(1.北京動物園，北京 100044；2.圈養(yǎng)野生動物技術(shù)北京市重點實驗室，北京 100044)

0 引言

在野生動物飼養(yǎng)管理工作中，疾病防治工作是其重要的組成部分。近年來，隨著國內(nèi)圈養(yǎng)野生動物數(shù)量的增加以及野生動物診療工作的深入，禽痛風(fēng)發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的跡象[1]。然而由于專業(yè)的野生動物病理學(xué)診斷技術(shù)的匱乏，對于珍稀野生動物來說，如何快速進(jìn)行痛風(fēng)確診，成為了現(xiàn)階段需要關(guān)注的問題。

北京動物園獸醫(yī)院曾接收1例死亡大天鵝樣本，臨床初步診斷為痛風(fēng)死亡。后經(jīng)病理學(xué)診斷確診為禽痛風(fēng)。本文以此為例，從組織病理學(xué)角度對該病例進(jìn)行探討，以期為今后珍稀野生動物痛風(fēng)病的診斷提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 病料

北京動物園飼養(yǎng)大天鵝，編號5Q623，于2017年10月30日早上發(fā)現(xiàn)死亡，后及時送至北京動物園獸醫(yī)院進(jìn)行死后診斷。

1.2 試驗方法

1.2.1 病理樣本采集

剖檢后取心、肝、腎、腸、胰腺組織，迅速投入10%的福爾馬林液，進(jìn)行病理組織切片前處理。

1.2.2 H.E.染色

石蠟切片分別經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟5 min，之后浸入無水乙醇/二甲苯(1：1)混合液中5 min，依次經(jīng)無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復(fù)水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍(lán)15 min，再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌3次，再經(jīng)無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各透明5 min，最后用中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學(xué)顯微鏡下觀察大天鵝組織病理學(xué)變化情況。

2 結(jié)果

2.1 大天鵝臨床剖檢觀察結(jié)果

大天鵝膘情良好，被毛整潔，剖檢腹腔可見大量灰白色粉末狀物質(zhì)附著于肝(見圖1A)、腸系膜(見圖1B)表面；腎臟腫大，色澤變淡，輕微出血，表面呈白褐色花紋，手觸硬實(見圖1C)；腸黏膜水腫，出血(見圖1D)；心肌出血，心外膜附著灰白色粉末狀物質(zhì)(見圖1E)；胰腺點狀出血，表面附著灰白色粉末狀物質(zhì)(見圖1F)。

圖1 大天鵝臨床剖檢觀察圖

2.2 大天鵝組織病理診斷結(jié)果

腸道：腸道組織結(jié)構(gòu)松散，絨毛層脫落較為嚴(yán)重，基層水腫，腸腺組織腫大，藍(lán)染，部分腸腺脫落；殘存的絨毛中大量紅細(xì)胞聚集，腸絨毛出血嚴(yán)重，大量紅細(xì)胞聚集在腸絨毛上皮細(xì)胞間隙，炎性粒細(xì)胞浸潤，腸絨毛上皮細(xì)胞水腫明顯如圖2A所示。

胰腺：胰腺組織結(jié)構(gòu)基本完整，胰腺泡間可見多量紅細(xì)胞；部分區(qū)域可見胰腺泡存在淡粉染無結(jié)構(gòu)絮狀物；胰腺泡內(nèi)糖原顆粒增多，胰腺泡排列紊亂如圖2B所示。

腎：腎臟組織大面積壞死，壞死組織被結(jié)締組織替代；集合管上皮細(xì)胞壞死、脫落明顯，集合管僅存輪廓；腎小囊-腎小球高度扭曲，失去原有形態(tài)，腎小囊擴張，囊內(nèi)可見多量脫落的上皮細(xì)胞，腎小球壞死、結(jié)締組織增生如圖2C所示。

心：心肌結(jié)構(gòu)松散，心肌大面積出血，心肌間可見淡粉染無結(jié)構(gòu)絮狀物；心肌細(xì)胞顆粒變性；絮狀物中可見淋巴細(xì)胞如圖2D所示。

