顧亞琴 陳 磊 吳紅雁 （江蘇醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院，鹽城 210042）

1 腸道微生物群

微生物幾乎覆蓋所有宿主的黏膜表面，定植在不同的身體壁龕，包括胃腸道、皮膚、口腔、泌尿生殖道和呼吸道，這些微生物統(tǒng)稱(chēng)為微生物群落，主要由細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物和古菌組成，是復(fù)雜、廣泛、動(dòng)態(tài)的［1-2］。腸道是人體最大的消化和排泄器官，在腸道中寄生著約數(shù)百億種微生物，是人體最大的微生物室［3-4］。

目前，微生物分析主要依賴(lài)于無(wú)創(chuàng)且容易獲得的糞便樣品，但糞便剖面不能代表宿主體內(nèi)發(fā)生的完整情況，也不能解釋腸道微生物區(qū)系的空間異質(zhì)性。在腸道系統(tǒng)中，細(xì)菌種類(lèi)和群落在整個(gè)管腔內(nèi)分布不均，細(xì)菌的密度和多樣性沿腸道縱軸增加［5-6］。通常，小腸中以快速生長(zhǎng)的兼性厭氧菌為主，而盲腸和結(jié)腸則更利于糖溶厭氧菌生長(zhǎng)。同時(shí)，黏液層也為宿主體內(nèi)很大一部分細(xì)菌提供了棲息地［7］。越來(lái)越多的證據(jù)表明，高度多樣化的微生物有助于維持黏膜屏障健康，反之亦然［8-9］。黏膜相關(guān)微生物群與宿主天然免疫系統(tǒng)間的相互作用值得關(guān)注，可以作為糞便群落研究的補(bǔ)充。

2 核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體

宿主免疫系統(tǒng)與腸道微生物間的通訊通過(guò)表達(dá)于免疫細(xì)胞上或免疫細(xì)胞內(nèi)的模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs）的作用進(jìn)行。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體（nucleotide-binding and leucine-rich repeat-containing receptors，NLRs）是一類(lèi)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)PRRs，可通過(guò)調(diào)控一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)參與機(jī)體的獲得性免疫和固有免疫應(yīng)答過(guò)程，可與病原相關(guān)分子模式和損傷相關(guān)分子模式直接結(jié)合，啟動(dòng)天然免疫應(yīng)答［10-11］。在共生微生物和宿主免疫系統(tǒng)間的通訊中，NLR 蛋白是PRRs 的重要成員之一。

NLRs是一種高度保守的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，在人類(lèi)基因組中有20 多個(gè)已鑒定的NLRs 家族成員，這些蛋白均由中央核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域、C 末端亮氨酸富集結(jié)構(gòu)域和N 末端效應(yīng)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。根據(jù)N末端結(jié)構(gòu)域的不同，目前一般將NLRs 分為5 個(gè)亞族［12］：①含酸性反式激活結(jié)構(gòu)域的NLRA：NLRA 亞族只有1 個(gè)成員，即Ⅱ類(lèi)主要組織相容性復(fù)合物反式激活因子（class Ⅱmajor histocompatibility com‐plex transactivator，CⅡTA），負(fù)責(zé)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，是MHC Ⅱ類(lèi)分子（major histocompatibility complex class Ⅱmolecule）轉(zhuǎn)錄的正向調(diào)節(jié)劑；②含桿狀病毒抑制劑重復(fù)結(jié)構(gòu)域的NLRB：NAIP是NLRB亞族的唯一成員，是一種抗凋亡蛋白；③含半胱天冬氨酸蛋白酶募集結(jié)構(gòu)域的NLRC：由NOD1、NOD2、NLRC4 3 個(gè)成員組成，是微生物入侵及免疫系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)器，主要通過(guò)激活或抑制信號(hào)通路影響細(xì)胞因子分泌；④含pyrin（pyrin domain，PYD）結(jié)構(gòu)域的NLRP：由NLRP1、NLRP3、NLRP6 等14 個(gè)成員組成，介導(dǎo)凋亡和炎癥信號(hào)傳導(dǎo)；⑤NLRX 亞族成員NLRC3、NLRC5 和NLRX1 的N 末端包含1 個(gè)未知結(jié)構(gòu)域，參與自噬的起始，并調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和Ⅰ型IFN信號(hào)通路傳導(dǎo)。

