潘 勇，吳巧茵，李林林，譚再鈺，李俊瑤，張 娟，施友志

（1. 湖北中煙工業(yè)有限責任公司，湖北 武漢 430040；2. 江南大學 工業(yè)生物技術教育部重點實驗室，江蘇 無錫 214122；3. 江南大學 生物工程學院，江蘇 無錫 214122；4. 江南大學 未來食品科學中心，江蘇 無錫 214122）

近年來，國產(chǎn)雪茄的產(chǎn)量與銷售迅速增加，銷售年均增長率達到39.13%，但國產(chǎn)雪茄受風格特征與原料的限制難以更好地突破高端雪茄市場[1-2]。長期以來，雪茄生產(chǎn)原料依賴于進口，存在成本昂貴、原料質(zhì)量不夠穩(wěn)定、發(fā)酵時間較長、品質(zhì)風格受限等不利因素；而國產(chǎn)雪茄煙葉原料受工藝條件不夠成熟、地理環(huán)境差異、氣候性因素的限制，在品質(zhì)上未能達到國外進口煙葉的水平[3]。雪茄生產(chǎn)對于煙葉原料的要求極高，不同部位煙葉制成雪茄后致香成分有著比較明顯的差別，下部煙葉的煙堿含量、總氮含量、多酚含量等低于中部煙葉，使得下部煙葉在發(fā)酵后致香成分含量較低，制得雪茄香氣較淡、吃味寡淡，在雪茄煙葉等級評定與煙葉發(fā)酵生產(chǎn)中劣于中上部煙葉[3-6]。

堆積發(fā)酵是雪茄煙葉香氣物質(zhì)產(chǎn)生和品質(zhì)提升的關鍵環(huán)節(jié)之一，國產(chǎn)雪茄生產(chǎn)仍處于起步的初級階段，堆積過程中的發(fā)酵機制以及衡量雪茄發(fā)酵質(zhì)量的指標仍尚待挖掘。已有大量研究對煙葉種植方式與煙葉產(chǎn)量質(zhì)量進行了分析，對不同發(fā)酵階段的研究主要是不同生理生化指標與煙葉香韻、致香物質(zhì)的分析，而對于雪茄發(fā)酵的相關研究，尤其是對發(fā)酵機制的研究仍較為有限[5，7-9]。

為了提升國產(chǎn)雪茄在國際市場中的競爭力，還需進一步提高國產(chǎn)煙葉工業(yè)可用性，形成一套完善的雪茄發(fā)酵工藝[2]。因此，研究國產(chǎn)雪茄煙葉堆積發(fā)酵過程中微生物的變化規(guī)律與不同產(chǎn)區(qū)、不同部位煙葉微生物的差異，對于強化國產(chǎn)雪茄煙葉發(fā)酵技術、增強下部雪茄煙葉香氣、提升雪茄發(fā)酵品質(zhì)具有重要意義。鑒于此，采用高通量測序技術分析湖北十堰與四川德陽2 個產(chǎn)區(qū)中、下部的雪茄煙葉原料在堆積發(fā)酵過程中不同發(fā)酵節(jié)點優(yōu)勢微生物的變化，解析堆積發(fā)酵中優(yōu)勢微生物的變化規(guī)律及十堰與德陽煙葉特有微生物的差異，為生產(chǎn)高質(zhì)量國產(chǎn)雪茄、形成國產(chǎn)雪茄特征風格提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

