林 偉， 邵子瀚， 劉巧凌＊

（1.信陽農(nóng)林學(xué)院， 河南信陽 464000； 2.新縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站， 河南洛陽 464000）

復(fù)硝酚鈉作為一種強力細(xì)胞賦活劑， 被廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的糧食作物、經(jīng)濟作物、蔬菜、瓜果、果樹、油料作物以及花卉等；由于它具有效率高、殘留少、使用濃度范圍廣、毒性低等優(yōu)點，復(fù)硝酚鈉還應(yīng)用畜牧上，在提高肉、蛋、毛、皮產(chǎn)量和質(zhì)量的同時，還能增強動物的免疫力，并預(yù)防多種疾病。 在水產(chǎn)上復(fù)硝酚鈉主要用于肥水產(chǎn)品或飼料之中， 可以起到改善水質(zhì)，降低養(yǎng)殖成本以及預(yù)防疾病的作用。 但復(fù)硝酚鈉對不同的養(yǎng)殖動物毒性大小存在著較大差異，若按同等濃度應(yīng)用于實際生產(chǎn)，有極大可能會造成養(yǎng)殖動物的死亡。 因此，為了生產(chǎn)中復(fù)硝酚鈉的規(guī)范使用，我們需要研究復(fù)硝酚鈉對黃河鯉的毒性。

1 試驗時間、地點及條件

試驗時間為2019年10月， 地點在信陽農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院水產(chǎn)動物病害學(xué)實驗室， 用水為循環(huán)曝氣48 h的自來水。 水質(zhì)指標(biāo)為：溫度12～13 ℃，總硬度3.8，堿度1.47 mmol/L ，pH值6.9～7.6。

2 材料

2.1 試驗動物

試驗用黃河鯉來自滎陽某黃河鯉養(yǎng)殖場， 平均規(guī)格為：體長為（16±1.5） cm，體重為（110±20）g。黃河鯉運回后放于循環(huán)爆氧池中吊水5 d， 選出210尾相同規(guī)格、 身體健壯、 體表無明顯損傷的個體進行試驗。

2.2 器材

水族箱（36 cm×25 cm×40 cm），由閩江實業(yè)集團有限公司生產(chǎn)； 玻璃棒、 吸耳球、 量筒 （50 mL、500 mL）、移液管、容量瓶（1000 mL）、溫度計、pH測試儀等， 均由上海生工生物工程有限公司鄭州分公司提供。

2.3 試劑

復(fù)硝酚鈉，購于鄭州銀?；び邢薰?。

3 方法

3.1 步驟

本試驗采用靜水生物實驗法[1]。 試驗開始前查閱大量的關(guān)于復(fù)硝酚鈉對動物及水產(chǎn)動物的急性毒性研究文獻， 又根據(jù)該試驗的特點預(yù)估出預(yù)試驗濃度范圍。 通過預(yù)試結(jié)果得出了正式試驗的濃度范圍，以此為依據(jù)，進行黃河鯉的急性毒性試驗。 水族箱體積為20 L，水體溫度為12～13 ℃，以無復(fù)硝酚鈉添加組為對照， 根據(jù)預(yù)試驗得出復(fù)硝酚鈉對黃河鯉最高半致死濃度為39 mg/L，最低半致死濃度為16 mg/L。 據(jù)此濃度范圍等對數(shù)間距設(shè)置濃度梯度分別為：16 mg/L，19 mg/L，23 mg/L，27 mg/L，33 mg/L，39 mg/L，共設(shè)立21組，其中每個濃度梯度有3個平行對照組以及三個無藥添加組為對照組。 每組放入吊水后的黃河鯉10尾，按照靜水生物實驗法要求進行毒性實驗，用藥后要注意觀察黃河鯉的活動狀況， 對死亡的個體要及時撈出， 防止腐爛影響水質(zhì)，96 h內(nèi)每間隔24 h記錄1次死亡率。

3.2 死魚的判斷標(biāo)準(zhǔn)

魚中毒死亡的標(biāo)準(zhǔn)是魚呼吸停止并對外界刺激無反應(yīng)，即當(dāng)試驗魚中毒后鰓蓋完全停止活動，對外物（如玻璃棒或鑷子）刺激30 s內(nèi)沒有產(chǎn)生反應(yīng)即確定為死亡[2]。

