屠雨晨，陳欣慰，黃 芳，湯逸飛，張國(guó)平

（嘉興市農(nóng)業(yè)綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心，浙江 嘉興 314000）

柚（cirtus maxima）是蕓香科橘屬植物，為亞熱帶常綠喬木，原產(chǎn)地為我國(guó)及東南亞地區(qū)，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[1]。隨著農(nóng)藥的大量使用，柚的質(zhì)量安全已不容樂(lè)觀，主要表現(xiàn)為農(nóng)殘檢出率高和超標(biāo)率高[2]。國(guó)外已有對(duì)本國(guó)主產(chǎn)地柚的農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀的報(bào)道，但我國(guó)在這方面的研究報(bào)道較少[3]。由于柚中的化學(xué)成分非常復(fù)雜，其中含有大量的色素、脂類、蠟質(zhì)、多糖等[4]，并且待測(cè)農(nóng)藥品種繁多且殘留含量低，使得直接測(cè)定柚中農(nóng)藥殘留的困難較大。因此，建立一種快速可靠、低成本和高靈敏度的多農(nóng)藥殘留痕量分析方法，對(duì)于種植者和監(jiān)管部門有重要的實(shí)際意義。

基質(zhì)效應(yīng)是指樣品中的其他組分對(duì)待測(cè)物濃度測(cè)定值準(zhǔn)確度的影響，導(dǎo)致待測(cè)組分對(duì)儀器分析的響應(yīng)出現(xiàn)增強(qiáng)或抑制[5]。影響基質(zhì)效應(yīng)的因素較多，如基質(zhì)種類、被分析農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)性質(zhì)以及儀器選用的離子源及離子化形式[6]?；|(zhì)效應(yīng)的存在嚴(yán)重影響了農(nóng)藥殘留的定量分析，用于解決基質(zhì)效應(yīng)的方法有基質(zhì)凈化法、特殊進(jìn)樣法、校正因子校準(zhǔn)法和分析保護(hù)劑法等[7]。目前，大部分農(nóng)殘檢測(cè)方法是使用基質(zhì)匹配標(biāo)樣來(lái)進(jìn)行校準(zhǔn)[8]。不同基質(zhì)對(duì)同一農(nóng)藥呈現(xiàn)不同的基質(zhì)效應(yīng)，且在不同濃度水平產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)也不盡相同[9]。

本試驗(yàn)運(yùn)用QuEChERS前處理方法，結(jié)合GCQqQ檢測(cè)系統(tǒng)，快速提取檢測(cè)柚中30種農(nóng)藥殘留的同時(shí)對(duì)檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)也進(jìn)行了系統(tǒng)分析，期望為柚產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管和溯源提供有力的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

柚樣品來(lái)源于浙江嘉興某種植基地，采樣后將樣品去殼勻漿，貯存于低溫冰箱中以待處理。葡萄柚和三紅柚的提取、凈化和檢測(cè)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均來(lái)源于北京曼哈格生物科技有限公司，檢測(cè)參數(shù)為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部明令禁止或限制使用的以及本地生產(chǎn)中使用的30種農(nóng)藥:水胺硫磷、二嗪磷、噠螨靈、治螟磷、噁霜靈、氰戊菊酯、腈菌唑、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、甲基異柳磷、氟氯氰菊酯、丙溴磷、三唑磷、蠅毒磷、六六六、特丁硫磷、甲霜靈、滴滴涕、多效唑、戊唑醇、三唑酮、甲氰菊酯、丙環(huán)唑、腐霉利、乙烯菌核利、伏殺硫磷、毒死蜱、滅線磷。

1.2 儀器與設(shè)備

7890B/7000C氣相色譜/質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；Scout SE-SE202F電子天平（美國(guó)OHAUS公司）；ROTINA 420R離心機(jī)（德國(guó)Hettich公司）；氮吹儀；XW-80A旋渦混合器（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；JP-330B-6D粉碎機(jī)（永康市久品工貿(mào)有限公司）。