與其他PRRs 相同，NLR 家族的功能是感知病原體或損傷相關(guān)的分子模式，其在PRR 中具有獨(dú)特的配體多樣性和下游效應(yīng)功能。一些NLRs，如NLRP1、NLRP3、NLRC4，NAIP 等作為炎癥小體傳感器，可通過(guò)與其配體結(jié)合，誘導(dǎo)IL-1 和IL-18 的分泌及炎癥形式的細(xì)胞焦亡參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)過(guò)程［12］。NLR 蛋白的另一個(gè)主要功能是調(diào)節(jié)炎癥信號(hào)通路，包括NF-κB 和MAPK。雖然一些NLR 家族成員，如NOD1 和NOD2，可引起這些通路對(duì)刺激的激活，但還有一些NLR 蛋白，如NLRX1、NLRC3 和NLRP12則是作為炎癥通路的負(fù)調(diào)節(jié)因子，這些共同構(gòu)成了NLR 生物學(xué)的復(fù)雜性［13-14］。此外，已有研究表明NLR 蛋白與腸道微生物群間的干擾，以及這些復(fù)雜的相互作用對(duì)腸道穩(wěn)態(tài)和炎癥產(chǎn)生的巨大影響。

3 NLRs與腸道微生物群間的相互作用

3.1 NOD1/2（NLRC1/2） NOD1 和NOD2 同屬NOD 樣蛋白，具有同源性且信號(hào)通路高度相似，NOD1/2 廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞類(lèi)型，如上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。作為眾所周知的PRRs，其可識(shí)別具有較高特異性的胞漿細(xì)菌肽聚糖片段，目前研究者認(rèn)為這些肽聚糖分子主要由以下幾種方式進(jìn)入宿主細(xì)胞［15-18］：①胞內(nèi)病原菌感染，如弗氏志賀菌感染，這種胞內(nèi)病原菌可激活NOD 蛋白信號(hào)通路［15］；②胞外菌通過(guò)分泌系統(tǒng)將細(xì)菌肽聚糖傳遞到宿主細(xì)胞。研究顯示，幽門(mén)螺桿菌的分泌系統(tǒng)及革蘭氏陰性菌外膜囊泡可將細(xì)菌肽聚糖傳遞到宿主細(xì)胞［15-18］；③在上皮細(xì)胞中，細(xì)菌肽聚糖可通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞；④寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)子（如PEPT1、SLC15A4）可有效攜帶肽聚糖片段進(jìn)入宿主細(xì)胞質(zhì)；⑤感染細(xì)胞周?chē)恼＜?xì)胞內(nèi)NOD1信號(hào)通路可被間隙連接介導(dǎo)活化。此外，在小腸遠(yuǎn)端，納米顆粒能夠誘捕環(huán)境中的肽聚糖或口服來(lái)源的蛋白抗原，利用上皮M 細(xì)胞進(jìn)入派爾氏集合淋巴小結(jié)，將肽聚糖轉(zhuǎn)運(yùn)到腸道組織中的免疫細(xì)胞，進(jìn)而維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)［19］。這些進(jìn)入胞質(zhì)的途徑表明NOD1 和NOD2 蛋白可能感應(yīng)胞外細(xì)菌釋放的配體，包括腸道共生菌的成分。與配體結(jié)合后，NF-κB-ERKMAPK 信號(hào)被激活，進(jìn)而促進(jìn)各種促炎細(xì)胞因子和趨化因子表達(dá)，以及抗菌肽（antimicrobial peptide，AMPs）和活性氧產(chǎn)生。由于NOD1/2 有助于胞漿監(jiān)測(cè)，這些蛋白質(zhì)作為宿主-微生物相互作用的重要調(diào)節(jié)因子，也可控制腸道異常炎癥的易感性。