3.3 數(shù)據(jù)的處理

采用改良寇氏法計算半致死濃度（LC50）[2]。

式中：Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)值，i為相鄰兩組劑量對數(shù)值之差，P為各組動物的死亡率，∑p為各組動物死亡率之和[2]。

4 結(jié)果與分析

4.1 不同時間和濃度的死亡情況

不同濃度復(fù)硝酚鈉組黃河鯉死亡情況詳情見表1。

表1 不同濃度組黃河鯉不同時間死亡數(shù)量（n=10）

4.2 不同濃度組在不同時間段的半致死濃度和安全濃度

根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，用公式（1）和公式（2）計算各時間段的半致死濃度和安全濃度。 結(jié)果見表2。

表2 復(fù)硝酚鈉對黃河鯉在24 h、48 h、72 h、92 h半致死濃度與安全濃度結(jié)果mg·L-1

4.3 急性中毒反應(yīng)

黃河鯉在不同濃度的復(fù)硝酚鈉中表現(xiàn)的中毒反應(yīng)各有不同。 在放入復(fù)硝酚鈉10 min內(nèi)黃河鯉顯得有些許不安，有四處游竄的現(xiàn)象，高濃度組（39 mg/L）的黃河鯉大概在1h時，魚體反應(yīng)劇烈，出現(xiàn)極速躥游，上浮，停游，繼而又沉在水底停止游動的現(xiàn)象，而對照組黃河鯉游動正常。 隨著實驗不斷進行，高濃度的魚對外界刺激反應(yīng)非常遲鈍， 個別甚至失去知覺進而陸續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象， 其他組的魚死亡率都有顯著增加，而高濃度組（39 mg/L）的魚在24 h時全部死亡。 中毒個體體表粘液分泌較多，有的漂浮在水面，有的平躺在缸底，有的腹部朝上，有的魚體變硬，大部分都有粘液增加的現(xiàn)象出現(xiàn)。

5 討論

5.1 復(fù)硝酚鈉對黃河鯉的毒性強度

結(jié)果表明， 復(fù)硝酚鈉對黃河鯉的安全濃度為3.1 mg/L，復(fù)硝酚鈉對黃河鯉24 h、48 h、72 h、96 h的半致死濃度都為5.9 mg/L。參照我國危險化學(xué)品魚類急性毒性分級試驗標(biāo)準(zhǔn)GB/T21281-2007(96 hLD50≤1 mg/L時為急性毒性Ⅰ級，1 mg/L＜96 hLD50≤10 mg/L為急性毒性Ⅱ級，10 mg/L＜96 hLD50≤100 mg/L）[2]，復(fù)硝酚鈉在漁業(yè)生產(chǎn)中為急性毒性Ⅱ級， 在生產(chǎn)上使用應(yīng)注意用量。

5.2 復(fù)硝酚鈉在黃河鯉生產(chǎn)中的使用注意事項

復(fù)硝酚鈉在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用， 主要是添加在改底、肥水產(chǎn)品中作為添加劑使用，該類產(chǎn)品不僅能夠促進漁產(chǎn)品細(xì)胞產(chǎn)生興奮反應(yīng),增強漁業(yè)產(chǎn)品的生理活性，加快細(xì)胞的新陳代謝，使產(chǎn)品的肉質(zhì)鮮嫩，營養(yǎng)成分增加，蛋白質(zhì)含量提高，能夠極大的提高水產(chǎn)品的品質(zhì)。 該產(chǎn)品的添加能夠促進漁產(chǎn)品對營養(yǎng)的吸收和提高自身免疫能力， 還可預(yù)防多種疾病[3]。但是在平時的使用過程中如果不能很好的把握用量而超出使用標(biāo)準(zhǔn)，不僅會污染水體，還會對水生生物造成傷害，不利于生產(chǎn)，本研究所得復(fù)硝酚鈉對黃河鯉的安全濃度為3.1 mg/L，因此，復(fù)硝酚鈉在合適的濃度下對黃河鯉是安全的， 但是在生產(chǎn)的過程中為了提高經(jīng)濟效益還是要合理用藥。