劉曉驊 羅圓圓 趙嫚 李族軍 汪德清 練正秋

聚乙二醇（PEG）是一種高分子多聚物，可以通 過降低抗體分子與水分子之間的排斥力，增加抗體與紅細(xì)胞間的結(jié)合機(jī)會(huì)，促進(jìn)抗原-抗體反應(yīng)。國外首次在1987年介紹可利用PEG抗人球蛋白法提高對紅細(xì)胞抗體的檢出能力[1]。本文研究了70例患者標(biāo)本，均因LISS微柱凝膠法（LISS-MGT）凝集弱造成結(jié)果不明確而加做PEG微柱凝膠試驗(yàn)（PEG-MGT），對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為臨床對不規(guī)則抗體的鑒定方法選擇提供思路。

資料與方法

1 臨床資料 選擇2018年4月～2021年4月進(jìn)行了至少LISS-MGT和PEG-MGT兩種方法進(jìn)行抗體鑒定的標(biāo)本試驗(yàn)資料共70例，均因抗篩檢測陽性但LISS-MGT抗體鑒定無反應(yīng)或反應(yīng)弱無確定格局加做PEG-MGT。

2 方法

2.1 儀器與試劑：DG Gel抗人球蛋白檢測卡（Diagnostic Grifols，西班牙 ），LISS液（DG Gel Sol，西班牙），PEG 3350（北京中科科奧科技有限公司），抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒（BIO-RAD，美國），16系譜細(xì)胞（Sanquin，荷蘭），DGSPIN卡式離心機(jī)（Grifols，西班牙），ID-Incubator 37S I達(dá)亞美卡式孵育器，KA-2200血清學(xué)專用離心機(jī)（Kubota，日本）。

2.2 4℃ LISS-MGT、LISS-MGT和PEG-MGT：①4℃LISS-MGT：3%～5%荷蘭Sanquin16系譜細(xì)胞用LISS液稀釋至1%的濃度，患者血漿25 μL和1%濃度的1～16號譜細(xì)胞各50 μL每孔加入反應(yīng)倉，4℃孵育15 min，直接離心后觀察結(jié)果。②LISS-MGT：3%～5%荷蘭Sanquin16系譜細(xì)胞用LISS液稀釋至1%的濃度，譜細(xì)胞和患者血漿的加樣程序以及后續(xù)操作嚴(yán)格按照微柱凝膠卡使用說明書的要求進(jìn)行，即患者血漿25 μL和LISS稀釋至1%濃度的1～16號譜細(xì)胞各50 μL每孔加入反應(yīng)倉，37℃孵育15 min，直接離心后觀察結(jié)果。③PEG-MGT：20%PEG參照文獻(xiàn)要求配制[1]。取16支潔凈試管，做好標(biāo)記，每管加患者血清2滴、20%PEG溶液4滴、3%～5%荷蘭Sanquin16系譜細(xì)胞1滴（對應(yīng)標(biāo)記），混勻，37℃水浴箱內(nèi)孵育15 min，分別用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞4次，末次棄凈上清液，LISS稀釋反應(yīng)產(chǎn)物至1%濃度，將50 μL反應(yīng)產(chǎn)物加入反應(yīng)倉中，直接離心后觀察結(jié)果。

2.3 抗體凝集強(qiáng)度判定參照美國血庫協(xié)會(huì)技術(shù)手冊第17版，計(jì)分賦值見表1[1]。

表1 凝集強(qiáng)度計(jì)分賦值

結(jié) 果

1 鑒定結(jié)果分類 70例患者標(biāo)本經(jīng)PEG-MGT抗體鑒定，結(jié)果分為兩類：格局明確可確定抗體特異性29例（41.4%）、無明顯特異性反應(yīng)格局41例（58.6%）。

2 PEG-MGT檢出特異性抗體分布情況 患者標(biāo)本經(jīng)PEG-MGT檢測格局明確29例，PEG-MGT對Rh系統(tǒng)相關(guān)抗體檢出最多（20，69%），其次是Duffy系統(tǒng)相關(guān)抗體（5，17.2%）以及Kidd系統(tǒng)相關(guān)抗體（3，10.3%），Lewis系統(tǒng)抗體1例（表2）。

表2 PEG-MGT檢出抗體特異性

3 PEG-MGT 與 LISS-MGT鑒定凝集強(qiáng)度對比PEG-MGT檢測無明顯特異性反應(yīng)格局樣本41例，比較PEG與LISS抗體鑒定凝集強(qiáng)度：反應(yīng)增強(qiáng)16例，反應(yīng)減弱 17 例，反應(yīng)強(qiáng)度無變化 8 例。PEG-MGT檢測無明顯特異性反應(yīng)格局樣本中有13例三系抗篩鹽水試管法均陽性，通過鹽水試管法或4℃ LISS-MGT可確定抗體特異性，分別為抗-M抗體9例，抗-P1抗體2例，抗-Lea抗體和抗-Leb抗體各1例，反應(yīng)強(qiáng)度增強(qiáng)7例，減弱3例，不變3例（表3）。