肝：肝組織大面積壞死，壞死區(qū)域可見大量淡粉染無結(jié)構(gòu)絮狀物，未壞死區(qū)域肝細(xì)胞排列紊亂，同時肝組織出血明顯；殘存肝細(xì)胞發(fā)生不同程度水泡樣變性，壞死的肝細(xì)胞僅存細(xì)胞輪廓如圖2E所示。

對肝組織進(jìn)行Masson染色(三色，膠原纖維藍(lán)色、組織細(xì)胞紅色、細(xì)胞核黑色)，染色后可見：肝組織HE染色中無結(jié)構(gòu)絮狀物為纖維結(jié)締組織；肝細(xì)胞Masson染色為紅色，表明肝組織發(fā)生大面積纖維化，肝組織發(fā)生纖維化表現(xiàn)如圖2F所示。

圖2 大天鵝病理學(xué)觀察圖

3 診斷

經(jīng)臨床剖檢與組織病理學(xué)診斷，大天鵝患有痛風(fēng)，表現(xiàn)為肝、腎大面積壞死，纖維化顯著；出血性卡他性腸炎；心肌出血、壞死；胰腺水腫、出血，最后引起死亡。

4 討論

痛風(fēng)(Gout)，也稱之為尿酸鹽沉癥，通常指血液中尿酸濃度升高，以尿酸鹽(鈉)的形式附著于體內(nèi)器官組織表面而引起的疾病[2]。臨床表現(xiàn)上，尿酸鹽常附著于腎臟、肝臟、腸道等內(nèi)臟器官的漿膜上，以及關(guān)節(jié)間隙、腱鞘、軟骨等部位。在禽痛風(fēng)疾病中，若尿酸鹽大量沉著于趾關(guān)節(jié)，可形成痛風(fēng)石(Tophi)[3]。

關(guān)于痛風(fēng)發(fā)生的原因和機理現(xiàn)階段不完全清楚，在家禽養(yǎng)殖業(yè)，禽痛風(fēng)的發(fā)生原因傾向于飼料核蛋白含量過多。其發(fā)病機理為：禽飼料中添加了魚粉、肉粉等高蛋白飼料，其核蛋白含量豐富，核蛋白在體內(nèi)水解后生成蛋白質(zhì)和核酸。核酸進(jìn)一步分解為戊糖、嘌呤和嘧啶類堿性化合物。嘌呤類化合物在體內(nèi)氧化，最后形成尿酸。而尿酸在禽血液中蓄積過多，會以結(jié)晶的方式沉積在內(nèi)臟器官或關(guān)節(jié)內(nèi)，從而形成痛風(fēng)[4-5]。

對于動物園圈養(yǎng)野生動物，由于其飼料比例規(guī)范、合理，除其他致病因素外，飼養(yǎng)導(dǎo)致痛風(fēng)發(fā)生的概率極低。而游客在園內(nèi)游玩過程中對動物進(jìn)行不文明投喂現(xiàn)象屢禁不止，根據(jù)園

內(nèi)現(xiàn)場調(diào)研，發(fā)現(xiàn)游客在不文明投喂過程中以餅干、面包、薯片居多，而這些零食中多富含高蛋白，因此動物園內(nèi)游客的不文明投喂與禽類痛風(fēng)的發(fā)生有直接的關(guān)系。除痛風(fēng)外，游人投喂導(dǎo)致的動物患病、致死情況也時有發(fā)生，這一情況應(yīng)該引起有關(guān)部門的重視。

5 結(jié)論

本研究通過臨床診斷與結(jié)合病理學(xué)觀察相結(jié)合的方法，對圈養(yǎng)大天鵝進(jìn)行死后診斷，最終確診為痛風(fēng)。此病例的完成，為動物園提供了對游客不文明投喂行為進(jìn)行勸導(dǎo)、教育的實際案例的同時，為今后野生動物相關(guān)疾病的病理學(xué)診斷提供了較為可靠的基礎(chǔ)資料。