舒恒杰，段習(xí)亮

華南中科分析技術(shù)（廣東）有限公司，廣東佛山 528200

丁氟螨酯英文通用名稱(chēng)為Cyflumetofen，CAS登錄號(hào)為400882-07-7?；瘜W(xué)名稱(chēng)為2-甲氧乙基-（R,S）-2-（4-叔丁基苯基）-2-氰基-3-氧代-3-（α,α,α-三氟鄰甲苯基）丙酸酯，其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。丁氟螨酯在弱酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，25℃下，其在pH=4、pH=7和pH=9的 水 中DT50分 別為9 d、5 h和12 min[1]。

圖1 丁氟螨酯結(jié)構(gòu)式

丁氟螨酯較易水解，因此其持效期較短，檢測(cè)過(guò)程也需注意丁氟螨酯因水解而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，國(guó)內(nèi)已有關(guān)于丁氟螨酯分析方法研究的相關(guān)報(bào)道，但僅關(guān)于乙腈體系的報(bào)道，還沒(méi)有關(guān)于丁氟螨酯在甲醇體系的分析方法研究，本研究建立了一種甲醇體系的高效液相色譜法對(duì)丁氟螨酯制劑進(jìn)行定量分析，并研究了懸浮劑中丁氟螨酯在不同溶劑中的穩(wěn)定性，以期為企業(yè)產(chǎn)品和第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)在方法優(yōu)化上提供參考[2-3]。

1 材料與方法

1.1 試劑和樣品

（1）甲醇（美國(guó)天地）：色譜純；（2）磷酸（科密歐）：色譜純；（3）水（超純水）：電阻率≥18.2 MΩ ·cm；（4）丁氟螨酯標(biāo)樣（德國(guó)LGC提供）：97.7%；（5）參照物標(biāo)樣（上海市農(nóng)藥研究所有限公司提供）：99.3%；（6）試樣（由佛山盈輝作物科學(xué)有限公司提供）：參照物與丁氟螨酯配制的懸浮劑。

1.2 儀器

（1）高 效 液 相 色 譜 儀（Agilent 1260型，VWD/DAD檢 測(cè) 器、7129自動(dòng)進(jìn)樣器）；（2）萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司ML204T/02型，精確至0.000 1 g）；（3）色 譜 柱（Agilent 5 poroshell TC-C18 250 mm× 4.6 mm×5 μm）（或具等同效果的色譜柱）；（4）過(guò)濾器（津騰，孔徑為0.45 μm的有機(jī)系濾膜）；（5）超聲波清洗機(jī)（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司JP-040S型）。

1.3 液相色譜操作條件

（1）流動(dòng)相：甲醇+0.1%磷酸水溶液=77+23（體積比），經(jīng)過(guò)濾器過(guò)濾后，超聲波清洗機(jī)超聲脫氣20 min；（2）流速：1.0 mL/min；（3）柱溫：35℃；（4）檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；（5）進(jìn)樣體積：5 μL；（6）保留時(shí)間：參照物約為5.9 min，丁氟螨酯約為12.5 min。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取丁氟螨酯標(biāo)樣和參照物標(biāo)樣分別約為0.06 g、0.1 g（精確至0.000 1 g），置于不同的50 mL容量瓶，分別加入約40 mL流動(dòng)相，在超聲波清洗機(jī)上超聲溶解約20 min，取出，確保溶解完全后，冷卻至室溫，最后用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別得A、B溶液，備用。

準(zhǔn)確移取A、B溶液各2 mL于同一25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度后搖勻后，過(guò)濾器過(guò)濾，待測(cè)。

1.4.2 試樣溶液的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取0.4 g（精確至0.000 1 g）的試樣于50 mL容量瓶中，加入約40 mL流動(dòng)相，在超聲波清洗機(jī)上超聲溶解約20 min，取出，確保溶解完全后，冷卻至室溫，最后用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，備用。

準(zhǔn)確移取2 mL上述溶液于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度后搖勻后，過(guò)濾器過(guò)濾，待測(cè)。

1.4.3 測(cè)定在上述色譜操作條件下，待儀器運(yùn)行1 h基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針丁氟螨酯峰面積相對(duì)變化小于0.8%后，按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液及前后2針標(biāo)樣溶液中丁氟螨酯峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中丁氟螨酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X（%）按式（1）計(jì)算：

式（1）中：A1為標(biāo)樣溶液中丁氟螨酯峰面積的平均值；A2為試樣溶液中丁氟螨酯峰面積的平均值；m1為丁氟螨酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量，單位為克（g）；m2為試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；P為標(biāo)樣中丁氟螨酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁氟螨酯HPLC測(cè)定方法的建立

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇根據(jù)Agilent 1260 DAD的紫外波長(zhǎng)掃描圖（圖3），可以看到丁氟螨酯特征吸收波長(zhǎng)位于約198 nm處，但在198 nm左右波長(zhǎng)，受溶劑和雜質(zhì)的影響較大，對(duì)于方法的精密度、檢測(cè)限等有較大影響；因此根據(jù)紫外吸收強(qiáng)度和靈敏度要求，發(fā)現(xiàn)220 nm波長(zhǎng)處干擾相對(duì)較少，故最終將丁氟螨酯的檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為220 nm。