早期研究顯示NOD1 在多種細(xì)菌感染中具有抗菌作用，但NOD1 對(duì)整個(gè)腸道微生物群落的影響不太明顯［20-22］。BOUSKRA 等［23］和GUTIERREZ 等［24］用16S核糖體RNA（rRNA）的定量PCR對(duì)NOD1缺乏小鼠的整個(gè)細(xì)菌王國(guó)進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，與WT 小鼠相比，總細(xì)菌增加了約100 倍。此外，在NOD1 缺乏的小鼠中存在不同數(shù)量的細(xì)菌，包括梭菌、擬桿菌和腸桿菌科。但這些早期實(shí)驗(yàn)使用的是非同窩對(duì)照，仍需更多實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)論。近年YU 等［25］研究發(fā)現(xiàn)，C57BL/6 小鼠與NOD1 缺乏小鼠雜交產(chǎn)生的WT 小鼠（WT2）在氧化偶氮甲烷（azoxy‐methane，AOM）-右旋糖酐硫酸鈉（dextran sodium sulfate，DSS）-結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌（colitis-associated colon cancer，CAC）模型中的結(jié)腸腫瘤明顯多于從杰克遜實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買(mǎi)的“純”WT 小鼠（WT1）。雖然WT1和WT2 集落均來(lái)源于同一供應(yīng)商的C57BL/6 小鼠，并被安置在同一小鼠室中，但其具有不同的微生物群組成。這種微生物群的差異與糞便材料移植、隊(duì)列和交叉構(gòu)建實(shí)驗(yàn)證實(shí)的不同腫瘤敏感性直接相關(guān)。這項(xiàng)研究不僅強(qiáng)調(diào)腸道微生物群通?？捎赡阁w傳播決定，還間接表明NOD1 缺乏的小鼠可能攜帶一個(gè)生物失調(diào)的微生物群，其有助于增加腫瘤易感性。

PETNICKI-OCWIEJA 等［26］發(fā)現(xiàn)，NOD2 缺乏的小鼠的回腸和糞便中攜帶的細(xì)菌數(shù)量比同窩對(duì)照組多，細(xì)菌和硬壁菌豐度增加。由于隱窩功能受損，NOD2 缺乏小鼠在回腸末端也表現(xiàn)出抗菌活性降低和機(jī)會(huì)性病原體對(duì)定植的敏感性增加。REHMAN 等［27］使用16SrRNA 基因克隆文庫(kù)測(cè)序和高通量焦測(cè)序法將NOD2對(duì)腸道微生物群的影響進(jìn)行了更直接的研究，并證實(shí)NOD2 缺乏的小鼠在糞便和末端回腸樣本中的細(xì)菌負(fù)荷高于WT 對(duì)照物。另一項(xiàng)研究表明，NOD2 缺乏可導(dǎo)致普通擬桿菌擴(kuò)張，其通過(guò)影響表達(dá)IFN-γ 的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞介導(dǎo)小腸異常和炎癥［28］。

NOD2 及其與腸道微生物的相互作用與炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）有關(guān)，包括克羅恩?。–rohn's disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcer‐ative colitis，UC）。腸道菌群可通過(guò)細(xì)菌外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMV）的分泌傳遞免疫調(diào)節(jié)分子，在結(jié)腸炎過(guò)程中激活非經(jīng)典的自噬途徑發(fā)揮保護(hù)作用。但一些易感基因的變異會(huì)阻斷這一保護(hù)作用，導(dǎo)致IBD 發(fā)生。CHU 等［29］研究顯示OMV的作用機(jī)制與IBD 相關(guān)基因（ATG16L1 和NOD2）密切相關(guān)。在CD 的發(fā)展過(guò)程中，NOD2 突變是已知最強(qiáng)的遺傳危險(xiǎn)因素之一。據(jù)報(bào)道，NOD2 基因（SNP8、SNP12 和SNP13）的3 個(gè)主要單核苷酸多態(tài)性與CD 有關(guān)，并導(dǎo)致胞壁酰二肽的功能表型喪失［30］。REHMAN 等［27］通過(guò)CD 患者的回腸活檢和糞便研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是否有NOD2SNP13 突變，攜帶NOD2 變異體的患者體內(nèi)擬桿菌門(mén)和厚壁菌門(mén)比例均增加。KNIGHTS 等［31］對(duì)從CD、UC 和對(duì)照患者中收集的178 個(gè)腸道樣本進(jìn)行了基因分型，以確定NOD2的危險(xiǎn)等位基因，并表明NOD2復(fù)合基因型與微生物組成的變化顯著相關(guān)，特別是盲桿菌和大腸桿菌。

