潘在興 潘健華 夏歡 葉芳麗 楊瑤

甲狀腺癌是臨床最為常見的頭頸部惡性腫瘤之一，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。近年來影像學(xué)技術(shù)不斷進步，甲狀腺癌的檢出率也越來越高。隨著對甲狀腺癌的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)細胞增殖和凋亡失衡是甲狀腺癌發(fā)生和發(fā)展的重要基礎(chǔ)［1］。Livin是凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族中的重要一員，在人類多種腫瘤中表現(xiàn)為高表達，并可作為腫瘤患者的獨立預(yù)后因素［2］。同時Livin過度表達與腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)也有明顯關(guān)系，使得Livin 成為目前腫瘤研究的熱點之一［3］。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）是一種DNA 結(jié)合蛋白，廣泛存在于機體組織和細胞中，對細胞功能具有一定調(diào)節(jié)作用［4］。有研究顯示［5］，STAT3在炎癥反應(yīng)中起到積極作用，且能被Hauns 激酶磷酸化激活，進入細胞核后結(jié)合基因啟動子上調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。且還有研究證實［6］，STAT3可誘導(dǎo)MMP-1 水平升高，使腫瘤更具有侵襲性。因此STAT3基因表達與腫瘤的關(guān)系也成為當(dāng)下研究的熱點。本文對本院甲狀腺癌患者進行研究，分析癌組織和癌旁組織中Livin和STAT3的基因表達水平，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年10 月至2021 年12 月期間?？谑腥嗣襻t(yī)院收治的48 例甲狀腺癌患者作為研究對象。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為甲狀腺癌的患者；②進行手術(shù)治療的患者；③就診前未進行過放化療等相關(guān)治療的患者；④簽署知情同意書的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①復(fù)發(fā)性甲狀腺癌患者；②有手術(shù)禁忌癥的患者；③妊娠或哺乳期女性；④有精神障礙無法配合研究者；⑤同時參與其他研究者。其中男性患者26 例，女性患者22 例，平均年齡（43.1±4.4）歲。甲狀腺癌病理分型：甲狀腺乳頭狀癌患者31 例，甲狀腺濾泡樣癌17 例。TNM 分期：其中Ⅰ、Ⅱ期患者33 例，Ⅲ、Ⅳ期患者15 例。所有患者均進行手術(shù)治療，術(shù)中取甲狀腺癌組織和癌旁組織（病灶邊緣3 cm）做標(biāo)本進行研究。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑

儀器：德國Leica 2245 石蠟切片機；福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的免疫組織化學(xué)筆；日本Olympus BX40 光學(xué)顯微鏡；上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司生產(chǎn)的電熱恒溫培養(yǎng)箱；上海躍進醫(yī)療器械一廠生產(chǎn)的電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

試劑：武漢博士德公司提供的兔抗人Livin 多克隆抗體（批號：2019684）以及兔抗人STAT3 多克隆抗體（批號：2019013），稀釋濃度1∶50；北京中杉金橋公司提供的DAB 顯色劑和免疫組化染色有關(guān)試劑。

1.2.2Livin、STAT3基因表達的檢測方法

采用免疫組化法檢測Livin和STAT3表達水平。所有癌組織和癌旁組織通過10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，之后取4 μm 厚連續(xù)切片。對組織切片進行脫蠟水化，高溫高壓法進行抗原修復(fù)。再滴入一抗置于4℃孵育箱內(nèi)過夜。隨后嚴格按照說明書滴加試劑，行DAB 顯色，再行蘇木素復(fù)染、脫水、封片，最后在高倍顯微鏡下進行觀察。將已知的陽性標(biāo)本作為陽性對照，以PBS 代替一抗用于陰性對照。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察癌組織和癌旁組織中Livin、STAT3基因的表達情況，分析Livin和STAT3基因表達情況與甲狀腺癌臨床病理學(xué)的關(guān)系。評價方法［7］：所有組織切片均由病理科兩名醫(yī)師進行讀片，Livin和STAT3染色陽性信號呈棕黃色或棕色顆粒，定位于細胞質(zhì)和細胞膜。每張切片隨機取10 個高倍鏡視野，根據(jù)染色程度及陽性細胞比例進行結(jié)果判定。0 分：不著色；1 分：染色強度較差；2 分：染色強度中等；3 分：染色強度較深。0 分：陽性細胞占比＜5%；1 分：陽性細胞占比為5%～25%；2 分：陽性細胞占比26%～50%；3 分：陽性細胞占比＞50%。兩項積分乘積為最終所得結(jié)果。陰性：0～1 分；弱陽性：2～3 分；中度陽性：4～6 分；強陽性：＞6 分。陽性率=（弱陽性+中度陽性+強陽性）/總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 癌組織和癌旁組織中Livin 和STAT3 基因的表達情況比較

甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因的陽性表達率明顯高于癌旁組織中Livin和STAT3基因，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 甲狀腺癌組織和癌旁組織STAT3、Livin 免疫組化染色（×200）Figure 1 Immunohistochemical staining of STAT3 and Livin in thyroid cancer tissue and adjacent tissue（×200）

表1 癌組織和癌旁組織中Livin 和STAT3 基因的表達情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of Livin and STAT3 gene expression in cancer tissues and adjacent tissues［n（%）］

2.2 Livin、STAT3 基因表達與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系

Livin、STAT3基因在甲狀腺癌中的表達與患者臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移以及包膜浸潤有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、腫瘤直徑、病理類型等無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表2 Livin、STAT3 基因表達與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between Livin and STAT3 gene expression and clinicopathological factors in thyroid cancer tissues［n（%）］

2.3 甲狀腺癌組織中Livin 與STAT3 基因表達的關(guān)系

Pearson相關(guān)性分析顯示兩者在甲狀腺癌組織中的表達呈正相關(guān)（r=0.412，P＜0.05）。見表3。

表3 甲狀腺癌組織中Livin 與STAT3 基因表達的關(guān)系Table 3 elationship between Livin and STAT3 gene expression in thyroid cancer tissues

3 討論

細胞增殖和凋亡失衡是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要因素，而細胞的凋亡又是調(diào)節(jié)機體細胞水平平衡的重要機制，因此細胞的凋亡與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系［8］。影響細胞的凋亡基因分為促凋亡基因和抗凋亡基因［9］。Livin是近年來新發(fā)現(xiàn)的IAP 家族中的抗凋亡基因之一，大多數(shù)學(xué)者認為Livin抑制凋亡的主要機制是通過IAPs 成員特有的BIR 區(qū)結(jié)合Caspase 家族，抑制Capase 家族成員活性，從而達到阻斷凋亡受體和線粒體的凋亡途徑，抑制細胞的凋亡［10-12］。還有研究顯示［13］，胎兒發(fā)育過程中Livin在多種組織中高表達，可能與生長發(fā)育有關(guān)。正常成人組織中Livin低表達或不表達，而在惡性腫瘤組織中Livin的表達水平明顯升高。因此目前臨床認為Livin與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系［14］。STAT3也是近年來研究的重點基因之一，目前認為STAT3參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程［15-16］。有學(xué)者提出［17-18］，STAT3通過影響下游生長、凋亡相關(guān)基因的表達，促進了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。因此認為Livin和STAT3基因的表達均與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

本文分析了甲狀腺癌組織與癌旁組織中Livin和STAT3基因的表達水平，結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因的陽性表達率明顯高于癌旁組織中Livin和STAT3基因的陽性表達率，結(jié)果表明Livin和STAT3基因高表達與甲狀腺癌的發(fā)生具有一定關(guān)系。本文還對比了Livin、STAT3基因表達與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系，結(jié)果顯示，Livin、STAT3基因在甲狀腺癌中的表達水平與患者臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移以及包膜浸潤有關(guān)，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜浸潤以及臨床分期Ⅲ、Ⅳ期的患者，Livin和STAT3基因表達陽性率更高，結(jié)果提示，Livin和STAT3基因表達升高可能是導(dǎo)致甲狀腺癌細胞侵襲性強，發(fā)生癌細胞轉(zhuǎn)移的重要原因。在觀察甲狀腺癌組織中Livin與STAT3基因表達的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，Livin與STAT3在甲狀腺癌組織中的表達呈正相關(guān)，即Livin表達水平升高，STAT3表達水平也升高。在Wang H［19］等人的研究中發(fā)現(xiàn)，乳腺癌和胃癌中的STAT3能調(diào)控Livin基因轉(zhuǎn)錄，促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。STAT3能進一步調(diào)控Livin基因轉(zhuǎn)錄，使Livin基因高表達，抑制腫瘤細胞的凋亡；同時還能促進血管內(nèi)皮生長因子的表達，促進腫瘤組織新生血管生成，便于腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。因此認為STAT3表達升高會進一步促進Livin基因表達的升高，促進甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展［20］。

綜上所述，甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因表達明顯升高，兩者的表達呈正相關(guān)，Livin和STAT3基因表達異常升高參與了甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程。