表3 PEG法與LISS法抗體鑒定強(qiáng)度比較

討 論

紅細(xì)胞血型抗原IgG類抗體的檢測常需要增強(qiáng)介質(zhì)輔助反應(yīng)，如小牛血清白蛋白和實(shí)驗(yàn)室常用的凝聚胺、LISS液。1987年，NANCY和GARRATTY首次發(fā)現(xiàn)PEG間接抗人球蛋白可促進(jìn)紅細(xì)胞抗原-抗體反應(yīng)，對比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)25例弱反應(yīng)抗體（LISS介質(zhì)中有鏡下凝集到2+的反應(yīng)強(qiáng)度）約64%在PEG中反應(yīng)強(qiáng)度強(qiáng)于LISS或凝聚胺溶液，28%反應(yīng)強(qiáng)度相等，8%在PEG中反應(yīng)強(qiáng)度弱于LISS或凝聚胺[2]，表明PEG相較凝聚胺或LISS對大部分抗原抗體的結(jié)合具有更強(qiáng)的促進(jìn)作用。

PEG和傳統(tǒng)抗體檢測方法對比實(shí)驗(yàn)中，WENZ、DE、TRKMLJIC等研究人員認(rèn)為 PEG對抗體檢出靈敏度優(yōu)于小牛血清白蛋白[3-5]，SHIREY對比PEG和LISS抗人球蛋白試驗(yàn)，指出PEG對臨床稀有抗體的檢出靈敏度強(qiáng)于LISS[6]。不規(guī)則抗體的漏檢有很大的臨床輸血風(fēng)險(xiǎn)，輕則僅表現(xiàn)為紅細(xì)胞輸注無效[7-10]，重則導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)[11-12]。LIN等報(bào)告2例Rh血型抗體引起的溶血反應(yīng)的罕見病例，LISS、鹽水抗球蛋白法、酶法均未檢出抗體，但PEG間接抗人球蛋白技術(shù)和凝聚胺法檢出了相關(guān)Rh抗體[11]。這個(gè)案例提示酶法也可能漏檢有臨床意義的Rh血型系統(tǒng)抗體。

本文PEG-MGT檢出29例抗體特異性，其中Rh系統(tǒng)相關(guān)抗體20例（69%），Duffy系統(tǒng)抗體5例（17.2%）以及Kidd系統(tǒng)抗體3例（10.3%），表明PEG-MGT對Rh系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)以及Kidd系統(tǒng)這些有臨床重要意義抗體的檢出靈敏度更高。本文顯示，PEG-MGT明確檢出抗-Lea1例，LISS-MGT和PEG-MGT均未檢出抗體特異性的41例標(biāo)本中有13例經(jīng)鹽水介質(zhì)法或4℃微柱凝膠法確定抗體特異性，其中7例PEG反應(yīng)增強(qiáng)（4例抗-M，1例抗-Lea，2例抗P1），3例PEG和LISS兩種介質(zhì)反應(yīng)強(qiáng)度不變（3例均為抗-M），3例PEG反應(yīng)減弱（2例抗-M，1例抗Leb）。由此可知，PEG微柱凝膠法雖不能普遍增強(qiáng)IgM類抗體的檢出，但對該類抗體檢出有一定幫助。Lewis血型系統(tǒng)中抗-Lea和抗-Leb、MNS血型系統(tǒng)抗-M，多為自然產(chǎn)生，P1血型系統(tǒng)抗-P1通常屬于冷抗體，37℃多數(shù)沒有活性，很少引起溶血性輸血反應(yīng)，臨床意義不大。最終無法明確抗體性質(zhì)28例，通過分析患者病史、用藥史和近期實(shí)驗(yàn)室檢測相關(guān)指標(biāo)變化，懷疑藥物抗體4例，抗-HLA抗體2例，懷疑低效價(jià)抗體19例，懷疑自身抗體3例。

綜上所述，PEG-MGT對有臨床重要意義的抗體檢出比LISS-MGT更敏感，對LISS-MGT無法檢出的MNS系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、P1系統(tǒng)等抗體的判斷也有一定參考意義，但對這類鹽水抗體的鑒定建議首選常溫或4℃鹽水介質(zhì)法。鑒于PEG孵育后有4次洗滌混合物的過程，對工作人員熟練程度要求較高，且整個(gè)流程消耗時(shí)間較多，不建議作為常規(guī)抗體鑒定方法。本研究表明經(jīng)LISS-MGT結(jié)果不明確懷疑弱抗體的情況下加做PEG-MGT，對判斷Rh血型系統(tǒng)、Kidd血型系統(tǒng)和Duffy血型系統(tǒng)這類有重要臨床意義的不規(guī)則抗體非常有價(jià)值。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突