王婷婷 李先文 馬琴國(guó) 張露

甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

斷腸草Gelsemium elegans Benth.是馬錢科Aristolochiaceae 胡蔓藤屬Gelsemium elegans Ben. 胡蔓藤的全株［3］。生于海拔500～2000 米的向陽(yáng)山坡、路邊草叢或灌叢中［3］。分布于廣西、廣東、云南、貴州、浙江、福建、湖南、海南等地，又稱鉤吻、爛腸草、苦吻、苦藥、麻醉藤、豬人參等［4］，具有祛風(fēng)、殺蟲止癢、消腫拔毒的功效［5］?，F(xiàn)代研究表明，斷腸草具有抗腫瘤［6-7］、鎮(zhèn)痛［8］、抗焦慮［9］、散瞳、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)造血等作用，特別在無(wú)成癮性鎮(zhèn)痛和抗腫瘤等方面具有明顯優(yōu)勢(shì)［10］。但斷腸草毒性較大，其治療量和中毒量非常接近，安全指數(shù)小，劑量不易控制，容易發(fā)生中毒反應(yīng)。斷腸草全株以根部毒素含量最高［11］，主要成分為鉤吻堿，其中鉤吻素子含量最高，鉤吻素己毒性最強(qiáng)［12］，屬神經(jīng)毒［4］。中毒后可引起暈眩，咽、腹劇痛，口吐白沫，瞳孔散大，下顎脫落，肌肉無(wú)力，心臟及呼吸衰竭而死亡［13］。本文采用性狀鑒定、顯微鑒定方法對(duì)斷腸草進(jìn)行生藥學(xué)研究，利用薄層色譜法、生物堿常規(guī)檢驗(yàn)方法對(duì)斷腸草進(jìn)行理化鑒別，為避免藥材的誤用、誤食提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料樣品采自貴州省龍里縣龍山鎮(zhèn)，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院生藥教研室周漢華教授鑒定該植物為馬錢科Aristolochiaceae 胡蔓藤屬Gelsemium elegans Bent.鉤吻。

1.2 儀器Olympus CX31 光學(xué)顯微鏡（上海通灝光電科技有限公司）、高速多功能粉碎機(jī)（FW200，北京科偉永興儀器有限公司）。

1.3 方法徒手切片法、粉末制片法、薄層色譜法、生物堿常規(guī)檢驗(yàn)法。

2 結(jié)果

2.1 性狀鑒別莖呈圓柱形，直徑1.2～2.1cm，外皮棕黃色至黃褐色，具深縱溝及橫裂隙。質(zhì)堅(jiān)，不易折斷，斷面不整齊，皮部深褐色，木部深黃色至棕黃色，具放射狀紋理，密布細(xì)孔，髓部深黃色，木質(zhì)部寬0.3～0.7cm，髓部寬0.15～0.17cm。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖橫切面顯微鑒別。橫切面呈類圓形或矩圓形，表皮細(xì)胞2～4 列，類圓形，皮層較窄，具有大量石細(xì)胞，單個(gè)或數(shù)個(gè)成群散在，纖維束外韌型；韌皮部具厚壁性的纖維狀石細(xì)胞散在；木質(zhì)部寬，細(xì)胞木化，主要由導(dǎo)管、木纖維和木薄壁細(xì)胞組成，導(dǎo)管單個(gè)或2 個(gè)以上徑向排列，射線寬5～6 列細(xì)胞；髓部較寬，薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶及簇晶。見(jiàn)圖1。