以湖北十堰產(chǎn)區(qū)的CX14 品種的中、下部煙葉及四川德陽產(chǎn)區(qū)的DX4 品種的中、下部煙葉作為試驗的研究對象，樣品編號：A 為十堰產(chǎn)區(qū)品種CX14的中部一級煙葉、B為十堰產(chǎn)區(qū)品種CX14的下部一級煙葉、C 為德陽產(chǎn)區(qū)品種DX4 的中部一級煙葉、D為德陽產(chǎn)區(qū)品種DX4的下部一級煙葉。對煙葉原料進行堆積發(fā)酵，湖北中煙工業(yè)有限責任公司堆垛發(fā)酵室的溫度為21～25 ℃，濕度控制在60%～70%，從發(fā)酵0 d 的原煙開始取樣，煙葉每發(fā)酵7～10 d 進行一次翻垛，每次翻垛都進行一次取樣至發(fā)酵結束，共有5 個節(jié)點，分別為煙葉的原煙時期（T0，0 d）、發(fā)酵前期（T1，7 d）、發(fā)酵中期（T2，14 d）、發(fā)酵后期（T3，21 d）、發(fā)酵結束（T4，30 d）。采集好的樣品用自封袋密封，保存于-20 ℃冰箱中。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品處理 取5 g 煙葉在預冷的研缽中用液氮研磨成粉末，將煙葉粉末與100 mL 無菌的0.9%生理鹽水加入500 mL 帶擋板的三角搖瓶中，在10 ℃、220 r/min 振蕩培養(yǎng)箱（ZQZY-AFS，知楚）中，振蕩2～3 h 洗脫煙葉總微生物；使用臺式高速大容量離心機（5810R，Eppendorf）在4 ℃、7 000 r/min 離心10 min，收集沉淀即為煙葉的總微生物；使用OMEGA Soil DNA Kit（D5625-01，Omega Biotek 公司）提取煙葉總微生物DNA。

1.2.2 擴增子測序 以細菌和真菌DNA 為模板，分別以細菌通用引物515F（GTGCCAGCMGCCGCGGTAA）/907R（CCGTCAATTCMTTTRAGTTT）和真菌通用 引 物ITS1（GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG）/ITS2（GCTGCGTTCTTCATCGATGC）對細菌的V4—V5 區(qū)和真菌ITS1—ITS2 區(qū)域進行擴增，采用0.8%瓊脂凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物，并利用Illumina Hiseq對群落DNA 進行雙端測序。原始序列經(jīng)過去引物、質(zhì)量過濾、去噪、拼接和去嵌合體等步驟，得到煙葉樣品的物種組成和豐度信息[10]。

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 應用QIIME 2、Excel 2021和Origin 2022 軟件對獲得的煙葉微生物數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析和繪圖，通過計算α 多樣性指數(shù)和組間差異分析對不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉樣品微生物多樣性進行分析。使用QIIME 2 計算煙葉菌群的α 多樣性指數(shù)（以Chao1 指數(shù)表征群落豐富度，以Simpson 指數(shù)表征群落多樣性），應用R 語言的vegan 包進行基于置換檢驗的多元方差分析（Permutational multivariate analysis of variance，PERMANOVA）測試堆積發(fā)酵過程中每個發(fā)酵節(jié)點之間的差異[11]。以煙葉樣品中相對豐度在前20的微生物作為分析對象，使用R語言的Venn Diagram 包統(tǒng)計共有微生物和特有微生物并繪制Venn 圖；使用LEfSe 分析（LDA effect size 分析）展示每個煙葉樣品內(nèi)顯著富集的物種[12]。使用Origin 2022 和Excel 2021 對煙葉樣品中任意節(jié)點任意樣品中相對豐度超過2%的微生物的相對豐度進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。

2 結果與分析

2.1 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉微生物多樣性分析

2.1.1 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉細菌多樣性分析 在整個堆積發(fā)酵過程中，不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉細菌群落α多樣性分析結果如圖1 所示。十堰中部煙葉Chao 1指數(shù)在發(fā)酵過程中先升高后降低，最后基本趨于平穩(wěn)；Simpson 指數(shù)呈現(xiàn)稍有降低后逐漸升高的趨勢。十堰下部煙葉Chao 1 指數(shù)先升高后降低，最后基本趨于平穩(wěn)；Simpson 指數(shù)在發(fā)酵過程中先降低后升高再降低，最后稍有升高。德陽中部煙葉Chao 1 指數(shù)呈先升高后降低再升高的趨勢，Simpson 指數(shù)在發(fā)酵過程中呈先降低后升高再升高的趨勢，在發(fā)酵結束時升高。德陽下部煙葉Chao 1 指數(shù)在發(fā)酵過程中逐漸降低，Simpson 指數(shù)在發(fā)酵前期上升后逐漸降低。

圖1 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉細菌菌群α多樣性分析Fig.1 Bacterial alpha diversity of tobacco leaves in different origins and leaf parts

