彭祖想 嚴林 衛(wèi)力博 翟浩杰 高欣 王偉 任同軍 韓雨哲

摘 要：為研究飼料中添加雞腸粉對鯉（Cyprinus carpio）抗氧化能力和部分免疫酶活力的影響，配制了4組等氮等脂飼料和1組雞腸粉含量為100%的飼料，標記為D1、D2、D3、D4、D5。雞腸粉添加量分別為0%（D1）、5%（D2）、10%（D3）、15%（D4）和100%（D5）。選取初始體重約為57 g的鯉150尾，隨機分為5組，進行為期8周的養(yǎng)殖試驗。結(jié)果表明：飼料中添加雞腸粉能夠提高鯉肝臟總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）和過氧化氫酶（CAT）活力，且呈現(xiàn)先增加后降低趨勢。D3、D4、D5組T-AOC和CAT活性顯著高于D1和D2組（P<0.05）;D2、D3、D4、D5組T-SOD活力顯著高于D1組（P<0.05）;D2、D3和D4組丙二醛（MDA）含量顯著低于D1和D5組（P<0.05）。隨著飼料中雞腸粉添加水平的升高，鯉肝臟酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）和溶菌酶（LZM）活力呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢。D3、D4和D5組ACP活力顯著高于D1、D2組（P<0.05），D3和D4組AKP活力顯著高于D1、D2和D5組（P<0.05）;D4組LZM活力顯著高于D1、D2組（P<0.05），鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力均在D4組達到峰值。研究表明，飼料中添加雞腸粉能夠提高鯉肝臟抗氧化能力和部分免疫酶活力，添加量為15%時效果最好。

關(guān)鍵詞：雞腸粉;鯉（Cyprinus carpio）;抗氧化能力;免疫酶活力

家禽副產(chǎn)品粉（poultry by-product meal，PBM）是家禽屠宰之后的下腳料，經(jīng)沖洗、蒸煮、干燥、提煉油脂和粉碎等工序后得到的粉狀產(chǎn)品，在營養(yǎng)組成上與魚粉相似且價格低廉，與植物性蛋白源相比不含抗營養(yǎng)因子，因此被認作是一種優(yōu)質(zhì)的動物蛋白[1]。家禽副產(chǎn)品粉粗蛋白含量為58%～65%，粗脂肪含量在12%～15%之間，其質(zhì)量通常取決于原料質(zhì)量和加工工藝[2]。已有研究表明，家禽副產(chǎn)品粉可作為魚類日糧中蛋白質(zhì)來源并能不同程度地替代魚粉，如黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）[3]、草魚（Ctenopharyngodon idella）[4]、鲇（Clarias batrachus）[5]、駝背鱸（Cromileptes altivelis）[6]、點帶石斑魚（Epinephelus coioides）[7]、銀鯽（Carassius auratus gibelio）[8]等。雞腸粉是家禽副產(chǎn)品粉的一種，是以新鮮雞腸為原料，經(jīng)沖洗、蒸煮、噴霧干燥和粉碎等工序加工而成的新型優(yōu)質(zhì)飼料蛋白源。優(yōu)質(zhì)的雞腸粉粗蛋白和粗脂肪含量與魚粉接近，部分氨基酸含量甚至高于魚粉，從營養(yǎng)成分及氨基酸組成分析，雞腸粉是一種很有潛力的優(yōu)質(zhì)動物蛋白源[4]，但目前國內(nèi)尚未有關(guān)于雞腸粉應(yīng)用于魚類的相關(guān)報道。

本試驗基于鯉營養(yǎng)研究基礎(chǔ)，探究飼料中添加雞腸粉對鯉抗氧化及部分免疫酶活力的影響，以期為雞腸粉在淡水魚飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料方法