1.3 儀器條件

1.3.1 GC條件所用色譜柱為HP-5MS Ultra Inert（30 m×0.25 mm,0.25μm）；柱溫采用程序升溫，初溫50℃，保持4 min后以25℃/min升至125℃運(yùn)行3 min，再以10℃/min升至300℃運(yùn)行17.5 min，保持4 min后運(yùn)行300℃保持5 min；載氣為氦氣（純度≥99.999%），流速3.5 mL/min，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1μL。

1.3.2 MS條件電子電離源（EI），電子能量70 eV；進(jìn)樣口溫度250℃，檢測(cè)器溫度280℃，離子源溫度300℃；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）檢測(cè)。

1.4 樣品前處理

取不少于1 000 g柚樣品，采用對(duì)角線分割法取對(duì)角部分后將其切碎，充分混勻放入食品加工器中粉碎，制成待測(cè)樣，放入分裝容器中備用。稱取10 g(精確至0.01 g)樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，加入QuEChERS試劑包（內(nèi)含4 g MgSO4、1 g NaCl、0.5 g檸檬酸氫二鈉、1 g檸檬酸鈉），振蕩1 min，于4 200 r/min下離心5 min；取6 mL上清液于15 mL離心管（內(nèi)含900 mg MgSO4、150 mg PSA、15 mg GC-e）中，振蕩1 min，于4 200 r/min下離心5 min；取上清液2 mL，氮吹至近干后，乙酸乙酯復(fù)溶至1 mL，過(guò)0.22μm濾膜，待GC-MS/MS測(cè)定。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別吸取30種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－18℃貯存。分別吸取30種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，制成10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于－18℃貯存。用丙酮將標(biāo)準(zhǔn)中間液配制成各質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃貯存。用基質(zhì)空白溶液分別配制質(zhì)量濃度為50、100、150、200和250μg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.6 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.6.1 回收率和精密度測(cè)定本試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)加標(biāo)量分別為0.05、0.15和0.25 mg/kg的葡萄柚和三紅柚空白基質(zhì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)及精密度測(cè)定。

1.6.2 空白基質(zhì)對(duì)數(shù)據(jù)分析的影響葡萄柚和三紅柚基質(zhì)在檢測(cè)中可能存在假陽(yáng)性，因此本試驗(yàn)對(duì)空白葡萄柚和三紅柚樣品進(jìn)行檢測(cè)。XIC結(jié)果表明，葡萄柚和三紅柚空白樣品采用QuEChERS試劑包，沒(méi)有產(chǎn)生假陽(yáng)性。葡萄柚和三紅柚加標(biāo)基質(zhì)的峰形良好，沒(méi)有雜峰干擾并且響應(yīng)較大的離子對(duì)為定量離子對(duì)。

1.6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)效應(yīng)以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，將配制的50、100、150、200和250μg/L系列質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算及判定:ME（%）=（基質(zhì)標(biāo)曲斜率/溶劑標(biāo)曲斜率-1）×100。當(dāng)ME值為20%～50%時(shí)，柚的基質(zhì)效應(yīng)呈中等基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)ME值＞50%時(shí)，柚的基質(zhì)效應(yīng)呈強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)ME值為-20%～20%時(shí)，柚的基質(zhì)效應(yīng)呈弱基質(zhì)效應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 農(nóng)藥的質(zhì)量分析參數(shù)驗(yàn)證

按照保留時(shí)間（tr）順序分段檢測(cè)，以各農(nóng)藥定量離子對(duì)的峰面積和對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。30種農(nóng)藥在丙酮溶液中峰形良好，其線性回歸曲線的相關(guān)系數(shù)r為0.991 2～0.998 8（表1）。

表1 30種農(nóng)藥在丙酮溶液中的質(zhì)量分析參數(shù)

2.2 回收率與精密度試驗(yàn)

本試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)加標(biāo)量分別為0.05、0.15和0.25 mg/kg的柚空白基質(zhì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)試3針，并設(shè)置3個(gè)平行，根據(jù)XIC獲得的每種農(nóng)藥的峰面積，計(jì)算RSD（%）和R（%），且以信噪比S/N=3確定樣品檢出限（LOD）；以信噪比S/N=10確定樣品定量限（LOQ）。30種農(nóng)藥在2種柚基質(zhì)中的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r）、檢出限（LOD）和定量限（LOQ）見(jiàn)表2。結(jié)果表明，30種農(nóng)藥在2種柚基質(zhì)中的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.991 8～0.998 3，LOD為1.80×10-5～2.30×10-3mg/kg，LOQ為5.90×10-5～7.67×10-3mg/kg。