對不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉在整個堆積發(fā)酵過程中細菌群落進行組間差異分析，如圖2所示，十堰產(chǎn)區(qū)煙葉細菌群落在原煙時期與發(fā)酵前期組間差異較小，發(fā)酵中期時細菌菌群具有顯著變化；德陽產(chǎn)區(qū)煙葉細菌菌群在發(fā)酵前期具有顯著變化，發(fā)酵中期至發(fā)酵結束的菌群組間差異較小。以上結果表明，同一產(chǎn)區(qū)中、下部煙葉在堆積發(fā)酵過程中細菌菌群發(fā)生顯著變化的關鍵節(jié)點相似，推測發(fā)酵前期或發(fā)酵中期可能是堆積發(fā)酵過程中細菌微生物群落組成與豐度顯著變化的節(jié)點，且不同產(chǎn)區(qū)煙葉細菌微生物群落變化的節(jié)點具有較大差異。

圖2 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉細菌群落組間差異分析Fig.2 Bacterial difference analysis between groups of tobacco leaves in different origins and leaf parts

2.1.2 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌多樣性分析 在整個堆積發(fā)酵過程中，不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌群落α多樣性變化如圖3 所示。十堰中部煙葉真菌Chao 1指數(shù)在發(fā)酵過程中呈先上升后下降的趨勢，Simpson指數(shù)在發(fā)酵過程中先上升后下降，最后再次上升。十堰下部煙葉真菌Chao 1 指數(shù)在發(fā)酵過程中整體呈先上升后下降的趨勢，Simpson 指數(shù)在整個堆積發(fā)酵過程中逐漸下降。德陽中部煙葉Chao 1 指數(shù)和Simpson 指數(shù)在發(fā)酵過程中呈增加-降低-增加-降低的趨勢，德陽下部煙葉真菌Chao 1 指數(shù)和Simpson 指數(shù)在發(fā)酵過程中呈先增加后降低的趨勢，最后略有增加。

圖3 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌群落α多樣性分析Fig.3 Fungal alpha diversity of tobacco leaves in different origins and leaf parts

圖4 為不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌群落的組間差異分析。從圖4 可以看出，只有德陽中部煙葉真菌菌群在發(fā)酵中期具有顯著變化，而其余煙葉真菌群落在整個堆積發(fā)酵過程中均具有較大變化，說明煙葉真菌在堆積發(fā)酵過程中不同發(fā)酵節(jié)點變化較大。

圖4 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌群落組間差異分析Fig.4 Fungal difference analysis between groups of tobacco leaves in different origins and leaf parts

2.2 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉物種組成分析

2.2.1 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉細菌物種組成 圖5a為不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉在堆積發(fā)酵過程中相對豐度在前20 的細菌Venn 圖，煙葉樣品之間既有共性也有差異，在不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉中共有的細菌屬共有9個，分別是氣球菌屬（Aerococcus）、葡萄球菌屬（Staphylococcus）、棒狀桿菌屬（Corynebacterium_1）、不動桿菌屬（Acinetobacter）、綠細菌屬（Chloroplast）、鞘氨醇桿菌屬（Sphingobium）、鞘氨醇單胞菌屬（Sphingomonas）、假 單 胞 菌 屬（Pseudomonas）、Mitochondria，這些共有物種可能參與了堆積發(fā)酵中的有害物質(zhì)降解和香氣成分轉化[5-6]。

圖5 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉共有微生物物種Fig.5 Shared microbial species of tobacco leaves in different origins and leaf parts

2.2.2 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉真菌物種組成 圖5b為不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉在堆積發(fā)酵過程中相對豐度在前20 的真菌Venn 圖，煙葉樣品之間既有共性也有差異，在不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉中共有的真菌屬共有6個，分 別 是 曲 霉 屬（Aspergillus）、鏈 格 孢 菌 屬（Alternaria）、微 子 囊 菌 屬（Microascus）、Sampaiozyma、青 霉 屬（Penicillium）、枝 頂 孢 屬（Acremonium）、鐮孢屬（Fusarium）。