3.2 NLRP3 NLRP3 可對(duì)各種微生物（包括共生微生物）、微生物產(chǎn)物和代謝物做出反應(yīng)［32］。然而在針對(duì)基因敲除或突變的NLRP3 小鼠進(jìn)行的腸道炎癥模型實(shí)驗(yàn)中，不同實(shí)驗(yàn)室得出了相互矛盾的結(jié)果。一些研究認(rèn)為NLRP3 通過(guò)限制致病菌維持腸道穩(wěn)態(tài)的保護(hù)作用；但另一些研究認(rèn)為，由微生物激活的NLRP3 有助于疾病的發(fā)生發(fā)展［33-34］。ZAKI等［35］報(bào)道了DSS-和2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）-結(jié)腸炎模型中NLRP3?/?小鼠炎癥表型惡化，他們將NLRP3 的保護(hù)作用歸因于非造血細(xì)胞產(chǎn)生IL-18，從而促進(jìn)腸道微生物與宿主免疫細(xì)胞間上皮屏障的完整性。事實(shí)上，NLRP3?/?小鼠經(jīng)歷了菌血癥，抗生素的使用能夠改善其惡化的結(jié)腸炎表型，這一過(guò)程直接涉及了微生物。ALLEN等［36］發(fā)現(xiàn)與WT小鼠相比，在NLRP3、Asc 或Casp1 缺乏的小鼠中，AOM-DSS 誘導(dǎo)的腫瘤模型炎癥表型增加，腫瘤負(fù)荷增加。骨髓嵌合體實(shí)驗(yàn)證實(shí)了NLRP3 介導(dǎo)的保護(hù)依賴(lài)于NLRP3 炎癥組分在造血細(xì)胞中的表達(dá)。雖然結(jié)論不同，但這兩項(xiàng)研究都表明NLRP3 與共生微生物間的相互作用對(duì)腸道穩(wěn)態(tài)和抵御炎癥至關(guān)重要。

HIROTA等［37］直接探究了NLRP3對(duì)共生微生物群落的影響，并觀察到NLRP3?/?小鼠結(jié)腸炎表型惡化，IL-1β、IL-10 和TGF-β 表達(dá)減少，并將表型與巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對(duì)微生物產(chǎn)物的反應(yīng)受損聯(lián)系起來(lái)。該研究還發(fā)現(xiàn)，與來(lái)自同窩的WT 對(duì)照相比，NLRP3?/?小鼠產(chǎn)生了一個(gè)獨(dú)特的微生物群，抗菌分泌物減少且結(jié)腸β-防御素表達(dá)發(fā)生改變。通過(guò)末端限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析，HIROTA 等［37］發(fā)現(xiàn)了幾種在WT 或NLRP3?/?小鼠中更豐富的細(xì)菌種類(lèi)，包括腸桿菌科、分枝桿菌和梭菌屬成員。該研究首次表征了NLRP3對(duì)腸道微生物組成的影響。

