劉潔，張中波，林正美，張東渺，任年旭，馬元元，姜媛，杜永振，汪建華，李玉峰

（1.山東和康源生物育種股份有限公司，山東濟(jì)南 250101；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南 250100）

1 前言

鴨疫里默氏桿菌 （Riemerella anatipestifer，RA）感染是家鴨、鵝、火雞及其他家禽和野禽的一種傳染性疾病。 1～8 周雛鴨高度易感，5 周以下雛鴨一般在出現(xiàn)臨床癥狀后1～2 天死亡，本病潛伏期一般為2～5 天。 雛鴨經(jīng)皮下、靜脈內(nèi)或眶下竇途徑人工感染最早可在感染后24 小時出現(xiàn)臨床癥狀和死亡。 該病呈急性或慢性敗血癥形式，其特征是纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎和腦膜炎[1]。 該病流行范圍廣，感染率和死亡率高，是目前危害全世界養(yǎng)鴨業(yè)的一種主要疾病[2]。 鴨呼腸孤病毒會引起病毒型關(guān)節(jié)炎/腱鞘炎、矮小綜合征、呼吸道病、腸道病、免疫抑制性疾病和吸收不良綜合征[1]。 在我國，以腳軟、排白色稀糞和耐過鴨生長發(fā)育明顯遲緩為多見[2]。 文獻(xiàn)報道稱呼腸孤病毒可與其他傳染性病原體相互作用， 使呼腸孤病毒感染的疾病和嚴(yán)重程度有所不同[3-5]。

2 診斷檢測

2.1 病料的來源

病鴨為山東省泰安市某養(yǎng)殖場育成期種鴨。

2.2 剖檢病變

剖解癥狀主要為包心包肝（圖1A），脾臟呈腫大、出血（圖1B），紋理深脾（圖1C），剖解腿部關(guān)節(jié)有干酪樣物（圖1D）。

圖1 病鴨解剖病變

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測

2.3.1 細(xì)菌分離

鴨疫分離， 無菌采取病鴨腦部組織劃線分離到5%血清營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，放置于37℃厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～36 小時。 在5%血清營養(yǎng)培養(yǎng)基平板上生長出均勻一直的菌落，表面光滑，呈水滴狀，稍隆起，圓形，邊緣整齊，傾斜45°，對光可見淡藍(lán)色熒光（圖2A）。

2.3.2 細(xì)菌菌株鑒定

取單個菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢，結(jié)果表明，獲得的微生物為革蘭氏陰性、不運(yùn)動的小桿菌，單個或成雙排列，初次分離有時會看到絲狀排列，細(xì)菌變化較大，長1～5 微米，寬0.2～0.4微米（圖2B）。

將傳代純化的菌株用無菌的PBS 吹落，吹落的菌落呈乳白色，分別吸取25 微升菌液與陽性血清混合，相對應(yīng)的血清型會在玻璃片上出現(xiàn)顆粒狀凝集（圖2C）。

圖2 細(xì)菌菌株鑒定

2.3.3 細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)

根據(jù)抑菌圈的大小判定 分離細(xì)菌對藥物的敏感程度：阿莫西林、多西環(huán)素、 氟苯尼考、環(huán)丙沙星、大觀霉素、氨芐西林均為高敏；新霉素、慶大霉素中敏；林可霉素、多黏菌素B 耐藥。

2.3.4 病毒的分離與鑒定

檢測采用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù) （RTPCR），采集感染鴨的肝臟、脾臟、腸道、肺、胰腺組織剪碎放入滅菌的研磨器中，取上清液備用，感染鴨泄殖腔拭子置于含滅菌PBS 離心管中，制成懸液震蕩， 取上清液備用。 利用組織/病毒RNA 提取諾唯贊試劑盒提取病毒RNA，利用山東農(nóng)業(yè)大學(xué)設(shè)計的引物：sn-j-DREO-1/2 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。 結(jié)果顯示，被檢3 個樣品中，有1 只為鴨呼腸孤病毒陽性，結(jié)果見圖3。

圖3 病鴨PCR 檢測結(jié)果

3 結(jié)論與分析

通過對病死鴨細(xì)菌分離及病毒檢測的實(shí)驗(yàn)室診斷，革蘭氏染色、鏡檢為革蘭氏陰性短桿菌，證實(shí)該鴨群感染鴨疫034 型， 肛拭子PCR 檢測陽性證實(shí)感染鴨呼腸孤病毒，但此次發(fā)病鴨發(fā)病周期較短，根據(jù)發(fā)病原因調(diào)查，場區(qū)前期發(fā)生過7 型、6 型兩種血清型鴨疫混感，場區(qū)可能還仍存在病原， 育成批次與產(chǎn)蛋批次棟舍相鄰距離較近，且發(fā)病棟與大周齡棟舍共用一個化糞池，造成污染，增加交叉感染的幾率。 場區(qū)生物安全未嚴(yán)格執(zhí)行， 有文獻(xiàn)報道感染呼腸孤病毒后會引起免疫抑制，導(dǎo)致機(jī)體免疫應(yīng)答變差，細(xì)菌混合感染率增， 病情加重， 所以感染鴨呼腸孤的同時，鴨群抵抗力也下降，易感染漿膜炎[6]。

4 討論

養(yǎng)殖場對于患鴨漿膜炎的鴨群可皮下注射林可霉素或大觀霉素，可以有效降低死亡率，同時使用抗生素氟苯尼考+強(qiáng)力霉素拌料，降低死淘率，提升鴨群抵抗力。 其他未發(fā)病鴨群可使用抗生素進(jìn)行預(yù)防。

免疫接種鴨疫里默氏滅活苗或弱毒苗對同一種血清型強(qiáng)度感染有很好的保護(hù)作用， 但不同血清型之間交叉保護(hù)作用較低， 或者無交叉保護(hù)，因此，需要根據(jù)流行的血清型選擇合適的疫苗[2]。

滅活鋁膠苗、 油乳劑滅活苗及弱毒活疫苗免疫對鴨群具有較好的保護(hù)效果， 有報道預(yù)防呼腸孤的發(fā)生需在雛鴨7 日齡內(nèi)進(jìn)行免疫，免疫持續(xù)期達(dá)30 天以上，可有效地控制本病的發(fā)生[2]。

鴨傳染性漿膜炎與鴨呼腸孤病毒的發(fā)生與飼養(yǎng)場生物安全、飼養(yǎng)管理密切相關(guān)，做好鴨群的飼養(yǎng)和管理是預(yù)防鴨疫的重要原因。 鴨呼腸孤也具有極強(qiáng)的水平傳播能力，且可垂直傳播，場區(qū)可用火堿、石灰鋪灑場區(qū)道路，空氣噴霧消毒，對于糞便、污水清理要及時，盡量避免交叉感染、水平傳播。