2.2.3 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉特征微生物 應用LEfSe 分析不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉的特征微生物，結果如圖6 所示。從圖6 可以看出，十堰產(chǎn)區(qū)煙葉的特征細菌屬有費克藍姆氏菌屬（Facklamia）、水桿菌屬（Aquabacterium）；德陽產(chǎn)區(qū)的特征細菌屬有鹽單胞菌屬（Halomonas）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、砷氧化菌（Aliihoeflea）和涅斯捷連科氏菌屬（Nesterenkonia）。其余各煙葉樣品還有特征細菌屬，十堰中部煙葉的乳桿菌屬（Lactobacillus）、彎桿菌屬（Flectobacillus），十堰下部煙葉的海洋芽孢桿菌屬（Oceanobacillus）；德陽中部煙葉的酸桿菌屬（Acidibacter）、孢囊菌屬（Dactylosporangium）和WD2101_soil_group 及德陽下部煙葉的泛菌屬（Pantoea）等。

圖6 不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉微生物LEfSe分析Fig.6 Microbial LEfSe analysis of tobacco leaves in different origins and leaf parts

十堰產(chǎn)區(qū)的特征真菌屬為刺盤孢菌屬（Colletotrichum）和單端孢屬（Trichothecium），德陽產(chǎn)區(qū)煙葉特有的真菌屬為輪枝孢屬（Verticillium）和枝孢菌屬（Cladosporium）。其余各煙葉樣品還有特征真菌屬，十堰中部煙葉的赤霉菌屬（Gibberella）、間座殼屬（Diaporthe），十堰下部煙葉的籃狀菌屬（Talaromyces），德陽中部煙葉的柄孢殼屬（Podospora）及德陽下部煙葉的紅酵母屬（Rhodotorula）等。

2.2.4 堆積發(fā)酵過程中優(yōu)勢細菌物種組成與變化

選取在整個堆積發(fā)酵過程中相對豐度在前20，且在任意發(fā)酵節(jié)點相對豐度超過2%的細菌屬進行優(yōu)勢細菌物種組成分析，結果如圖7a所示。葡萄球菌屬、氣球菌屬和棒狀桿菌屬是各產(chǎn)區(qū)共有的優(yōu)勢細菌，不同產(chǎn)區(qū)煙葉優(yōu)勢細菌在發(fā)酵過程中具有較大差異。

圖7 堆積發(fā)酵過程中不同產(chǎn)區(qū)、部位煙葉優(yōu)勢微生物物種變化Fig.7 Changes of tobacco leaf dominant microobial species in different origins and leaf parts during stacking fermentation

葡萄球菌屬是不同產(chǎn)區(qū)煙葉原煙時期、發(fā)酵前期的優(yōu)勢細菌，隨著發(fā)酵的進行，不同產(chǎn)區(qū)、部位的優(yōu)勢細菌組成和豐度變化存在差異。十堰產(chǎn)區(qū)煙葉優(yōu)勢細菌在整個發(fā)酵過程中變化規(guī)律類似，發(fā)酵前期以葡萄球菌屬為優(yōu)勢細菌，隨著發(fā)酵過程進行，葡萄球菌屬相對豐度逐漸下降，優(yōu)勢細菌轉變?yōu)闅馇蚓鷮俸桶魻顥U菌屬。德陽產(chǎn)區(qū)發(fā)酵前期的優(yōu)勢細菌是葡萄球菌屬，氣球菌屬和棒狀桿菌屬在發(fā)酵前期和發(fā)酵中期相對豐度增加，隨著發(fā)酵的進行，德陽中部煙葉的優(yōu)勢細菌轉變?yōu)辂}單胞菌屬，而德陽下部煙葉中葡萄球菌屬始終占優(yōu)勢地位。酸桿菌屬、孢囊菌屬和WD2101_soil_group 是德陽中部煙葉的特有微生物，在發(fā)酵結束時相對豐度迅速增加。

