林 偉， 邵子瀚， 劉巧凌＊

（1.信陽農林學院， 河南信陽 464000； 2.新縣水產技術推廣站， 河南洛陽 464000）

復硝酚鈉作為一種強力細胞賦活劑， 被廣泛用于農業(yè)生產的糧食作物、經濟作物、蔬菜、瓜果、果樹、油料作物以及花卉等；由于它具有效率高、殘留少、使用濃度范圍廣、毒性低等優(yōu)點，復硝酚鈉還應用畜牧上，在提高肉、蛋、毛、皮產量和質量的同時，還能增強動物的免疫力，并預防多種疾病。 在水產上復硝酚鈉主要用于肥水產品或飼料之中， 可以起到改善水質，降低養(yǎng)殖成本以及預防疾病的作用。 但復硝酚鈉對不同的養(yǎng)殖動物毒性大小存在著較大差異，若按同等濃度應用于實際生產，有極大可能會造成養(yǎng)殖動物的死亡。 因此，為了生產中復硝酚鈉的規(guī)范使用，我們需要研究復硝酚鈉對黃河鯉的毒性。

1 試驗時間、地點及條件

試驗時間為2019年10月， 地點在信陽農林學院水產學院水產動物病害學實驗室， 用水為循環(huán)曝氣48 h的自來水。 水質指標為：溫度12～13 ℃，總硬度3.8，堿度1.47 mmol/L ，pH值6.9～7.6。

2 材料

2.1 試驗動物

試驗用黃河鯉來自滎陽某黃河鯉養(yǎng)殖場， 平均規(guī)格為：體長為（16±1.5） cm，體重為（110±20）g。黃河鯉運回后放于循環(huán)爆氧池中吊水5 d， 選出210尾相同規(guī)格、 身體健壯、 體表無明顯損傷的個體進行試驗。

2.2 器材

水族箱（36 cm×25 cm×40 cm），由閩江實業(yè)集團有限公司生產； 玻璃棒、 吸耳球、 量筒 （50 mL、500 mL）、移液管、容量瓶（1000 mL）、溫度計、pH測試儀等， 均由上海生工生物工程有限公司鄭州分公司提供。

2.3 試劑

復硝酚鈉，購于鄭州銀?；び邢薰?。

3 方法

3.1 步驟

本試驗采用靜水生物實驗法[1]。 試驗開始前查閱大量的關于復硝酚鈉對動物及水產動物的急性毒性研究文獻， 又根據(jù)該試驗的特點預估出預試驗濃度范圍。 通過預試結果得出了正式試驗的濃度范圍，以此為依據(jù)，進行黃河鯉的急性毒性試驗。 水族箱體積為20 L，水體溫度為12～13 ℃，以無復硝酚鈉添加組為對照， 根據(jù)預試驗得出復硝酚鈉對黃河鯉最高半致死濃度為39 mg/L，最低半致死濃度為16 mg/L。 據(jù)此濃度范圍等對數(shù)間距設置濃度梯度分別為：16 mg/L，19 mg/L，23 mg/L，27 mg/L，33 mg/L，39 mg/L，共設立21組，其中每個濃度梯度有3個平行對照組以及三個無藥添加組為對照組。 每組放入吊水后的黃河鯉10尾，按照靜水生物實驗法要求進行毒性實驗，用藥后要注意觀察黃河鯉的活動狀況， 對死亡的個體要及時撈出， 防止腐爛影響水質，96 h內每間隔24 h記錄1次死亡率。

3.2 死魚的判斷標準

魚中毒死亡的標準是魚呼吸停止并對外界刺激無反應，即當試驗魚中毒后鰓蓋完全停止活動，對外物（如玻璃棒或鑷子）刺激30 s內沒有產生反應即確定為死亡[2]。

3.3 數(shù)據(jù)的處理

采用改良寇氏法計算半致死濃度（LC50）[2]。

式中：Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)值，i為相鄰兩組劑量對數(shù)值之差，P為各組動物的死亡率，∑p為各組動物死亡率之和[2]。

4 結果與分析

4.1 不同時間和濃度的死亡情況

不同濃度復硝酚鈉組黃河鯉死亡情況詳情見表1。

表1 不同濃度組黃河鯉不同時間死亡數(shù)量（n=10）

4.2 不同濃度組在不同時間段的半致死濃度和安全濃度

根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，用公式（1）和公式（2）計算各時間段的半致死濃度和安全濃度。 結果見表2。

表2 復硝酚鈉對黃河鯉在24 h、48 h、72 h、92 h半致死濃度與安全濃度結果mg·L-1

4.3 急性中毒反應

黃河鯉在不同濃度的復硝酚鈉中表現(xiàn)的中毒反應各有不同。 在放入復硝酚鈉10 min內黃河鯉顯得有些許不安，有四處游竄的現(xiàn)象，高濃度組（39 mg/L）的黃河鯉大概在1h時，魚體反應劇烈，出現(xiàn)極速躥游，上浮，停游，繼而又沉在水底停止游動的現(xiàn)象，而對照組黃河鯉游動正常。 隨著實驗不斷進行，高濃度的魚對外界刺激反應非常遲鈍， 個別甚至失去知覺進而陸續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象， 其他組的魚死亡率都有顯著增加，而高濃度組（39 mg/L）的魚在24 h時全部死亡。 中毒個體體表粘液分泌較多，有的漂浮在水面，有的平躺在缸底，有的腹部朝上，有的魚體變硬，大部分都有粘液增加的現(xiàn)象出現(xiàn)。

5 討論

5.1 復硝酚鈉對黃河鯉的毒性強度

結果表明， 復硝酚鈉對黃河鯉的安全濃度為3.1 mg/L，復硝酚鈉對黃河鯉24 h、48 h、72 h、96 h的半致死濃度都為5.9 mg/L。參照我國危險化學品魚類急性毒性分級試驗標準GB/T21281-2007(96 hLD50≤1 mg/L時為急性毒性Ⅰ級，1 mg/L＜96 hLD50≤10 mg/L為急性毒性Ⅱ級，10 mg/L＜96 hLD50≤100 mg/L）[2]，復硝酚鈉在漁業(yè)生產中為急性毒性Ⅱ級， 在生產上使用應注意用量。

5.2 復硝酚鈉在黃河鯉生產中的使用注意事項

復硝酚鈉在水產動物養(yǎng)殖過程中的應用， 主要是添加在改底、肥水產品中作為添加劑使用，該類產品不僅能夠促進漁產品細胞產生興奮反應,增強漁業(yè)產品的生理活性，加快細胞的新陳代謝，使產品的肉質鮮嫩，營養(yǎng)成分增加，蛋白質含量提高，能夠極大的提高水產品的品質。 該產品的添加能夠促進漁產品對營養(yǎng)的吸收和提高自身免疫能力， 還可預防多種疾病[3]。但是在平時的使用過程中如果不能很好的把握用量而超出使用標準，不僅會污染水體，還會對水生生物造成傷害，不利于生產，本研究所得復硝酚鈉對黃河鯉的安全濃度為3.1 mg/L，因此，復硝酚鈉在合適的濃度下對黃河鯉是安全的， 但是在生產的過程中為了提高經濟效益還是要合理用藥。