景奉堂 馮帥 王靜 呂緒楨 張?zhí)煲?張?zhí)戾a 李峰

中圖分類號(hào) R284;R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）03-0293-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.03.07

摘 要 目的 預(yù)測(cè)連翹的質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）。方法 采用高效液相色譜法建立10批連翹藥材的指紋圖譜，并進(jìn)行共有峰指認(rèn)，篩選連翹藥材中的Q-Marker候選成分;采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)連翹揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，篩選揮發(fā)油中的Q-Marker候選成分;然后將篩選的Q-Marker候選成分進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，構(gòu)建“連翹Q-Marker候選成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，并預(yù)測(cè)連翹的Q-marker。結(jié)果與結(jié)論 10批連翹藥材共得到21個(gè)共有峰，指認(rèn)了連翹苷、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、蘆丁4個(gè)成分;經(jīng)GC-MS分析后得到連翹揮發(fā)油中β-蒎烯、α-蒎烯、松油烯-4-醇、檸檬烯、γ-松油烯、α-水芹烯、β-月桂烯7個(gè)Q-Marker候選成分;進(jìn)一步經(jīng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析共得到16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)和17條通路，初步預(yù)測(cè)連翹苷、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、蘆丁、松油烯-4-醇、α-水芹烯、α-蒎烯、β-蒎烯為連翹的Q-marker。

關(guān)鍵詞 連翹;質(zhì)量標(biāo)志物;指紋圖譜;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

Predictive analysis of quality markers of Forsythia suspensa based on fingerprint and network pharmacology

JING Fengtang1，F(xiàn)ENG Shuai1，2，WANG Jing3，LYU Xuzhen1，ZHANG Tianyi1，ZHANG Tianxi1，LI Feng1，2（1. School of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan 250355， China; 2. Collaborative Innovation Center for Quality Control and Construction of Whole Industrial Chain for Traditional Chinese Medicine in Universities of Shandong Province， Jinan 250355， China; 3. Dongying District Market Supervision and Administration Bureau in Dongying City， Shandong Dongying 257000， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To predict the quality marker （Q-Marker） of Forsythia suspensa. METHODS The fingerprints of 10 batches of F. suspensa were established by high performance liquid chromatography. The common peaks were confirmed. The candidate components of Q-Marker in F. suspensa were screened. The volatile oil of F. suspensa were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）， and the candidate components of Q-Marker in volatile oil were screened. The network pharmacology analysis was performed for the candidate components of Q-Marker. The network diagram of the “candidate components of F. suspensa Q-Marker-target-pathway” was constructed to predict the Q-marker of F. suspensa. RESULTS & CONCLUSIONS Twenty-one common peaks were obtained for 10 batches of F. suspensa， and four components were identified as phillyrin， forsythoside A， pinoresinol-4-O-β-D-glucoside and rutin. Seven candidate components were obtained by GC-MS analysis， such as β-pinene， α-pinene， terpinen-4-ol， limonene， γ-terpinene， α-phellandrene， β-myrcene. By network pharmacology analysis， 16 key targets and 17 pathways were obtained. It was preliminarily predicted that phillyrin， forsythoside A， pinoresinol-4-O-β-D-glucoside， rutin， terpinen-4-ol， α-phellandrene， α-pinene and β-pinene were Q-marker of F. suspensa.

KEYWORDS? ?Forsythia suspensa; quality marker; fingerprint; network pharmacology

連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl的干燥果實(shí)。根據(jù)采收期的不同，初熟尚帶綠色時(shí)采收、除去雜質(zhì)、蒸熟、曬干者，習(xí)稱“青翹”;果實(shí)熟透時(shí)采收、除去雜質(zhì)、曬干者，習(xí)稱“老翹”[1]。連翹具有清熱解毒、消腫散結(jié)、疏散風(fēng)熱之功效，常用于治療風(fēng)熱感冒、溫病初起、乳癰腫毒等[1]，其中青翹在發(fā)汗、抑菌解毒方面優(yōu)于老翹，已成為市場(chǎng)主流品種[2]。現(xiàn)代研究表明，連翹中主要含有木脂素類、苯乙醇苷類、揮發(fā)油類成分，具有抗炎、抑菌、抗腫瘤、抗氧化等藥理作用[3]。