2.2.5 堆積發(fā)酵過程中優(yōu)勢真菌物種組成與變化

選取在整個堆積發(fā)酵過程中任一發(fā)酵節(jié)點相對豐度超過2%的真菌屬進行優(yōu)勢真菌物種組成分析，結果如圖7b所示。十堰產(chǎn)區(qū)中部煙葉的優(yōu)勢真菌是曲霉屬，在發(fā)酵后期，鏈格孢屬、微子囊菌屬相對豐度增加，轉變?yōu)閮?yōu)勢真菌。在十堰產(chǎn)區(qū)下部煙葉的發(fā)酵前期，曲霉屬相對豐度迅速減少，籃狀菌屬是十堰下部煙葉中特有的微生物且在發(fā)酵前期和發(fā)酵結束保持優(yōu)勢地位，在發(fā)酵前期至發(fā)酵后期鏈格孢菌屬相對豐度增加成為優(yōu)勢真菌。德陽產(chǎn)區(qū)中、下部煙葉在整個發(fā)酵過程中以曲霉屬為優(yōu)勢真菌，德陽產(chǎn)區(qū)中部煙葉在發(fā)酵前期與發(fā)酵中期節(jié)擔菌屬和微子囊菌屬相對豐度增加，參與組成了煙葉的優(yōu)勢菌。

關聯(lián)分析4個煙葉樣品可知，曲霉屬、鏈格孢屬和微子囊菌屬是各產(chǎn)區(qū)共有的優(yōu)勢真菌，不同產(chǎn)區(qū)煙葉優(yōu)勢真菌組成與豐度變化在發(fā)酵過程中具有較大差異。曲霉菌屬是各煙葉樣品原煙時期和發(fā)酵前期的優(yōu)勢真菌，鏈格孢菌屬、微子囊菌屬在發(fā)酵中期、發(fā)酵后期相對豐度增加，組成煙葉的優(yōu)勢真菌。

3 結論與討論

本研究中，德陽中部煙葉的微生物群落豐富度在堆積發(fā)酵過程中呈上升趨勢，其余煙葉樣品微生物群落豐富度隨著發(fā)酵的進行呈下降趨勢，德陽產(chǎn)區(qū)中部煙葉在發(fā)酵后期群落豐富度增加，可能是德陽產(chǎn)區(qū)的特有微生物對群落結構變化的影響。中部煙葉微生物群落多樣性在發(fā)酵過程中基本呈上升趨勢，下部煙葉群落多樣性隨著發(fā)酵的進行基本呈下降趨勢。堆積發(fā)酵過程中，中部、下部煙葉微生物群落多樣性變化的差異可能是因為中部煙葉稍厚油分較多，總糖含量、煙堿、總氮含量與下部煙葉相比較高，在堆積發(fā)酵時利于微生物繁殖，下部煙葉群落多樣性在發(fā)酵后期至發(fā)酵結束減少，可能是導致下部煙葉生產(chǎn)的雪茄香氣、吃味上不如中部煙葉的原因[5，13-14]。前人以海南中部煙葉為研究對象，其細菌群落多樣性隨著發(fā)酵的進行呈先增加后降低的趨勢[15-16]，與本研究結果相似。

本研究中，十堰產(chǎn)區(qū)中部、下部煙葉細菌優(yōu)勢微生物與德陽產(chǎn)區(qū)中部、下部煙葉細菌優(yōu)勢微生物在整個發(fā)酵過程中變化規(guī)律相似，但中部煙葉與下部煙葉總糖、氨基酸、香氣物質(zhì)含量等存在較大差異，造成中、下部煙葉品質(zhì)差異可能是因為下部煙葉結構疏散、含水量較高，長時間的高溫高濕發(fā)酵環(huán)境在發(fā)酵過程中會促使糖分和多酚類物質(zhì)快速轉化過多，加速煙葉褐變和霉變的風險，影響煙葉品質(zhì)[17]。

