胡金慶，任艷萍，林廣明

(1.蓬萊區(qū)長島自然資源局，山東 煙臺265800；2.蓬萊區(qū)長島海洋經(jīng)濟促進中心，山東 煙臺265800)

單體三倍體牡蠣是指單個獨立游離、無固著基的三倍體牡蠣，通過將牡蠣三倍體與單體兩種特點相結(jié)合，使其既有三倍體牡蠣的高度不育性、生長快、品質(zhì)好、全年糖原含量較高，一年四季鮮美肥滿，繁殖季節(jié)死亡率低的優(yōu)勢，又具單體牡蠣個體獨立、便于挑揀、外殼規(guī)整的特點，以適應(yīng)市場需求。而常規(guī)二倍體牡蠣在繁殖季節(jié)因為產(chǎn)卵、排精的消耗，軟體消瘦明顯，品質(zhì)大打折扣[1]。本文以我國常見的經(jīng)濟牡蠣品種太平洋牡蠣(Crassostreagigas)為例，通過利用四倍體雄貝與二倍體雌貝雜交生產(chǎn)出三倍體牡蠣，現(xiàn)將單體三倍體牡蠣的苗種培育技術(shù)總結(jié)如下。

1 親貝培育

1.1 親貝暫養(yǎng)配套硬件設(shè)施

牡蠣人工育苗的親貝暫養(yǎng)池、產(chǎn)卵池、幼體孵化池、苗種培育池、單細胞藻類培養(yǎng)池以及與之相配套的供水、 供電、供氣、供熱等設(shè)施。

1.2 親貝選擇

二倍體牡蠣親貝應(yīng)符合 GB/T 20552《太平洋牡蠣》和SC/T 2026《太平洋牡蠣 親貝》的規(guī)定[2-3]，健康的2齡貝，殼高>8 cm,體重>40 g為宜。四倍體牡蠣的外部形態(tài)、感官要求、規(guī)格等與二倍體親貝相仿。親貝暫養(yǎng)水體中的密度，二倍體牡蠣80～120個/m3；四倍體牡蠣60～80個/m3.室內(nèi)經(jīng)升溫促熟培養(yǎng)60 d。

1.3 親貝培育條件

水質(zhì)符合GB 11607《漁業(yè)水質(zhì)標準》和NY5052《無公害食品 海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)》的規(guī)定[4-5]?？梢宰匀凰疁嘏嘤敝劣H貝性腺成熟。北方生產(chǎn)多以升溫促熟，可提前至少1個多月出池。親貝每天升溫0.5～1.0 ℃, 期間恒溫1～2次，每次3～4 d，水溫逐漸提升到22～23 ℃恒溫待產(chǎn)。鹽度25‰～32‰，光照強度500～1 000 lx，單位水體培育密度：二倍體牡蠣80～100個/m3，四倍體牡蠣60～80個/m3。

1.4 日常管理

1.4.1 投餌 餌料以硅藻、扁藻、金藻等新鮮單胞藻為主，代用餌料多用藻粉、酵母粉、淀粉等。單胞藻餌料濃度為 20×104～30×104cell/mL(以硅藻為例)，6～8次/d；代用餌料用量為 2～5 mg/L。觀察水色透明度和親貝排便情況調(diào)整餌料量。

1.4.2 換水 培育前中期換水早晚各一次，每次換水量50%～100%，培育后期臨近采卵前減少換水量，每次換50%。臨近獲卵時換水水流輕緩，避免刺激親貝導(dǎo)致流產(chǎn)。

1.4.3 倒池 培育前中期2～3 d倒池一次，培育后期臨近采卵前不倒池。

1.4.4 吸污 培育后期臨近采卵前每天吸污一次。

1.4.5 升溫 每天升溫1 ℃以內(nèi)，直到22～23 ℃恒溫待產(chǎn)。

1.4.6 充氣 前中期中量充氣，后期臨近采卵前為減少對親貝的刺激，可微量充氣。

1.4.7 性腺檢查 計算有效積溫，并觀察性腺發(fā)育。性腺發(fā)育充分的親貝內(nèi)臟團飽滿，生殖腺覆蓋全部消化腺，占軟體部中央橫截面60%以上。將成熟的二倍體親貝洗刷干凈后，剖去右殼，露出軟體部。用牙簽蘸取少量生殖細胞，涂于載玻片的水滴中，在顯微鏡下鑒別雌雄，呈顆粒狀散開的為卵子，呈煙霧狀散開的為精子。解剖鏡檢觀察卵子離散程度好，精子活潑,可準備采卵。雄雌比例10∶1，殼高平均為10～12 cm。

1.4.8 藥物使用 藥物使用應(yīng)符合NY 5072《無公害食品 水產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)限量》和NY 5071《無公害食品 漁用藥物使用準則》的規(guī)定[6-7]。

2 人工催產(chǎn)與受精卵的孵化

2.1 工具

工具包括牡蠣開殼器、解剖刀、手術(shù)剪、牙簽、載玻片、顯微鏡、篩絹網(wǎng)、水盆類塑料容器、海水洗瓶等，并用濃度為10 mg/L的高錳酸鉀溶液浸泡10 min，用砂濾海水沖洗干凈。