目前，市售連翹藥材質(zhì)量參差不齊，存在采收搶“青”、市場(chǎng)等級(jí)規(guī)格劃分不清的情況。2020年版《中國(guó)藥典》連翹含量測(cè)定項(xiàng)下僅對(duì)連翹苷、連翹酯苷A、總揮發(fā)油進(jìn)行控制[1]，而連翹中含有的化學(xué)成分復(fù)雜，揮發(fā)性成分缺乏細(xì)致研究，其主要活性成分及作用靶點(diǎn)尚不明確，無(wú)法反映中藥多成分、多靶點(diǎn)、整體性的特點(diǎn)。因此，如何制定合理的連翹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保障連翹藥材質(zhì)量，是亟待解決的問(wèn)題。

中藥指紋圖譜可以對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行較全面控制[4-5]，而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于數(shù)據(jù)庫(kù)，以“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)”為核心，可對(duì)中藥成分、靶點(diǎn)、通路進(jìn)行梳理分析[6]，因此兩者相結(jié)合既可以從整體上控制藥材質(zhì)量，也可以揭示中藥發(fā)揮其功效的物質(zhì)基礎(chǔ)及途徑?；诖?，本研究采用高效液相色譜（HPLC）法建立連翹藥材的指紋圖譜，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)連翹揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，再利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)連翹成分、靶點(diǎn)、通路進(jìn)行整理分析，并預(yù)測(cè)其潛在的質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-marker），旨在為連翹質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：1260 InfinityⅡ型HPLC儀、7890B/7000D型GC-MS儀（美國(guó)Agilent公司），F(xiàn)W-80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)、DZTW型電子調(diào)溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司），F(xiàn)A2004B型萬(wàn)分之一電子天平（上海天美天平儀器有限公司），KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），TDL-5-A型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 主要藥品與試劑

連翹苷（批號(hào)Z27A9X59731）、連翹酯苷A（批號(hào)Z10N9L71605）、松脂素-β-D-葡萄糖苷（批號(hào)M25GB- 142883）、蘆?。ㄅ?hào)Y24F11Y17051）的對(duì)照品（純度均大于98%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;無(wú)水硫酸鈉（分析純，批號(hào)F20110307）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;乙酸乙酯（分析純，批號(hào)20170816）購(gòu)自天津市富宇精細(xì)化工有限公司;甲醇、甲酸均為色譜純;水為娃哈哈飲用純凈水。

本研究所用10批連翹藥材（均為青翹，編號(hào)S1～S10）購(gòu)自不同產(chǎn)地（S1、S4樣品購(gòu)自山西，S2樣品購(gòu)自河北，S3樣品購(gòu)自江西，S5樣品購(gòu)自陜西商洛，S6～S8樣品購(gòu)自安徽亳州，S9樣品購(gòu)自四川，S10樣品購(gòu)自山東泰安），經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李峰教授鑒定，符合2020年版《中國(guó)藥典》規(guī)定，均為木犀科植物連翹F. suspensa （Thunb.） Vahl的干燥果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 連翹HPLC指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為0.2%甲酸溶液（A）-甲醇（B）（梯度洗脫：0～15 min，10%B→20%B;15～30 min，20%B→26.5%B;30～31 min，26.5%B→29.2%B;31～50 min，29.2%B→35%B;50～63 min，35%B→40%B;63～69 min，40%B→48%B;69～75 min，48%B→53%B;75～80 min，53%B→60%B）;檢測(cè)波長(zhǎng)為242 nm;流速為1 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為5 μL。

2.1.2 供試品溶液的制備 取10批連翹藥材，粉碎過(guò)四號(hào)篩，精密稱定1.5 g粉末，置于具塞錐形瓶中，加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定，超聲提取（頻率40 kHz，功率300 W）30 min;放冷，稱定，用70%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，以5 000 r/min離心5 min;取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 混合對(duì)照品溶液的制備 取連翹苷、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、蘆丁對(duì)照品，精密稱定，加甲醇振搖、溶解制成含連翹苷84 μg/mL、連翹酯苷A 174? ? μg/mL、松脂素-β-D-葡萄糖苷128 μg/mL、蘆丁 92 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取連翹供試品溶液（編號(hào)S10），按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以15號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.23%，相對(duì)峰面積RSD均小于3.86%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取連翹藥材S10樣品平行制備6份供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以15號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于1.03%，相對(duì)峰面積RSD均小于3.14%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取連翹供試品溶液（編號(hào)S10），于室溫放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以 15號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.22%，相對(duì)峰面積RSD均小于3.41%，表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 指紋圖譜建立 取10批連翹藥材，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012年版）》，以S1樣品的色譜圖作為參照?qǐng)D譜，運(yùn)用中位數(shù)法，將時(shí)間窗寬度設(shè)置為0.1 min，然后生成10批連翹藥材的疊加HPLC指紋圖譜（圖1）和連翹藥材的對(duì)照指紋圖譜R（圖2）;并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，得到10批連翹藥材指紋圖譜的相似度在0.902～0.997范圍內(nèi)（表1）。