1.1 試驗設(shè)計和管理

養(yǎng)殖試驗在大連海洋大學(xué)遼寧省北方魚類應(yīng)用生物學(xué)及增養(yǎng)殖重點實驗室循環(huán)水池內(nèi)進行，試驗所用鯉購于遼寧省丹東市景波養(yǎng)殖場。選取當年繁殖的初始體重為57 g左右的鯉200尾，于4.3 m×1.5 m×1.2 m的水泥池中暫養(yǎng)一周以適應(yīng)試驗環(huán)境，暫養(yǎng)期間投喂對照組飼料。暫養(yǎng)后選取體重大小相近、活力較好、體表無傷的鯉150尾，隨機分為5組，每組3個平行，每個平行10尾，置于15個規(guī)格為1.3 m×0.8 m×0.7 m的聚乙烯網(wǎng)箱中。以曝氣24 h以上的自來水作為試驗用水，采用空氣壓縮泵和氣石進行24 h 充氣。每日08：00和16：00表觀飽食投喂兩次，每日吸底1次、換水1次，換水量約為1/2。試驗期間水溫（26.0±1.0）℃，溶氧為（6.0±0.5）mg/L，pH值為7.2±0.5，養(yǎng)殖周期為8周。

1.2 試驗飼料

雞腸粉由遼寧省鞍山裕豐飼料有限公司提供，含粗蛋白65.47%、粗脂肪14.80%。試驗飼料原料購自于大連貝西商貿(mào)有限公司。試驗飼料配方見表1，以魚粉、雞腸粉、豆粕等為主要蛋白源，以豆油為主要脂肪源，配制4組等氮等脂飼料和1組雞腸粉含量為100%的飼料，分別標記為D1、D2、D3、D4、D5。雞腸粉添加量分別為0%（D1）、5%（D2）、10%（D3）、15%（D4）和100%（D5），飼料原料過80目篩，混合均勻后經(jīng)制粒機制成2 mm的顆粒飼料，放入42 ℃烘箱中，烘干至水分含量為10%，放入自封袋中于-20 ℃冰箱中保存。

1.3 樣品采集及指標測定

取樣前，試驗魚停食 24 h，使用50 mg/L的MS-222溶液麻醉，于冰上進行無菌解剖。每個平行6尾魚全部取肝臟同組混樣裝管，樣品于-80 ℃保存待測。肝臟樣品注入質(zhì)量體積比1∶9的生理鹽水，經(jīng)4 ℃、4 000 r/min、10 min高速離心后，取上清液，用于測定肝臟抗氧化指標和部分免疫酶活力的測定。

總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）活力、丙二醛（MDA）含量、肝臟酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）和溶菌酶活力（LZM）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準誤（mean ± standard error，SE）表示，采用GraphPad Prism 軟件作圖，采用 SPSS 25.0 軟件（IBM，USA）進行單因素方差分析（one-way ANOVA），并用 Duncan’s 進行多重比較來分析各處理組間的顯著性，設(shè)置P<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼料中添加雞腸粉對鯉肝臟抗氧化指標的影響

由表2可知飼料中添加雞腸粉能夠提高鯉肝臟T-AOC、T-SOD和CAT活性，且呈現(xiàn)先增加后降低趨勢。D3、D4、D5組T-AOC和CAT活性顯著高于D1和D2組（P<0.05）;D2、D3、D4、D5組T-SOD活力顯著高于D1組（P<0.05）;D2、D3和D4組MDA含量顯著低于D1和D5組（P<0.05）。

2.2 飼料中添加雞腸粉對鯉肝臟免疫酶活力的影響

飼料中雞腸粉添加水平對鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力有顯著影響（P<0.05），隨著飼料中雞腸粉添加水平的升高，鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢。D3、D4和D5組ACP活力顯著高于D1和D2組（P<0.05），D3和D4組AKP活力顯著高于D1、D2和D5組（P<0.05），D4組LZM活力顯著高于D1、D2組（P<0.05），鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力均在D4組達到峰值。見圖1—圖3。

柱形圖上方標有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異（P<0.05），標有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異（P>0.05）。下同。圖1 飼料中添加雞腸粉對鯉肝臟ACP活力的影響

