zhǎng)性能。Wu等[8]在飼糧中添加了1 g/kg的黃芪多糖后提升了仔雞淀粉酶、脂肪酶等相關(guān)消化酶的活性，有效改善了仔雞的生長(zhǎng)性能。黃芪多糖在聯(lián)合蠅蛆粉后著提高了黃羽肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)代謝率，改善了半凈膛率、胸肌率等屠宰性能指標(biāo)，促進(jìn)了黃羽肉雞生長(zhǎng)發(fā)育[9]。孫波等[10]在飼糧中添加黃芪多糖，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)飼喂黃芪多糖提高了肉雞的ADG，并且降低了F/G。張才等[11]研究發(fā)現(xiàn)，甘草多糖能夠提高22～42日齡肉雞的ADG，并且能夠顯著降低F/G。也有研究表明，白術(shù)多糖能促進(jìn)血清生長(zhǎng)激素、環(huán)腺苷酸等相關(guān)生長(zhǎng)激素的分泌，促進(jìn)斷奶仔豬DNA、蛋白質(zhì)的合成，提高機(jī)體的新陳代謝，有效對(duì)抗脂肪沉積，阻遏脂肪合成，促進(jìn)斷奶仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育[12]。

趙淑珍[13]也證明了白術(shù)多糖能夠提高鵪鶉的ADG，降低F/G，對(duì)鵪鶉的生長(zhǎng)性能具有正向調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，苜蓿多糖對(duì)肉雞的屠宰率沒(méi)有顯著影響，但是提高了全凈膛率，并且提高了肉雞的胸肌率[14]。李娜等[15]研究發(fā)現(xiàn)，西瓜皮多糖能夠提高21日齡嶺南黃雞的胸肌率，并且在降低腹脂率方面也發(fā)揮了很大作用。本試驗(yàn)結(jié)果與之前的研究類似，飼糧中添加400 mg/kg的白術(shù)多糖顯著降低了嶺南黃雞的ADFI和F/G，有提高總增重和ADG的趨勢(shì)；PAMK400組嶺南黃雞的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率與對(duì)照組相比均顯著提高，但是胸肌率和腿肌率與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。

★：皮質(zhì)；▲：髓質(zhì)；：胸腺小體；：成熟的胸腺細(xì)胞團(tuán)。★: cortex; ▲: medulla; : thymic corpuscle; : mature thymocyte mass.圖2 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞胸腺組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.2 Effects of PAMK on thymus tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×)

3.2 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞免疫器官發(fā)育的影響

畜禽機(jī)體免疫功能的增強(qiáng)可以提高機(jī)體的抗病能力，抵抗病原體的入侵，減少機(jī)體的患病率，保證機(jī)體的器官、組織功能正常，維持機(jī)體的內(nèi)環(huán)境平衡，為機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育提供良好的生理生化環(huán)境。機(jī)體免疫力的大小在一定程度上受到免疫器官大小的影響。免疫器官的重量的增長(zhǎng)通常代表會(huì)有更多的免疫細(xì)胞聚集，從而提升自身的免疫機(jī)能。張嘉琪等[9]在飼糧中添加了黃芪多糖和蠅蛆粉后可以顯著提高黃羽肉雞的免疫器官指數(shù)，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力。耿兵等[16]在飼糧中添加桑葉多糖后，可以顯著提高雛雞免疫器官指數(shù)，改善雛雞的免疫機(jī)能。也有研究證明了大蒜多糖可以顯著提高肉雞的胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)，提高機(jī)體抗病力[17]。Xiang等[18]研究證明，白術(shù)多糖可以提高小鼠的脾臟指數(shù)，并且能夠改善由環(huán)磷酰胺造成的脾臟指數(shù)下降。本試驗(yàn)的結(jié)果與上述研究類似，飼糧中添加400 mg/kg的白術(shù)多糖后，嶺南黃雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著增加；胸腺指數(shù)呈上升趨勢(shì)，但是沒(méi)有顯著差異。PAMK100組嶺南黃雞的免疫器官指數(shù)的改變沒(méi)有PAMK400組明顯，這可能是因?yàn)榘仔g(shù)多糖的添加水平不夠，達(dá)不到相應(yīng)的效果。而PAMK800組嶺南黃雞的免疫器官指數(shù)的改變也沒(méi)有PAMK400組明顯，可能是因?yàn)榘仔g(shù)多糖添加水平過(guò)高，反而對(duì)嶺南黃雞的免疫器官有一定的損害。

CA：中央動(dòng)脈；RP：紅髓；SN：脾小結(jié)；PALS：動(dòng)脈周圍淋巴鞘。CA: central arteriole; RP: red pulp; SN: splenic nodule; PALS: periarterial lymphatic sheath.圖3 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞脾臟組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.3 Effects of PAMK on spleen tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×)

★：皮質(zhì)；▲：髓質(zhì)；↓：中間層上皮網(wǎng)狀細(xì)胞?！? cortex; ▲: medulla; ↓: intermediate epithelial reticular cells.圖4 白術(shù)多糖對(duì)嶺南黃雞法氏囊組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.4 Effects of PAMK on bursa of Fabricius tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×)

李婉雁[19]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加400 mg/kg白術(shù)多糖可以維持馬崗鵝雛鵝的胸腺、脾臟和法氏囊的正常組織形態(tài)和超顯微結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步的研究證明，當(dāng)環(huán)磷酰胺造成馬崗鵝胸腺和脾臟結(jié)構(gòu)異常之后，白術(shù)多糖能夠有效緩解損傷使之恢復(fù)到正常水平[18,20]。Guo等[5]研究表明，飼喂白術(shù)多糖之后，小鼠肝臟肝小葉完整，肝索排列整齊，肝細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞質(zhì)保存完好，核仁清晰，并且白術(shù)多糖可以緩解脂多糖(LPS)介導(dǎo)的肝細(xì)胞腫脹、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及肝索結(jié)構(gòu)紊亂。本研究結(jié)果與之前研究結(jié)果類似，飼糧添加白術(shù)多糖之后，嶺南黃雞各個(gè)組織器官的結(jié)構(gòu)形態(tài)良好。肝索結(jié)構(gòu)清晰，肝血竇內(nèi)可見(jiàn)庫(kù)普弗細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等，肝臟雙核細(xì)胞數(shù)量增多，各種類型細(xì)胞型態(tài)良好；各試驗(yàn)組胸腺髓質(zhì)區(qū)面積顯著增大，胸腺中成熟胸腺細(xì)胞數(shù)量增多，皮髓分界明顯；脾臟中淋巴細(xì)胞排列密集有序，形態(tài)良好；法氏囊中大淋巴濾泡數(shù)量增多，濾泡排列也更加緊密，淋巴濾泡內(nèi)皮髓分界更加明顯。

4 結(jié) 論

飼糧中添加400 mg/kg白術(shù)多糖能夠顯著降低嶺南黃雞的ADFI和F/G，并且顯著提高屠宰率、半凈膛率和全凈膛率；同時(shí)能夠提高胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，促進(jìn)各免疫器官淋巴細(xì)胞的分裂分化，提高免疫活性，加強(qiáng)機(jī)體的免疫屏障。