2.1.8 共有峰指認(rèn) 取“2.1.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，得到混合對(duì)照品溶液色譜圖（圖3）。

由圖1可知，10批連翹藥材有21個(gè)共有峰，通過(guò)與圖3進(jìn)行比對(duì)，指認(rèn)出13號(hào)峰為蘆?。╮utin）、15號(hào)峰為連翹酯苷A（forsythoside A）、16號(hào)峰為松脂素-β-D-葡萄糖苷（pinoresinol-4-O-β-D-glucoside）、18號(hào)峰為連翹苷（phillyrin）。經(jīng)筆者查詢發(fā)現(xiàn)，2020年版《中國(guó)藥典》連翹含量測(cè)定項(xiàng)下規(guī)定了連翹苷、連翹酯苷A的含量[1]，由此可認(rèn)為這兩者是連翹質(zhì)量的指標(biāo)性成分。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，蘆丁、松脂素-β-D-葡萄糖苷具有顯著的抗炎、抗菌、抗病毒作用，也可認(rèn)為是連翹發(fā)揮功效的主要有效成分[7-10]?；诖?，筆者將這4種成分作為連翹Q-marker的候選成分。

2.2 連翹揮發(fā)油的GC-MS圖譜建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱為HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;進(jìn)樣溫度為200 ℃;載氣為氮?dú)?分流比為20 ∶ 1;流速為1 mL/min;進(jìn)樣量為1 μL;采用程序升溫方式 （50 ℃保持5 min;以0.75 ℃/min升至65 ℃，保持5 min;以5 ℃/min升至105 ℃，保持2 min;以20 ℃/min升至225 ℃，保持4 min）。

2.2.2 質(zhì)譜條件 離子源為電轟擊離子源;電子能量為70 eV;接口溫度為250 ℃;離子源溫度為200 ℃;四極桿溫度為150 ℃;電子倍增電壓為1 906 V;質(zhì)量掃描范圍為50～550 amu。

2.2.3 揮發(fā)油供試品溶液制備 取連翹粉末50 g，精密稱定，置于1 L圓底燒瓶中，加水500 mL浸泡0.5 h，然后采用水蒸氣蒸餾法連續(xù)回流6 h[11];收集揮發(fā)油，加適量無(wú)水硫酸鈉粉末干燥，除去固體不溶物，即得連翹揮發(fā)油（得率為0.94%～1.62%）。移取連翹揮發(fā)油0.4 mL，置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，即得揮發(fā)油供試品溶液。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 取連翹揮發(fā)油供試品溶液（編號(hào)S10），按“2.2.1”與“2.2.2”項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以3號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各峰峰面積。結(jié)果顯示，各峰峰面積RSD均小于0.2%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取連翹藥材S10樣品平行制備6份揮發(fā)油供試品溶液，按“2.2.1”與“2.2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以3號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各峰峰面積。結(jié)果顯示，各峰峰面積RSD均小于0.1%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取連翹揮發(fā)油供試品溶液（編號(hào)S10），于室溫放置0、2、4、8、12、24 h后，按“2.2.1”與“2.2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以3號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各峰峰面積。結(jié)果顯示，各峰峰面積RSD均小于0.2%，表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 GC-MS圖譜分析 取“2.2.3”項(xiàng)下連翹揮發(fā)油供試品溶液，按“2.2.1”與“2.2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，得到連翹揮發(fā)油成分的GC-MS總離子流圖（圖4）。然后將所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過(guò)質(zhì)譜工作站標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索、匹配后，確定各成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，通過(guò)與各樣品圖譜對(duì)比，得到連翹揮發(fā)油7個(gè)成分，分別為β-蒎烯（β-pinene）、α-蒎烯（α-pinene）、松油烯-4-醇（terpinen-4-ol）、檸檬烯（limonene）、γ-松油烯（γ-terpinene）、α-水芹烯（α-phellandrene）、β-月桂烯（β-myrcene）。采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，得出上述7個(gè)連翹揮發(fā)油成分的相對(duì)百分含量總和約80%（表2），表明這7個(gè)成分在連翹揮發(fā)油中的代表性較強(qiáng)，可作為連翹揮發(fā)油Q-marker的候選成分。