表2 30種農(nóng)藥在柚子基質(zhì)中的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

以農(nóng)藥編號(hào)（表1）為橫坐標(biāo)、回收率為縱坐標(biāo)作圖（圖1）。由圖1可知，在三紅柚基質(zhì)中，總體R為75.19%～116.29%，RSD為0.14%～5.71%。在葡萄柚基質(zhì)中，總體R為63.13%～116.27%，RSD為0.06%～11.6%。2種柚基質(zhì)的回收率總體范圍均為60%～120%，這表明該方法的精密度與正確度均符合分析要求。

圖1 30種農(nóng)藥在不同質(zhì)量比的葡萄柚和三紅柚基質(zhì)中的回收率比較

2.3 基質(zhì)效應(yīng)的測(cè)定與比較

2.3.1 基質(zhì)種類對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的影響以農(nóng)藥編號(hào)（表1）為橫坐標(biāo)、ME值為縱坐標(biāo)作圖（圖2）。由圖2可知，30種農(nóng)藥在2種柚基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)弱不完全一致，且葡萄柚的基質(zhì)效應(yīng)明顯強(qiáng)于三紅柚。除了特丁硫磷和滴滴涕2種農(nóng)藥的ME值與總體基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)弱存在差異以外，其他28種農(nóng)藥的ME值均大于50%，呈強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。因柑橘中含有大量的酚酸、類黃酮等物質(zhì)及各種揮發(fā)油成分[10]，這些物質(zhì)在柚基質(zhì)被分析測(cè)定時(shí)會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)，因此在測(cè)量過(guò)程中使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液定量限非常必要。

圖2 30種農(nóng)藥在葡萄柚和三紅柚基質(zhì)中的M E值比較

2.3.2 農(nóng)藥種類對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的影響特丁硫磷在2種基質(zhì)中的ME值均為20%～50%，屬于中等基質(zhì)效應(yīng)。滴滴涕在葡萄柚基質(zhì)中的ME值大于50%，屬于強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，但在三紅柚基質(zhì)中的ME值為20%～50%，屬于中等基質(zhì)效應(yīng)；其中，葡萄柚和三紅柚在滅線磷中的基質(zhì)效應(yīng)均達(dá)到最高，為405.87%和395.26%，在特丁硫磷中的基質(zhì)效應(yīng)均為最低，為34.10%和24.94%。除滴滴涕以外，葡萄柚和三紅柚在同一種農(nóng)藥中的基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)弱相同，無(wú)明顯差異。

3 結(jié)論與討論

30種農(nóng)藥在2種柚基質(zhì)中的總體R范圍為63.13%～116.29%，RSD為0.06%～11.6%。

總體來(lái)說(shuō)，農(nóng)藥在葡萄柚和三紅柚基質(zhì)中主要呈強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，范圍為24.94%～405.87%。特丁硫磷在2種基質(zhì)中呈中等基質(zhì)效應(yīng)，滴滴涕在葡萄柚基質(zhì)中呈強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，但在三紅柚基質(zhì)中呈中等基質(zhì)效應(yīng)。柚基質(zhì)中農(nóng)藥種類較多，基質(zhì)效應(yīng)也較為復(fù)雜，在測(cè)定過(guò)程中時(shí)常出現(xiàn)較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)。在比較2種柚基質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱時(shí)，葡萄柚的基質(zhì)效應(yīng)明顯強(qiáng)于三紅柚，但在計(jì)算2種基質(zhì)的回收率時(shí)并未體現(xiàn)出較大差異，且回收率均為60%～120%，符合分析要求。因此，可根據(jù)實(shí)際需求忽略其基質(zhì)效應(yīng)影響。本方法簡(jiǎn)單、快捷，且準(zhǔn)確度和精確度較高，適合柚中常用農(nóng)藥的快速測(cè)定。