與以上研究相反，BAUER 等［38］認(rèn)為NLRP3 在結(jié)腸炎中發(fā)揮促炎和致病作用。該研究表明，NLRP3?/?動(dòng)物結(jié)腸炎表型改善，體重減輕，組織學(xué)評(píng)分較低，并提示了巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的IL-1β 在疾病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。該團(tuán)隊(duì)發(fā)表的后續(xù)研究直接檢測(cè)了腸道微生物群對(duì)NLRP3 缺乏小鼠DSS-結(jié)腸炎嚴(yán)重程度的影響［39］。他們將保護(hù)作用與黏膜固有層中CD103+DCs 的增加聯(lián)系起來(lái)，這一發(fā)現(xiàn)在MAK'ANYENGO 等［40］的報(bào)道中得到擴(kuò)展：NLRP3?通過(guò)IL-1β 抑制CD103+DCs。而后的一項(xiàng)研究則報(bào)道了NLRP3 及其與腸道微生物群在腸道炎癥背景下相互作用的有害性［41］。這些研究共同表明NLRP3在腸道炎癥過(guò)程中發(fā)揮有害作用。

總之，這些研究探討了在腸道穩(wěn)態(tài)和炎癥背景下NLRP3-微生物相互作用的影響，并提供了共生菌群與炎癥途徑間一個(gè)不太確定的聯(lián)系。證據(jù)顯示NLRP3在常駐免疫細(xì)胞和非造血細(xì)胞中可通過(guò)IL-18促進(jìn)屏障完整性，并通過(guò)分泌IL-1β 和AMPs 維持共生細(xì)菌的“健康”平衡［40，42］。同時(shí)，研究還認(rèn)為某些共生體可為循環(huán)免疫細(xì)胞中主要NLRP3 炎癥小體的激活提供第一信號(hào)，以促進(jìn)有害的炎癥反應(yīng)。其中一些相互矛盾的發(fā)現(xiàn)可能取決于環(huán)境因素：如先前存在的微生物區(qū)系負(fù)荷和組成、住房環(huán)境、使用的對(duì)照小鼠（是否在同一設(shè)施中飼養(yǎng)等）、動(dòng)物飼料及疾病誘導(dǎo)過(guò)程等細(xì)節(jié)［37-40，42］。

3.3 NLRP6 研究表明，腸道NLRP6 優(yōu)先在腸細(xì)胞和杯狀細(xì)胞中表達(dá)，并在調(diào)節(jié)腸道穩(wěn)態(tài)、抵御感染、自身免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生方面發(fā)揮重要作用［43］。2011 年，ELINAV 等［44］首次報(bào)道了NLRP6-ASC 炎癥體信號(hào)對(duì)腸道微生物群的塑造作用，其可調(diào)節(jié)宿主對(duì)化學(xué)劑誘導(dǎo)的結(jié)腸炎免疫反應(yīng)。該課題組還研究了NLRP6-微生物群落相互作用在AOM-DSS-CRC模型發(fā)病機(jī)制中的影響，并在NLRP6和Asc 缺乏的小鼠中觀察到腫瘤發(fā)生增強(qiáng)，并可傳播到同窩飼養(yǎng)的WT 小鼠中［45］。腸道病原體在胃腸道生理中可觸發(fā)多種損傷，包括運(yùn)動(dòng)減少和內(nèi)在腸相關(guān)神經(jīng)元丟失。近期有研究揭示了神經(jīng)元特異性NLRP6 是感染引起的固有腸相關(guān)神經(jīng)元死亡的主要效應(yīng)器，其可通過(guò)控制腸道微生物來(lái)逆轉(zhuǎn)［46］。該研究為NLRP6 與腸道微生物群間相關(guān)性的研究提供了另一條線索。