3 討論與結(jié)論

3.1 飼料中雞腸粉添加水平對鯉肝臟抗氧化指標的影響

抗氧化系統(tǒng)在生物體內(nèi)普遍存在，是機體防御超氧基損傷的主要防御性系統(tǒng)[10]。機體在正常代謝時會產(chǎn)生大量的氧化自由基，這些自由基會對機體產(chǎn)生損傷，誘發(fā)多種慢性疾病，但抗氧化酶防御系統(tǒng)能夠清除這些自由基?？寡趸阜烙到y(tǒng)主要包括SOD、CAT和GSH等，機體組織損傷程度就是自由基與抗氧化保護防御平衡的結(jié)果[11]。總抗氧化能力是用于評價動物機體抗氧化系統(tǒng)功能的綜合性指標，SOD和CAT是衡量機體抗氧化能力的重要指標，MDA是脂質(zhì)過氧化作用的分解產(chǎn)物，可以間接反映細胞損傷程度[12]。目前有關(guān)家禽副產(chǎn)品粉對水產(chǎn)動物抗氧化性能的影響主要集中在飼料蛋白源替代方面，賈倩[13]研究結(jié)果表明，隨著禽肉骨粉替代魚粉比例增加，大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝臟SOD活力和CAT活力均呈上升趨勢，在替代比例為50%時達到峰值，與對照組差異顯著。Siddik等[14]在尖吻鱸（Lates calcarifer）基礎(chǔ)日糧中添加發(fā)酵后的PBM和魚蛋白水解物混合物，發(fā)現(xiàn)可以顯著提高尖吻鱸谷胱甘肽過氧化物酶活力。但PBM替代魚粉對水產(chǎn)動物抗氧化性的研究結(jié)果并不一致，黃慶文等[15]發(fā)現(xiàn)，不同比例的PBM替代魚粉對草魚T-SOD活力、MDA水平和T-AOC無顯著影響。易新文等[16]發(fā)現(xiàn)，隨著PBM替代魚粉比例的增加，卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）肝臟中SOD和CAT活力呈下降趨勢，卵形鯧鲹的抗氧化能力降低。羅嘉翔等[3]研究表明，飼料中適量的雞肉粉替代魚粉能夠提高黃顙魚的抗氧化酶活力，但過高的替代比例會導(dǎo)致機體脂肪氧化。本試驗研究結(jié)果表明，飼料中添加雞腸粉能夠提高鯉肝臟T-AOC、T-SOD和CAT活力，降低MDA含量，在飼料中雞腸粉添加水平為15%時（D4組），鯉肝臟T-AOC、T-SOD和CAT活力最高且均顯著高于對照組（P<0.05），MDA含量最低且顯著低于對照組（P<0.05）。在雞腸粉添加水平為100%（D5組）時鯉肝臟T-AOC、T-SOD和CAT活力也均顯著高于對照組（P<0.05），但顯著低于D4組。這表明飼料中添加5%～15%和100%雞腸粉均能夠提高鯉肝臟抗氧化能力，但以添加量為15%時效果最好。研究表明優(yōu)質(zhì)的PBM賴氨酸含量較高[17]，適宜的賴氨酸水平能夠提高水產(chǎn)動物的抗氧化性，而過高則會抑制[18]，這很有可能就是鯉肝臟T-AOC、T-SOD和CAT活力先增加后降低的原因。

3.2 飼料中雞腸粉添加水平對鯉肝臟免疫酶活力的影響

魚類的非特異性免疫系統(tǒng)在魚類抵抗病原入侵時發(fā)揮著極其重要的作用，AKP、ACP和LZM就是其中重要的抗菌蛋白，其活力是反映機體非特異性免疫力的重要指標[19]。Dawood等[20]發(fā)現(xiàn)在飼料添加5%、10%和15%經(jīng)發(fā)酵后的PBM能夠顯著提高鯉LZM活力;同樣的在尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）日糧中添加10%和20%的經(jīng)發(fā)酵后的PBM也能夠顯著提高魚體LZM活力和血清中l(wèi)gM水平[21]。本試驗研究結(jié)果表明飼料中雞腸粉添加水平對鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力有顯著影響，隨著飼料中雞腸粉添加水平的升高，鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢。有研究發(fā)現(xiàn)適量的賴氨酸能夠增強水產(chǎn)動物免疫力，過高則會抑制[22]。以上結(jié)果很可能也是由于賴氨酸的緣故，隨著雞腸粉添加量的增加，飼料中賴氨酸含量逐漸增加，增強了鯉肝臟免疫酶活力;雞腸粉添加量為100%時賴氨酸含量過高，反而起到了抑制作用。本試驗中D3、D4和D5組ACP活力顯著高于D1和D2組，D3和D4組AKP活力顯著高于D1、D2和D5組，D4組LZM活力顯著高于D1、D2組，鯉肝臟ACP、AKP和LZM活力均在雞腸粉添加量為15%（D4組）時達到峰值，說明飼料中添加雞腸粉可以增強鯉非特異性免疫能力，且15%的添加量效果最好。