圖1 斷腸草的莖橫切面顯微圖

2.2.2 粉末顯微鑒別。粉末黃棕色。木纖維壁加厚，呈長(zhǎng)梭形，成束或單個(gè)散在，稍彎曲，直徑14.9～24.8μm，具大量人字形壁孔；石細(xì)胞淡黃色至深黃色，單個(gè)散在，短徑的石細(xì)胞長(zhǎng)方形、橢圓形、類三角形或不規(guī)則分枝狀；纖維狀石細(xì)胞長(zhǎng)梭形，一端或兩端鈍尖，長(zhǎng)210～723μm，直徑27～109μm，孔溝明顯，層紋明顯且密；韌皮纖維淡黃色，單個(gè)或成束散在，胞腔線形，直徑12～15μm；導(dǎo)管多為具緣紋孔、網(wǎng)紋，紋孔直徑2.5～4.9μm，偶見(jiàn)螺紋，直徑23～37μm；淀粉粒單粒，圓形、橢圓形、類三角形或類方形，無(wú)臍點(diǎn)或臍點(diǎn)點(diǎn)狀或裂縫狀，復(fù)粒由2～4 個(gè)分粒組成；草酸鈣簇晶晶瓣短且先端鈍尖，直徑4～35μm；方晶明顯，長(zhǎng)4.9～37.1μm。見(jiàn)圖2。

圖2 斷腸草的粉末顯微圖

2.3 理化鑒別

2.3.1 薄層色譜鑒別。取斷腸草藥材酒10μL，點(diǎn)于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠薄層板上，置于層析缸內(nèi)，以氯仿-甲醇（90 ∶10）為展開劑，展距90mm，開展后干燥10min。將展開后的薄層板直接置于365nm的熒光燈下，可見(jiàn)與薄層色譜法鑒別生物堿相關(guān)文獻(xiàn)［14］相對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

圖3 斷腸草薄層色譜鑒別圖

2.3.2 生物堿鑒別。①碘化鉍鉀反映。取斷腸草酒浸液5mL 置試管中，加入碘化鉍鉀2～3 滴，靜置12h 后，可見(jiàn)試管底出現(xiàn)黃色至橘紅色無(wú)定形沉淀。②碘-碘化鉀反映。取斷腸草酒浸液5mL 置試管中，加入碘-碘化鉀2～3 滴，靜置12h 后，可見(jiàn)試管底出現(xiàn)紅棕色無(wú)定形沉淀。③硅鎢酸反映。取斷腸草酒浸液5mL 置試管中，加入硅鎢酸2～3 滴，靜置12h 后，可見(jiàn)試管底出現(xiàn)淡黃色或灰白色無(wú)定形沉淀。④碘化汞鉀反映。取斷腸草酒浸液5mL 置試管中，加入碘化汞鉀2～3 滴，靜置12h 后，可見(jiàn)試管底出現(xiàn)類白色沉淀。見(jiàn)圖4。

圖4 斷腸草生物堿鑒別圖

3 討論

通過(guò)對(duì)斷腸草進(jìn)行顯微鑒別，發(fā)現(xiàn)橫切面具有外韌型維管束以及韌皮部具有大量厚壁性纖維狀石細(xì)胞散在，均可作為鑒別斷腸草的依據(jù)。該鑒定分析補(bǔ)充了斷腸草在性狀以及顯微鑒別上的不足，有助于更好地識(shí)別斷腸草，為避免中毒事件發(fā)生提供可靠依據(jù)。斷腸草具有祛風(fēng)、殺蟲止癢、消腫拔毒的功效，民間多用于泡藥酒服用，而斷腸草具有劇烈毒性，故應(yīng)該廣泛向該藥盛產(chǎn)區(qū)的群眾進(jìn)行鑒別特征及毒性宣傳，避免誤食。斷腸草在無(wú)成癮性鎮(zhèn)痛和抗腫瘤等方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)，但因其用藥范圍和中毒范圍相差小，雖在減毒方面具有一定的研究成果，但毒性成分的研究不夠深入［15］，因此對(duì)于斷腸草毒性成分還需進(jìn)一步研究，以明確鉤吻生物堿對(duì)呼吸中樞的抑制作用及作用靶點(diǎn)，使其在藥用中降低或避免毒副作用，發(fā)揮止痛、抗抑郁、抑制腫瘤等臨床應(yīng)用價(jià)值，并為臨床緊急救治斷腸草中毒患者提供方法與思路。