3 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)連翹Q-Marker

通過(guò)上述對(duì)10批連翹藥材的研究，筆者推測(cè)出蘆丁、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、連翹苷、β-蒎烯、α-蒎烯、松油烯-4-醇、檸檬烯、γ-松油烯、α-水芹烯、β-月桂烯11個(gè)成分可能是連翹Q-Marker的候選成分。基于此，筆者采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法進(jìn)一步預(yù)測(cè)連翹的Q-Marker。

3.1 連翹Q-Marker候選成分的靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

采用TCMSP、SwissTargetPrediction、PubChem Compound等數(shù)據(jù)庫(kù)檢索連翹11個(gè)Q-Marker候選成分的靶點(diǎn)信息，除去重復(fù)信息后，最終得到相關(guān)靶點(diǎn)共97個(gè)。將這11個(gè)成分和97個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件中，構(gòu)建“連翹Q-Marker候選成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖5（圖中三角形節(jié)點(diǎn)代表連翹Q-Marker候選成分;圓形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn);節(jié)點(diǎn)大小代表度值大小，度值越大，說(shuō)明靶點(diǎn)間相互作用關(guān)系越密切[12-13]）。

3.2 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

將“3.1”項(xiàng)下所得的97個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)中，選擇物種為“Homo sapiens”，去掉單一節(jié)點(diǎn)，結(jié)果保存成.tsv格式，將建立的蛋白相互作用關(guān)系導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件中進(jìn)行可視化分析[14]，得到蛋白互作 （protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖6（圖中節(jié)點(diǎn)大小、顏色深淺均代表度值大小）;選取網(wǎng)絡(luò)中度值大于9的靶點(diǎn)作為關(guān)鍵靶點(diǎn)[15]，結(jié)果共獲得16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)（表3）。

3.3 基因本體功能富集分析

利用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)“3.2”項(xiàng)下獲得的16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）富集分析，以P<0.05進(jìn)行篩選，并根據(jù)P值從小到大排序，得到66個(gè)生物過(guò)程（biological process，BP）條目、17個(gè)細(xì)胞組成（cellular component，CC）條目和11個(gè)分子功能（molecular function，MF）條目。筆者選取各條目的前10條進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)的BP主要參與脂質(zhì)分解代謝過(guò)程的負(fù)調(diào)控（negative regulation of lipid catabolic process）、平滑肌收縮的調(diào)節(jié)（regulation of smooth muscle contraction）、一氧化氮生物合成過(guò)程的正調(diào)控（positive regulation of nitric oxide biosynthetic process）等;CC主要與質(zhì)膜（plasma membrane）、神經(jīng)元（neuron）等有關(guān);MF主要參與調(diào)控G蛋白偶聯(lián)腺苷受體活性（G-protein coupled adenosine receptor activity）、α2腎上腺素能受體活性（alpha2-adrenergic receptor activity）、大麻素受體活性（cannabinoid receptor activity）等，詳見(jiàn)圖7。

3.4 京都基因與基因組百科全書(shū)富集分析

采用David 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)16個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）分析，限定物種為“人類（Homo sapiens）”，P值越小，顯著性越強(qiáng)。將P值由小到大排序，共得到17條信號(hào)通路，主要包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路（neuroactive ligand-receptor interaction）、鞘脂信號(hào)通路（sphingolipid signaling pathway）、環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷-蛋白激酶G信號(hào)通路（cGMP-PKG signaling pathway）、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號(hào)通路（PI3K/Akt signaling pathway）、絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路（MAPK signaling pathway）等，詳見(jiàn)圖8。

3.5 “連翹Q-Marker候選成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與Q-Marker預(yù)測(cè)分析

