徐小衛(wèi),董利陽,鄭婷婷,劉佳夢,張珊,高學(xué)榮,毛朝明

(江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科,江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

2021年全球癌癥數(shù)據(jù)報(bào)告顯示,結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是第3位最常見的惡性腫瘤,在惡性腫瘤死亡中位居第3[1]。Ⅰ-Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的整體生存率約為90%,Ⅲ期約為71%,Ⅳ期為14%[2],顯然,早期診斷對改善患者預(yù)后具有重要意義。結(jié)腸鏡檢查和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)測定為結(jié)直腸癌輔助診斷的常用手段,然而分別存在侵襲性和低靈敏度的弊端[3-4]。探尋新型無創(chuàng)、高效的結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物尤為迫切。研究發(fā)現(xiàn),趨化因子、細(xì)胞因子等在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用,被認(rèn)為是具有潛力的腫瘤標(biāo)志物[5-6]。嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白2(eosinophil chemotactic protein 2,eotaxin-2,又稱CCL24)是一類CC家族的小分子趨化因子,在結(jié)直腸癌病變組織中高表達(dá),其可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[7]。目前,關(guān)于eotaxin-2在結(jié)直腸癌血清中的水平及其在結(jié)直腸癌診斷中的價(jià)值尚不完全清楚。本研究擬檢測結(jié)直腸癌患者血清中eotaxin-2的含量,并評價(jià)其在結(jié)直腸癌中的臨床應(yīng)用價(jià)值,以期發(fā)現(xiàn)診斷結(jié)直腸癌的新型腫瘤標(biāo)志物。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2020年1月至2021年2月在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸外科接受治療的50例結(jié)直腸癌患者為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn):① 病理診斷證實(shí)為結(jié)直腸癌；② 患者均系首次診斷,首次手術(shù)治療,且術(shù)前無放化療、靶向治療及生物治療等抗癌治療史。排除標(biāo)準(zhǔn):① 合并其他腫瘤者；② 有精神障礙、高血壓、免疫性疾病、器官衰竭以及合并其他心臟、肝臟、腎臟等功能不全者。結(jié)直腸癌的臨床分期(TNM)參考國際抗癌聯(lián)盟(UICC)第八版結(jié)直腸癌分期標(biāo)準(zhǔn)。

收集同期本院體檢健康者40例作為對照組。本研究通過江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),各研究對象均知情同意。

1.2 血清標(biāo)本采集與處理

結(jié)直腸癌患者于手術(shù)前采集靜脈血標(biāo)本,體檢健康者于體檢時(shí)采集靜脈血標(biāo)本。將采集的靜脈血標(biāo)本(5 mL)置于含分離膠促凝劑的真空采血管中,1 000×g離心10 min,吸取上層血清置于1.5 mL EP管,-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 血清e(cuò)otaxin-2檢測

人eotaxin-2 ELISA試劑盒購自北京索萊寶公司(貨號SEKH-0063),按試劑盒說明書操作,每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或檢測標(biāo)本,封板后置37 ℃、90 min孵育；拍板和洗板4次；每孔中加入100 μL生物素化抗體工作液,封板后置37 ℃、60 min孵育；拍板和洗板4次；每孔加入100 μL酶結(jié)合物工作液,封板后置37 ℃、30 min孵育；拍板和洗板5次；每孔加入100 μL顯色底物,封板后于37 ℃避光顯色15 min；每孔加入50 μL終止液；5 min內(nèi)使用酶標(biāo)儀(美國公司BioTek公司)讀取450 nm波長下的光密度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算各標(biāo)本eotaxin-2濃度(pg/mL)。

1.4 血清CEA檢測

CEA檢測采用化學(xué)發(fā)光法(雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀),試劑盒購自愛爾蘭雅培公司,批號26040FN00。參照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作,濃度單位為ng/mL。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)直腸癌組與對照組性別、年齡構(gòu)成比較采用χ2檢驗(yàn)。血清e(cuò)otaxin-2含量為非正態(tài)分布,以中位數(shù)(四分位數(shù))表示,組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。受試者工作特征(ROC)曲線評價(jià)血清e(cuò)otaxin-2對結(jié)直腸癌的篩查價(jià)值,通過約登指數(shù)(敏感性+特異性-1)確定截?cái)嘀?cut-off),曲線下面積(AUC)≤0.5為無診斷價(jià)值,0.5

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組與對照組一般情況比較

結(jié)直腸癌組男34例,女16例,年齡<60歲患者17例,≥60歲33例；對照組男23例,女17例,年齡<60歲11例,≥60歲29例,兩組性別(χ2=1.055,P=0.304),年齡構(gòu)成(χ2=0.438,P=0.508)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 結(jié)直腸癌患者血清e(cuò)otaxin-2含量

結(jié)直腸癌患者與對照組血清e(cuò)otaxin-2含量分別為220.8(189.7,257.1)pg/mL和169.9(136.1,195.7)pg/mL,結(jié)直腸癌組明顯高于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-3.93,P<0.01)。見圖1。

圖1 結(jié)直腸癌患者血清中eotaxin-2含量

2.3 血清e(cuò)otaxin-2含量與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

血清e(cuò)otaxin-2的含量與結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)(P均<0.01),而與性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑均無明顯關(guān)系(P均>0.05)。見表1。

表1 血清e(cuò)otaxin-2含量與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.4 血清e(cuò)otaxin-2診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值