圖2 參照物和丁氟螨酯的高效液相色譜圖

圖3 丁氟螨酯紫外光譜全掃描圖

2.1.2 流動(dòng)相的選擇色譜柱選擇常規(guī)的poroshell TC-C18為填料的色譜柱。根據(jù)丁氟螨酯的物理化學(xué)性質(zhì)和劑型的特殊性，選擇流動(dòng)相（甲醇+0.1%磷酸水溶液）作為溶解樣品的溶劑；根據(jù)甲醇和0.1%磷酸水溶液的不同比例，在色譜柱上的峰形及分離效果，最終確定（甲醇+0.1%磷酸水溶液）=77+23（v/v），流速1.0 mL/min時(shí)，丁氟螨酯、參照物、雜質(zhì)得到很好的分離，峰形對(duì)稱(chēng)性良好，基線平穩(wěn)。

2.1.3 特異性試驗(yàn)采用HPLC-DAD峰純度分析法鑒別丁氟螨酯。從圖4可以看出，試樣中的丁氟螨酯峰純度為999.672，大于990，說(shuō)明丁氟螨酯處基本無(wú)雜質(zhì)干擾，可準(zhǔn)確測(cè)定丁氟螨酯。

圖4 丁氟螨酯HPLC-DAD峰純度色譜圖

2.1.4 線性關(guān)系試驗(yàn)準(zhǔn)確稱(chēng)取一定質(zhì)量的丁氟螨酯標(biāo)樣，按1.4.1進(jìn)行配制，分別得到質(zhì)量濃度為0.009 629 312、0.038 517 248、0.096 293 12、0.144 439 68、0.192 586 24 mg/mL的丁氟螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液。過(guò)濾，按試驗(yàn)部分色譜條件進(jìn)樣，以丁氟螨酯峰面積y對(duì)濃度x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1、圖5），回歸方程為y=8273.8314x+5.3650，相關(guān)系數(shù)r=0.999 97（n=5）?？梢?jiàn)丁氟螨酯質(zhì)量濃度在0.009 631 2～0.192 58 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性相關(guān)性。

圖5 丁氟螨酯線性關(guān)系曲線

表1 丁氟螨酯線性關(guān)系

2.1.5 方法精密度試驗(yàn)選擇1個(gè)有代表性的試樣，從稱(chēng)樣開(kāi)始，按試驗(yàn)部分中的操作測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，丁氟螨酯標(biāo)準(zhǔn)偏差0.045，變異系數(shù)為0.30；依據(jù)Horwits公式計(jì)算可知變異系數(shù)符合要求，說(shuō)明本方法精密度滿足丁氟螨酯的分析要求。

表2 方法精密度（重復(fù)性）試驗(yàn)結(jié)果

2.1.6 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)按1.4.2稱(chēng)取5份試樣（稱(chēng)樣量減半），分別準(zhǔn)確添加一定量的標(biāo)樣（按1.4.1中的稱(chēng)樣量減半），在試驗(yàn)部分進(jìn)行分析，待測(cè)組分丁氟螨酯的平均回收率為99.42 %，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度良好（表3）。

表3 方法準(zhǔn)確度（回收率）試驗(yàn)結(jié)果

2.2 不同溶劑對(duì)丁氟螨酯穩(wěn)定性的影響

丁氟螨酯在弱酸性條件下穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定；用乙腈或乙腈+水（0.3%冰乙酸）=80+20（v/v）作為定容溶劑，短時(shí)間內(nèi)（14 d）在冷藏或室溫條件下對(duì)丁氟螨酯原藥含量檢測(cè)沒(méi)有明顯的影響。因此為了驗(yàn)證丁氟螨酯在不同溶劑中的穩(wěn)定性，測(cè)試了丁氟螨酯在甲醇、甲醇+水、甲醇+0.1%磷酸水中的穩(wěn)定性。

按1.4.2配制3份試樣溶液，溶劑分別用甲醇、甲醇+水、甲醇+0.1%磷酸水，在上述色譜操作條件下測(cè)得不同時(shí)間點(diǎn)丁氟螨酯濃度（表4）。

表4 不同溶劑對(duì)丁氟螨酯穩(wěn)定性影響 mg/mL

3 結(jié)論

利用高效液相色譜法研究丁氟螨酯在甲醇體系中的穩(wěn)定性，經(jīng)過(guò)對(duì)不同溶劑的對(duì)比結(jié)果表明，丁氟螨酯在含有甲醇的體系中，只有在酸性條件下才會(huì)具有很好的穩(wěn)定性，方法的準(zhǔn)確度、精密度、線性關(guān)系才符合要求。此方法拓展了丁氟螨酯在高效液相色譜法的溶劑選擇范圍。