本試驗結(jié)果表明，飼料中添加雞腸粉能夠提高鯉肝臟抗氧化能力和部分免疫酶活力，最適添加量為15%。

參考文獻：

[1] THOMPSON K R， METTS L S， MUZINIC L A， et al. Use of turkey meal as a replacement for menhaden fish meal in practical diets for sunshine bass grown in cages[J]. North American Journal of Aquaculture， 2007， 69（4）： 351-359.

[2] HILL J C， ALAM M S，WATANABE W O， et al. Replacement of menhaden fish meal by poultry by‐product meal in the diet of juvenile red porgy， Pagrus pagrus[J]. North American Journal of Aquaculture， 2019， 81（1）： 81-93.

[3] 羅嘉翔，黃文文，袁野，等.雞肉粉替代魚粉對黃顙魚幼魚生長性能、飼料利用、消化酶活性及抗氧化能力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報， 2017， 29（11）：3970-3979.

[4] TABINDA A B， BUTT A.Replacement of fish meal with poultry by-product meal （chicken intestine） as a protein source in grass carp fry diet[J]. Pakistan Journal of Zoology， 2012， 44（5）： 1373-1381.

[5] GIRI S S， SAHOO S K， MOHANTY S N. Replacement of by-catch fishmeal with dried chicken viscera meal in extruded feeds： effect on growth， nutrient utilisation and carcass composition of catfish Clarias batrachus （Linn.） fingerlings[J]. Aquaculture international， 2010， 18（4）： 539-544.

[6] SHAPAWI R， NG W K， MUSTAFA S. Replacement of fish meal with poultry by-product meal in diets formulated for the humpback grouper， Cromileptes altivelis[J].Aquaculture， 2007， 273（1）： 118-126.

[7] 付閏吉，紀文秀，王巖，等.利用畜禽加工副產(chǎn)品替代點帶石斑魚飼料中的魚粉[J].浙江大學(xué)學(xué)報：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版， 2011， 37（6）： 663-669.

[8] YANG Y，XIE S，CUI Y， et al.Partial and total replacement of fishmeal with poultry by-product meal in diets for gibel carp，Carassius auratus gibelio Bloch[J].Aquaculture research， 2006， 37（1）： 40-48.

[9] 石立冬，衛(wèi)力博，翟浩杰，等.不同蛋白源飼料中添加限制性氨基酸對紅鯽Carassius auratus生長、消化及免疫能力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志， 2021， 34（2）：56-64.

[10] 唐雪蓮，付京花，李志華，等.紫錐菊提取物對彭澤鯽生長和抗氧化反應(yīng)的影響[J].飼料工業(yè)，2012， 33（14）： 21-22.

[11] MACHLIN L J，BENDICH A.Free radical tissue damage： protective role of antioxidant nutrients[J].The FASEB journal， 1987， 1（6）： 441-445.

[12] LIN C C，LIANG J H.Effect of antioxidants on the oxidative stability of chicken breast meat in a dispersion system[J].Journal of Food Science， 2002， 67（2）： 530-533.

[13] 賈倩.禽肉骨粉和玉米蛋白粉替代魚粉對大菱鲆生長、生物學(xué)參數(shù)和腸道健康的影響[D].濟南：山東大學(xué)， 2020.

[14] SIDDIK M A B， CHAKLADER M R， FOYSAL M J， et al.Influence of fish protein hydrolysate produced from industrial residues on antioxidant activity， cytokine expression and gut microbial communities in juvenile barramundi Lates calcarifer[J].Fish & shellfish immunology，2020，97： 465-473.

[15] 黃文慶，黃燕華，米海峰，等.3種動物蛋白質(zhì)源替代魚粉對草魚生長性能、肌肉營養(yǎng)成分、消化酶活性、血清生化和抗氧化指標的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2019，31（5）：2187-2200.

[16] 易新文， 陳瑞愛， 徐家華.雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹生長、飼料利用和抗氧化力的影響[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版， 2019， 49（12）：17-24.