血清中eotaxin-2篩查結(jié)直腸癌的AUC為0.742(95%CI:0.639～0.845,P<0.01),當(dāng)截?cái)嘀禐?96.73 pg/mL時(shí),敏感性為68.0%,特異性為77.5%。血清CEA篩查結(jié)直腸癌的AUC為0.636(95%CI:0.520～0.751,P=0.027),當(dāng)截?cái)嘀等?.15 ng/mL時(shí),敏感性為52.0%,特異性為80.0%。血清e(cuò)otaxin-2與CEA聯(lián)合篩查結(jié)直腸癌時(shí)AUC為0.742(95%CI:0.640～0.843,P<0.01),敏感性為68.0%,特異性為75.0%。見圖2。

圖2 血清e(cuò)otaxin-2診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線

3 討論

結(jié)直腸癌是目前全世界范圍內(nèi)發(fā)病率與致死率均居前列的惡性腫瘤,其起病隱匿,多數(shù)患者確診時(shí)已屬中晚期,喪失最佳手術(shù)時(shí)機(jī),患者預(yù)后較差?，F(xiàn)階段仍缺乏結(jié)直腸癌早期診斷的腫瘤相關(guān)指標(biāo),CEA等腫瘤標(biāo)志物雖然能夠在結(jié)直腸癌的診斷過程中提供參考,但診斷靈敏度較低。本研究檢測了結(jié)直腸癌患者血清e(cuò)otaxin-2含量,在一定程度上為結(jié)直腸癌提供可參考的新型血清學(xué)標(biāo)志物。

Eotaxin-2屬于趨化因子CC類,是趨化因子受體CCR3的主要配體之一,其主要由纖維、上皮和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生[8]。Eotaxin-2能促進(jìn)嗜酸粒細(xì)胞遷移,被證實(shí)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘等疾病發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用[9-10]。近年來,eotaxin-2被報(bào)道參與了包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的腫瘤發(fā)生過程[11]。Cheadle等[12]研究顯示eotaxin-2在結(jié)直腸癌原發(fā)性腫瘤和肝轉(zhuǎn)移性腫瘤中的表達(dá)水平明顯高于鄰近的非腫瘤組織。Cho等[13]研究結(jié)果表明,伴隨結(jié)直腸癌病情的加劇,病灶基質(zhì)細(xì)胞中eotaxin-2表達(dá)增加,而腺細(xì)胞中eotaxin-2表達(dá)降低,嗜酸粒細(xì)胞在腫瘤病變組織的數(shù)量呈減少趨勢。GEPIA數(shù)據(jù)庫(http://gepia.cancer-pku.cn/detail.php?gene=CCL24)分析發(fā)現(xiàn),eotaxin-2在結(jié)直腸癌病變組織中表達(dá)上調(diào),且與其他類型腫瘤相比,exotain-2在結(jié)直腸癌中的豐度最高[14]。以上實(shí)驗(yàn)及在線分析主要為結(jié)直腸癌組織水平的探究,考慮到血清較組織取材方便,血清e(cuò)otaxin-2較組織eotaxin-2檢測簡單快捷,故本研究對血清e(cuò)otaxin-2與結(jié)直腸癌的關(guān)系進(jìn)行探討。結(jié)果顯示結(jié)直腸癌患者血清中eotaxin-2含量顯著上調(diào),其水平與結(jié)直腸癌的淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān),這提示血清e(cuò)otaxin-2可能成為預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的指標(biāo)。Olsen等[15]研究亦表明血漿高水平的eotaxin-2與結(jié)直腸癌特異性死亡率呈顯著正相關(guān)。

Gong等[16]發(fā)現(xiàn),相對于健康者,鼻咽癌患者血清中eotaxin-2含量顯著升高,據(jù)此推測血清e(cuò)otaxin-2具有診斷鼻咽癌的可能。Wang等[17]研究表明,血清高水平的eotaxin-2對腎透明細(xì)胞癌具有篩查效能,其診斷腎透明細(xì)胞癌的AUC為0.844,最優(yōu)截?cái)嘀禐?00 pg/mL。本研究結(jié)果表明,血清e(cuò)otaxin-2診斷結(jié)直腸癌的AUC為0.742,最優(yōu)截?cái)嘀禐?96.73 pg/mL。這些研究提示,eoxtain-2可能為一種新型的廣譜性腫瘤標(biāo)志物。本研究中,血清e(cuò)otaxin-2診斷結(jié)直腸癌的AUC(0.742)和敏感性(68.0%)均高于CEA的0.636和52.0%,而特異性(77.5%)略低于CEA的80.0%,提示血清e(cuò)otaxin-2對結(jié)直腸癌的整體篩查效能優(yōu)于CEA,血清e(cuò)otaxin-2可作為較理想的結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物。需要注意的是,相較于eotaxin-2單一檢測,eotaxin-2和CEA聯(lián)合檢測并未提升篩查結(jié)直腸癌的特異性。

綜上所述,結(jié)直腸癌患者血清e(cuò)oxtain-2含量顯著上升,檢測血清e(cuò)oxtain-2水平對結(jié)直腸癌患者病情及診斷具有一定的指導(dǎo)價(jià)值。但由于本研究樣本量較小,仍需要進(jìn)行多中心、大規(guī)模臨床研究來驗(yàn)證eotaxin-2的有效性。