將11個(gè)連翹Q-Marker候選成分、16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)、17條通路，在Cytoscape 3.7.2軟件中構(gòu)建“連翹Q-Marker候選成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，詳見(jiàn)圖9（圖中紅色三角形節(jié)點(diǎn)代表活性成分，綠色圓形節(jié)點(diǎn)代表關(guān)鍵靶點(diǎn)，紫色正方形節(jié)點(diǎn)代表通路，節(jié)點(diǎn)大小代表度值大小）。度值可以衡量活性成分與疾病靶點(diǎn)通路的關(guān)聯(lián)度，因此筆者以連翹Q-Marker候選成分的度值為指標(biāo)，經(jīng)計(jì)算后發(fā)現(xiàn)，檸檬烯、γ-松油烯、β-月桂烯的度值均低于連翹11個(gè)Q-Marker候選成分度值的平均值[15-16];且經(jīng)筆者查詢SwissADME數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.swissadme.ch/）發(fā)現(xiàn)，前面3個(gè)成分的胃腸吸收較低[17-19]，故不作為連翹的Q-marker。而其余8個(gè)成分蘆丁、連翹苷、松脂素-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷A、松油烯-4-醇、α-水芹烯、β-蒎烯、α-蒎烯的度值均大于平均值，且已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道這幾個(gè)成分是連翹發(fā)揮防治疾病作用的主要成分[7-10，20-21]。基于此，可初步認(rèn)為蘆丁、連翹苷、松脂素-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷A、松油烯-4-醇、α-水芹烯、β-蒎烯、α-蒎烯是連翹的Q-marker。

4 討論

中藥的質(zhì)量是保證其臨床療效的關(guān)鍵。中藥具有多成分、多靶點(diǎn)、整體性的特點(diǎn)，劉昌孝院士提出的“Q-marker”概念[22]，有利于闡明中藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)，且對(duì)控制中藥總體質(zhì)量具有重要作用。

目前，連翹藥材質(zhì)量高低不等，且其中揮發(fā)油成分也缺少質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?；诖?，本文以Q-marker理論為指導(dǎo)，結(jié)合指紋圖譜和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，預(yù)測(cè)連翹的Q-marker。結(jié)果顯示，連翹苷、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、蘆丁、松油烯-4-醇、α-水芹烯、α-蒎烯、β-蒎烯 8個(gè)成分可作為連翹的Q-marker。

連翹發(fā)揮清熱解毒、疏散風(fēng)熱等傳統(tǒng)功效與其抗炎、抗菌、抗病毒等作用密切相關(guān)。經(jīng)筆者查詢文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，連翹苷可抑制促炎因子的產(chǎn)生和MAPK通路的激活來(lái)預(yù)防急性肺損傷[23];可逆轉(zhuǎn)β-淀粉樣蛋白片段25-35損傷導(dǎo)致的2-花生四烯酸甘油酯水平下降，從而改善阿爾茲海默病的癥狀[24]。連翹酯苷A可調(diào)節(jié)MAPK、PI3K/Akt信號(hào)通路來(lái)抑制炎癥反應(yīng)[25-27]。松脂素-β-D-葡萄糖苷可通過(guò)胃腸代謝后發(fā)揮抗炎、抗真菌活性[28]。腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）是炎癥反應(yīng)中一類重要的細(xì)胞因子，通常與其他細(xì)胞因子共同參與抑制細(xì)胞炎癥、阻止細(xì)胞凋亡反應(yīng)[29]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，蘆丁可通過(guò)降低TNF-α、TNF受體相關(guān)因子6水平，抑制核因子κB的磷酸化來(lái)發(fā)揮抗炎作用[30-31]。連翹揮發(fā)油具有明顯的止痛和抗病毒作用，也可通過(guò)抑制炎癥因子表達(dá)[32]、下調(diào)代謝物鞘氨醇的水平來(lái)發(fā)揮抗炎作用[33]，還可通過(guò)下調(diào)下丘腦環(huán)磷酸腺苷含量來(lái)發(fā)揮解熱作用[34]。本研究篩選的松油烯-4-醇、α-水芹烯、α-蒎烯、β-蒎烯在連翹揮發(fā)油中含量較高，可能是連翹揮發(fā)油發(fā)揮藥效的主要成分。

綜上所述，連翹苷、連翹酯苷A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、蘆丁、松油烯-4-醇、α-水芹烯、α-蒎烯、β-蒎烯 8個(gè)成分可作為連翹的Q-marker。

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（收稿日期：2021-08-22 修回日期：2021-12-25）

（編輯：唐曉蓮）

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”項(xiàng)目（No.2017ZX09301058）;山東省中醫(yī)藥科技項(xiàng)目（No.2021Q073）;山東省高校中藥質(zhì)量控制與全產(chǎn)業(yè)鏈建設(shè)協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目（No.CYLXTCX2020-09）

碩士研究生。研究方向：中藥鑒定學(xué)、中藥質(zhì)量控制與中藥資源。E-mail：jingfengtang@163.com

通信作者：教授，博士生導(dǎo)師，博士。研究方向：中藥鑒定學(xué)、中藥質(zhì)量控制與中藥資源。E-mail：13969141796@163.com