[17] DOZIER W A III，DALE N M，DOVE C R.Nutrient compostion of feed-grade and pet-food-grade poultry by-product meal[J].Journal of applied poultry research，2003，12（4）： 526-530.

[18] 李雪吟.賴氨酸對草魚腸道免疫和結(jié)構(gòu)屏障作用及其機制研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2017.

[19] 何偉聰，董曉慧，譚北平，等.益生菌對軍曹魚幼魚生長性能、消化酶和免疫酶活性的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（12）：3821-3830.

[20] DAWOOD M A O， MAGOUZ F I， ESSA M， et al.Impact of yeast fermented poultry by-product meal on growth， digestive enzyme activities， intestinal morphometry and immune response traits of common carp （Cyprinus carpio）[J]. Annals of Animal Science， 2020， 20（3）： 939-959.

[21] DAWOOD M A O，MAGOUZ F I，MANSOUR M，et al.Evaluation of yeast fermented poultry by-product meal in Nile tilapia （Oreochromis niloticus） feed： Effects on growth performance， digestive enzymes activity， innate immunity， and antioxidant capacity[J]. Frontiers in veterinary science， 2020， 6： 516.

[22] 李小軍.飼料賴氨酸和蛋氨酸對虎龍雜交斑幼魚生長、飼料利用、腸道形態(tài)學(xué)和免疫的影響[D].?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)， 2019.

Effect of dietary chicken intestine meal on antioxidative capability and immune enzyme activities of Cyprinus carpio

PENG Zuxiang1，YAN Lin1，WEI Libo1，ZHAI Haojie1，GAO Xin1，WANG Wei1，2，REN Tongjun1，HAN Yuzhe1，2

（1. College of Fisheries and Life Science， Dalian Ocean University， Dalian 116023， China;

2. Key Laboratory of Fish Applied Biology and Aquaculture in North China， Dalian Ocean University， Dalian 116023， China）

Abstract：An 8-week feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary chicken intestine meal on antioxidative capability and immune enzyme activities of the common carp Cyprinus carpio. Four groups of iso-nitrogenous and iso-fat feeds and one group of feeds with 100% chicken intestinal meal were prepared， labeled D1， D2， D3， D4 and D5， respectively. Chicken intestinal meal within these groups was added at 0%， 5%， 10%， 15% and 100%， respectively. A total of 150 Cyprinus carpio with an initial body weight of 57 g were randomly divided into 5 groups. The results showed that T-AOC， T-SOD and CAT activities of the carp liver increased when chicken intestinal meal was added to the diet， with a trend of increase first and then decrease. The addition of chicken intestinal meal to the diet could increase the T-AOC， T-SOD and CAT activities of the carp liver， and showed a trend of increase first and then decrease.The T-AOC and CAT activities were significantly higher in group D3， D4 and D5 than in group D1 and D2 （P<0.05） ，while T-SOD activities was significantly higher in group D2， D3， D4 and D5 than in group D1 （P<0.05） .The MDA contents of group D2， D3 and D4 were significantly lower than those of group D1 and D5 （P<0.05）.The ACP， AKP and LZM activities of the carp liver showed a tendency of increase first and then decrease with the increase of chicken intestinal meal in the diet.The ACP activities of group D3， D4 and D5 were significantly higher than those of group D1 and D2 （P<0.05）. AKP activities of group D3 and D4 were significantly higher than those of group D1， D2 and D5（P<0.05）. LZM activities were significantly higher in group D4 than in group D1 and D2（P<0.05）. The ACP， AKP and LZM activities of the carp liver all reached the peak in group D4. It was shown that the addition of chicken intestinal meal to the diet could improve the antioxidant capacity and some immune enzyme activity of the carp liver， and the best effect was achieved at the addition level of 15%.

Key words：chicken intestinal meal;Cyprinus carpio; antioxidative capability; immune enzyme activities

（收稿日期：2021-08-20;修回日期：2021-10-14）

基金項目：大連市青年科技之星（2019RQ137）;大連海洋大學(xué)“蔚藍英才”人才計劃項目。

作者簡介：彭祖想（1997-），男，在讀研究生，研究方向：水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學(xué)。E-mail： 2503422561@qq.com。

通信作者：韓雨哲（1984-），男，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學(xué)。E-mail： hanyuzhe @dlou.edu.cn。