煙葉微生物和環(huán)境變化協(xié)同作用下，雪茄煙葉發(fā)酵過程中大分子物質(zhì)降解、小分子物質(zhì)轉化、香氣物質(zhì)生成，推動雪茄特殊品質(zhì)的形成[18-19]。本研究中，同一部位不同產(chǎn)區(qū)的煙葉在優(yōu)勢微生物的結構上存在較大差異，在不同發(fā)酵節(jié)點起到主要作用的微生物也不完全相同，這與產(chǎn)區(qū)特有微生物和環(huán)境因素、微生物之間的互作關系相關[20]。在發(fā)酵前期，中等酸性和中溫環(huán)境適宜葡萄球菌屬、氣球菌屬等菌株的生長。意大利托斯卡諾雪茄煙葉在發(fā)酵過程中，葡萄球菌屬與棒狀桿菌屬的變化與十堰產(chǎn)區(qū)煙葉相似，可能是由于葡萄球菌屬、氣球菌屬對煙葉還原糖、蘋果酸和檸檬酸的利用，導致溫度和pH 值升高，從而促進耐鹽、抗逆性強的棒狀桿菌屬的生長[21]，與本研究中發(fā)酵結束時棒狀桿菌屬相對豐度增加相符合。德陽產(chǎn)區(qū)下部煙葉葡萄球菌屬豐度變化與前人[22-24]研究結果相似，在菌群發(fā)生顯著變化的發(fā)酵前期與發(fā)酵中期，氨基酸運輸和代謝及碳水化合物運輸和代謝功能豐度更高。通過比較菌群優(yōu)勢菌組成與豐度的相似之處，可為更好地挖掘優(yōu)勢微生物的發(fā)酵作用及國產(chǎn)雪茄特征風格的確定提供指導。

本研究中，葡萄球菌屬、氣球菌屬、棒狀桿菌屬、鹽單胞菌屬等屬于煙葉的主要優(yōu)勢細菌，據(jù)報道可能在堆積發(fā)酵過程中具有增加香氣成分、降解有害成分等作用[21，25]。關于葡萄球菌屬在煙葉中應用的報道較少，已有研究報道在發(fā)酵香腸中接種葡萄球菌菌劑利用蛋白質(zhì)和脂肪產(chǎn)生酸和醇類物質(zhì)，酯化反應后醛類、酯類物質(zhì)含量增加，使得食品的清新味、甜香味、果香味和花香味更加濃郁[25-26]。隨著煙葉發(fā)酵的進行，溫度和pH 升高，棒狀桿菌的耐鹽性使其能夠生長較好[21]。有研究報道，氣球菌屬、鹽單胞菌屬是腌制麻竹筍的優(yōu)勢微生物，具有耐鹽、抗逆性較強的特點，且在雪茄煙葉研究中也能檢測到[21，27]；通過Pearson 相關分析發(fā)現(xiàn)，鹽單胞菌屬、涅斯捷連科氏菌屬與3-甲基丁醛、2-庚酮、己醛、辛醛及己酸乙酯等具有水果香、花香的物質(zhì)呈正相關[28]。雪茄堆積發(fā)酵過程中的優(yōu)勢真菌如曲霉屬、籃狀菌屬在發(fā)酵過程中也具有改善煙葉品質(zhì)、提升香氣的功能。全銘沁等[29]將1株能夠分泌淀粉酶和蛋白酶的黑曲霉應用于上部煙葉中，發(fā)酵后的煙葉勁頭下降、雜氣量減少，香氣得到了提升。另外，在分離根際微生物時分離到1株籃狀菌，應用該菌能夠抑制有害菌的繁殖，使有益微生物的相對豐度上升[30]。除優(yōu)勢微生物外，煙葉特有微生物如芽孢桿菌屬、砷氧化菌屬、乳桿菌屬、海洋芽孢桿菌屬、刺盤孢菌屬、單端孢屬、枝孢菌屬、赤霉菌屬、間座殼屬、紅酵母屬等在本研究煙葉樣品中相對豐度較低，但在其他研究中均有報道是煙葉的優(yōu)勢微生物，且在分泌淀粉酶、蛋白酶等關鍵酶降解大分子物質(zhì)、生成特征香氣成分中具有重要作用[16，22]。本研究中，葡萄球菌屬、氣球菌屬、棒狀桿菌屬、鹽單胞菌屬等優(yōu)勢微生物可能通過產(chǎn)酶、影響菌群結構等對雪茄煙葉香氣提升和國產(chǎn)雪茄生產(chǎn)具有至關重要的作用，其代謝活動和發(fā)酵機制還需進一步的研究，并通過菌劑制備與人工構建微生物群落應用于下部煙葉的發(fā)酵生產(chǎn)。