2.2 采卵與授精

通常自然排放法、人工刺激法(陰干、流水、升溫刺激)、性腺解剖法綜合使用。發(fā)現(xiàn)性腺發(fā)育充分的親貝有少量自然排放，即用陰干、流水、升溫法刺激親貝排放。性腺解剖法常用于人工授精時親貝性腺成熟度不同步時采用，三倍體培育中也多用此法。挑出發(fā)育好的親貝，雌雄嚴格分開放置，避免精子污染。二倍體牡蠣選取雌貝，四倍體牡蠣選取雄貝，雄雌比例10∶1。用解剖刀刮取卵巢盛放于容器中，將成熟的卵巢逐個剝離并攪碎，先后用80目、200目的篩絹依次過濾，去除雜質(zhì)和大的組織碎片，然后用500目篩絹濾洗，去除組織液等，清洗干凈的卵子加入過濾海水，卵子的密度4×107～8×107粒/L，在23 ℃下靜置30～60 min備用。四倍體雄貝性腺也剝離并攪碎，并用300目篩絹過濾雜質(zhì)和組織碎塊，制成精液備用。分批將精液加入有卵子的海水中，鏡檢每個卵子周圍有4～5個精子即可，攪拌5～10 min。

2.3 孵化

2.3.1 孵化設(shè)施與條件 將受精卵移入孵化池中孵化。孵化池體積 20 m3，水深 1～1.5 m。水溫控制在 22～26 ℃，鹽度為 25‰～32‰，光照強度500～1 000 lx。

2.3.2 孵化管理 受精卵的密度控制在30～50個/mL。受精卵入池后，停止充氣1～2 h，通過篩絹網(wǎng)箱過濾，用虹吸法吸去上層含有大量精子的海水，再添加過濾后的海水，洗卵1～2次。幼體破膜之前每小時攪池一次，撈取水面精沫，定時鏡檢胚胎發(fā)育情況。

3 浮游幼蟲培育

3.1 選幼

水溫21～23 ℃，受精卵孵化22～24 h后發(fā)育至D形幼蟲，用顯微鏡觀察D形幼蟲比例達到70%～80%時，先停氣20 min，然后用300目篩絹將D形幼蟲移入培育池中。

3.2 幼蟲培育設(shè)施與條件

培育池水溫、水質(zhì)與孵化池近同。 水溫22～25 ℃為宜。

3.3 培育密度

殼高≤150 μm，幼蟲密度10～20個/mL；殼高>150 μm，幼蟲密度5～10個/mL。

3.4 日常管理

3.4.1 投餌 D形幼蟲形成6 h后即可投喂金藻，幼蟲殼高120 μm后逐漸增加硅藻、角毛藻、扁藻等微藻的比例。前期保持水體單胞藻餌料密度5×103～1×104cell/mL(以金藻為例)；后期隨著投喂量逐漸增加，單胞藻數(shù)量可達3×104～5×104cell/mL。 投喂量通過鏡檢胃含物多少做調(diào)整。投喂次數(shù)從4次/d逐漸增加到8次/d。

3.4.2 換水 每天早、晚換水各1次，初期每次換水20%～30%，后期逐漸增加到每次50%以上。

3.4.3 倒池 每隔5～7 d倒池一次。

3.4.4 充氣 連續(xù)充氣，保持溶解氧(DO)≥5 mg/L。

3.5 采苗

3.5.1 采苗器制作和投放 第一種附著基材料是塑料薄膜、廢舊洗凈的篩絹網(wǎng)。第二種附著基材料是貝殼，生產(chǎn)中應(yīng)用較多。牡蠣殼高8 cm以上，扇貝殼高6 cm以上。在貝殼中間鉆小孔，用聚乙烯繩穿串連結(jié)，80～100片/串，全長90～100 cm，投放水體密度5 000～8 000片/m2。采用80目篩絹拖網(wǎng)法或者虹吸法將眼點幼蟲移出放入它池，投放附著基進行附著。聚乙烯波紋板固著功能相仿。

3.5.2 采苗器消毒 采苗器沖刷干凈后，先用0.5‰～1‰的NaOH溶液或2‰的漂白粉(含氯量35%)溶液浸泡24 h，再用砂濾海水沖洗2～3遍，去除殘氯。

3.5.3 投放密度 每立方水體投放50～80串扇貝殼。

3.5.4 采苗時間 幼蟲殼高達到300～350 μm，出現(xiàn)眼點幼蟲比例達40%以上時，對眼點幼蟲進行篩選，并移入已投放采苗器的水池中，密度控制在2～3個/mL即可。

4 稚貝培育

4.1 稚貝管理

幼蟲附著4 d左右，鰓和次生殼逐漸形成，足、眼點、面盤等器官逐漸消失，長成稚貝。按照每天降溫1 ℃的速度降溫至自然海水水溫后出庫。水位浸末采苗器最上端。固著后24 h，可加大換水量及充氣量；日投喂餌料密度為10×104～20×104個/mL(以硅藻為例)，分8～12次投喂。

4.2 單體牡蠣脫固著基處理

4.2.1 培育單體牡蠣最常用的是先固著后脫基法 對于篩絹、塑料薄膜，從幼蟲附苗后10 d至殼高1.0～1.5 mm,通過抖動、沖刷塑料薄膜、篩絹，可將小稚貝脫離固著基;對于附在貝殼、聚乙烯波紋板上的蠣苗，需至殼高1.5～2.0 cm脫基，也可根據(jù)貝殼、聚乙烯波紋板上固著稚貝密度的大小適當調(diào)整脫基時間，從而降低牡蠣殼破損率，提高成活率。使幼蟲先固著后脫離固著基，成為單體牡蠣，從而實現(xiàn)了單體三倍體牡蠣的培育。

4.2.2 苗種質(zhì)量與計數(shù) 符合SC/T 2027《太平洋牡蠣 苗種》的規(guī)定[8]。

4.2.3 苗種出池運輸 采用干運法。氣溫在25 ℃以下，運輸時間控制在8 h以內(nèi)。