為進(jìn)一步了解炎癥體如何參與維持健康的宿主-微生物穩(wěn)態(tài)，LEVY等［47］對(duì)與WT或Asc缺乏小鼠同窩飼養(yǎng)的無(wú)菌小鼠糞便樣本進(jìn)行代謝組學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物?；撬?、組胺和精胺可通過(guò)誘導(dǎo)上皮IL-18分泌和下游AMP產(chǎn)生參與NLRP6炎癥小體的調(diào)節(jié)，并推測(cè)這些微生物代謝物調(diào)節(jié)了微生物群落、宿主生理和疾病易感性。近期有研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類(lèi)代謝物芹菜素也可通過(guò)NLRP6 依賴(lài)的信號(hào)通路保護(hù)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎［48］。由于DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型更適合研究上皮損傷和修復(fù)過(guò)程中的宿主反應(yīng)，而不適合研究整個(gè)發(fā)病機(jī)制，HARA等［49］利用IL-10缺陷小鼠增加致病性Th1反應(yīng)，并使其發(fā)展為慢性小腸結(jié)腸炎模型，以研究NLRP6-微生物相互作用在自發(fā)性結(jié)腸炎中的影響。該研究證明，IL-10/NLRP6 雙基因敲除小鼠更容易發(fā)生自發(fā)性結(jié)腸炎，并存在一個(gè)改變的微生物區(qū)系，且阿克曼氏菌豐度增加；還強(qiáng)調(diào)了NLRP6 如何通過(guò)限制特定共生菌的定植來(lái)維持腸道穩(wěn)態(tài)新機(jī)制。

然而，并不是所有群體都將NLRP6 作為塑造腸道微生物群和調(diào)節(jié)腸道炎癥的標(biāo)志性宿主因素。2017 年有研究表明，與同窩對(duì)照組相比，NLRP6 的遺傳背景對(duì)腸道微生物組成無(wú)直接影響，NLRP6 缺乏不能提高小鼠對(duì)DSS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎易感性［50-51］。GáLVEZ ERIC 等［52］在糞便物質(zhì)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步支持了NLRP6 對(duì)腸道微生物群的調(diào)節(jié)功能。而TOUBAI等［53］則發(fā)現(xiàn)骨髓移植后NLRP6在胃腸道移植物抗宿主病中的致病作用不受微生物群影響。WLODARSKA 等［54］研究表明，NLRP6 缺乏可導(dǎo)致杯狀細(xì)胞自噬消失，并可通過(guò)減少黏蛋白顆粒胞吐影響?zhàn)ひ簩有纬啥苯佑绊懫涔δ?。由于黏蛋白產(chǎn)生受損，NLRP6 缺乏的小鼠更易受腸道病原體感染，且不能維持微生物穩(wěn)態(tài)。該結(jié)果顯示NLRP6 炎癥小體缺乏會(huì)導(dǎo)致腸道微生物群落組成和生物位置分布變化。更重要的是，這一發(fā)現(xiàn)與VOLK 等［55］使用同窩控制的NLRP6 缺乏小鼠進(jìn)行的另一項(xiàng)研究結(jié)果不同。通過(guò)一系列體內(nèi)外分析，VOLK 等［55］認(rèn)為，NLRP6 缺乏小鼠形成的黏液層在功能上與WT小鼠難以區(qū)分。

針對(duì)這些不可忽視的矛盾，持相反觀點(diǎn)的研究者就如何盡量減少實(shí)驗(yàn)差異，更好地研究腸道微生物群與宿主免疫系統(tǒng)間的因果作用發(fā)表了意見(jiàn)。即未來(lái)的微生物群研究應(yīng)包括多種互補(bǔ)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?，不?yīng)僅依賴(lài)于某一種方法，因?yàn)橄鄬?duì)于無(wú)菌定植小鼠，不同的表型可能發(fā)生在同窩控制小鼠的研究中，原因如下：首先，糞便轉(zhuǎn)移過(guò)程中大量細(xì)菌內(nèi)流不是一個(gè)生理過(guò)程，且可能導(dǎo)致定植抗性或炎癥反應(yīng)；第二，不同器官內(nèi)細(xì)菌種類(lèi)和群落分布不均，糞便中的微生物與盲腸或結(jié)腸中的微生物區(qū)系不同，可能不代表特定胃腸道區(qū)域的真實(shí)微生物群落，此外，許多厭氧菌可能在糞便收集或處理時(shí)間內(nèi)已經(jīng)死亡，在這種情況下，雖然糞便微生物轉(zhuǎn)移或無(wú)菌小鼠再克隆是微生物研究的有效方法，但應(yīng)共同使用同窩育種策略來(lái)分析宿主的遺傳學(xué)影響［42］。

3.4 NLRC4 激活NLRC4 炎癥體可產(chǎn)生IL-1β 和IL-18，并可誘導(dǎo)caspase 介導(dǎo)的細(xì)胞死亡。有趣的是，雖然ASC 會(huì)增強(qiáng)NLRC4 誘導(dǎo)的caspase-1 活化，但NLRC4 炎癥體的激活不需要ASC［56-58］。ROM‐BERG等［59］指出NLRC4的功能增強(qiáng)型突變與人類(lèi)腸道和全身自身炎癥性疾病有關(guān)。NLRC4 的雜合性功能增強(qiáng)型突變是導(dǎo)致嬰兒小腸結(jié)腸炎的重要原因之一，是一種以嬰兒腹瀉和與皮膚、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟巨噬細(xì)胞活化相關(guān)的全身表現(xiàn)為特征的慢性炎癥性疾病。此外，其他NLRC4突變也被認(rèn)為與表型類(lèi)似于NLRP3 的相關(guān)自身炎癥性疾病綜合癥相關(guān)。但腸道微生物群在人NLRC4 炎癥疾病中的潛在作用還未見(jiàn)報(bào)道。

小鼠模型的研究揭示了NLRC4 在腸道炎癥和炎癥誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生中的保護(hù)作用。CARVALHO等［60］發(fā)現(xiàn)與同窩對(duì)照的WT 小鼠相比，NLRC4 缺乏小鼠會(huì)出現(xiàn)更嚴(yán)重的DSS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，且NLRC4缺乏小鼠更易受腸道沙門(mén)氏菌感染，并認(rèn)為這些小鼠的死亡率增加與IL-1β 減少有關(guān)。另一項(xiàng)研究表明，NLRC4 在AOM-DSS-CRC 模型中具有類(lèi)似的保護(hù)作用［61］。該研究發(fā)現(xiàn)，與年齡和性別匹配的WT小鼠相比，NLRC4 缺陷小鼠的腫瘤數(shù)量和腫瘤負(fù)荷顯著增加。但ALLEN 等［36］的研究卻發(fā)現(xiàn)與類(lèi)似治療的WT動(dòng)物相比，NLRC4?/?小鼠的疾病進(jìn)展或結(jié)果無(wú)明顯差異。這一矛盾可能是由不同結(jié)構(gòu)微生物組成的差異導(dǎo)致。筆者認(rèn)為有必要進(jìn)行進(jìn)一步的嚴(yán)格批判性實(shí)驗(yàn)來(lái)研究NLRC4 在調(diào)節(jié)腸道微生物群組成及其對(duì)腸道疾病的潛在影響。

4 展望

宿主免疫與腸道微生物間的相互作用及其在腸道穩(wěn)態(tài)和炎癥背景下的潛在應(yīng)用是一個(gè)值得研究的領(lǐng)域。然而，不同實(shí)驗(yàn)室間相互矛盾的結(jié)論以及研究者對(duì)單個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的關(guān)注均表明微生物領(lǐng)域研究的挑戰(zhàn)性日益增強(qiáng)。既往的許多研究沒(méi)能充分認(rèn)識(shí)到非遺傳因素的影響（如住房條件、飲食、小鼠設(shè)施、疾病模型和測(cè)序方法），這些因素已被證實(shí)對(duì)微生物群組成具有重要影響，且可能導(dǎo)致不一致的結(jié)果。寄主-微生物的相互作用仍是一個(gè)年輕且日益精進(jìn)的領(lǐng)域供科學(xué)家探索。有了這些新的共識(shí)，在研究宿主對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)影響的同時(shí)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的同窩控制實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（包括無(wú)菌小鼠和糞便微生物群移植）以盡量減少非遺傳因素造成的混雜效應(yīng)對(duì)研究成果至關(guān)重要［42］。