郝廣曙 趙潔 張登才 潘志鳳

甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州 730050

人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）主要是通過夫妻或性伴侶間性接觸進(jìn)行傳播，是一種微小雙鏈環(huán)狀DNA 病毒，其具有強(qiáng)烈嗜上皮性，黏膜感染后可引起人類皮膚和黏膜多種良性和惡性病變［1-2］。至今已鑒定出200 多種HPV 亞型，不同亞型HPV 的致病性存在很大差異，且男性與女性HPV 感染情況不同［3-4］。女性宮頸癌的發(fā)生與HPV 感染的聯(lián)系已引起人們高度重視，但對男性泌尿生殖器HPV 感染的研究較少［5］。目前，盡管已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道了中國境內(nèi)的男性關(guān)于HPV 的感染情況，但在甘肅地區(qū)關(guān)于該方面的研究較少［1，13，14］。本研究運(yùn)用多重?zé)晒釶CR 技術(shù)對618 例男性HPV 感染患者進(jìn)行HPV 感染分型檢測，為了解男性HPV 感染流行分布狀況和臨床防治提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象收集2017 年7 月至2020 年7 月在甘肅省某三甲婦幼保健院男科門診就診的618 名男性患者HPV 標(biāo)本檢測資料，年齡13～68 歲，平均（36.5±5.0）歲。所有待檢樣本均使用一次性宮頸脫落細(xì)胞采集器采集樣本。采集男性患者尿道口、冠狀溝及肛周的組織脫落細(xì)胞或分泌物；采集后，低溫保存，立即檢測，無法立刻檢測的標(biāo)本放在4℃冰箱保存，保存期不超過14 天，-20℃保存期為6 個(gè)月，-70℃保存不超過2 年。保存期間避免標(biāo)本反復(fù)凍融。

1.2 主要試劑和設(shè)備HPV 基因分型（23 型）檢測試劑盒購自潮州凱普生物化學(xué)有限公司；熒光定量PCR儀（SLAN-48P）購自上海宏石醫(yī)療科技有限公司。

1.3 HPV 基因分型檢測各試驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)儀器和試劑說明書進(jìn)行。操作步驟如下：采集器采集的樣本取0.5～1mL，13000 轉(zhuǎn)/分鐘離心1 分鐘；棄上清，加入0.5mL 細(xì)胞保存液重懸細(xì)胞；13000 轉(zhuǎn)/分鐘離心1 分鐘，盡量棄干凈上清；每樣本加入50μL 細(xì)胞裂解液，充分振蕩重懸細(xì)胞，煮沸10 分鐘，13000 轉(zhuǎn)/分鐘離心10 分鐘，保留上清備用（上清液中為釋放的DNA）；分別向設(shè)定的n 個(gè)PCR 反應(yīng)管中分別加入18μL 配置好的擴(kuò)增試劑（PCR）混合液17.5μL，DNA 聚合酶0.5μL 和2μL 處理好的樣本DNA，總反應(yīng)體系20μL；按照，如下反應(yīng)條件：95℃，10min，1 個(gè)循環(huán)；95℃，15s，60℃，60s，45 個(gè)循環(huán)；38℃，5s，1 個(gè)循環(huán)，進(jìn)行擴(kuò)增；每次反應(yīng)均需要設(shè)置一個(gè)陽性對照和一個(gè)空白對照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本研究采用SPSS19.0 軟件，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 各亞型分布情況618 例受檢者中，HPV 陽性256 人，感染率達(dá)到41.42%。低危型感染較高的基因型主要有6 亞型、11 型和43 亞型；高危型感染較高的基因型主要有52 亞型、16 亞型、58 亞型、53 亞型。見表1。

表1 HPV 各亞型分布情況

2.2 HPV 感染情況及感染類型構(gòu)成比256 位HPV陽性感染中單重感染有163 例，多重感染有93 例，單重感染率明顯高于多重感染。單重感染中低危型76例，高危型87 例；多重感染中低危型9 例，高危型23例，高低?；旌闲?1 例，并且多重感染中二重和三重感染的感染率占比最高。見表2、表3。

表2 不同HPV 感染類型分布

表3 HPV 感染類型構(gòu)成比

2.3 不同年齡段HPV 感染情況618 位檢測者中，21～40 歲年齡段感染占比最高，年齡分層結(jié)果表明，不同年齡組HPV 感染陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

表4 不同年齡段HPV 感染情況（例）

3 討論

流行病學(xué)數(shù)據(jù)證實(shí)，男性（特別是尿道內(nèi)感染致癌HPV 的“高危男性”）是女性宮頸癌的危險(xiǎn)因素［6-9］。研究發(fā)現(xiàn)，在21～40 歲男性患者中，HPV 感染率占比最高，可能的原因是該年齡段男性是性活躍人群，接觸多個(gè)性伴侶，從而導(dǎo)致感染率偏高，增加了女性患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)。HPV 是腫瘤發(fā)生發(fā)展的密切相關(guān)因素，是一種嗜上皮性的DNA 病，根據(jù)其致癌危險(xiǎn)性的大小分為低危型和高危型。低危型HPV 主要與生殖道、肛周等疣類病和低度子宮頸上皮內(nèi)病變有關(guān)，高危型HPV主要與宮頸癌、高度子宮頸上皮內(nèi)瘤變、陰道癌、外陰癌、肛門癌和陰莖癌相關(guān)［11-12］。由于生理結(jié)構(gòu)的差異，男性生殖道HPV 感染病變的臨床表征是非典型的，大部分是無癥狀的，易漏診，且檢查方法相對局限，缺乏女性檢查的專用手段（如陰道鏡和宮頸刮片等）。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鎮(zhèn)江地區(qū)［1］男性HPV 陽性率是43.67%，深圳［13］是45.12%，山東［14］是57.3%，本研究檢測了618 例樣本，HPV 陽性率為41.42%，最常見的亞型是6、11、52和16 亞型。一些研究人員使用生殖器皮膚或尿液的非侵入性取樣來識(shí)別亞臨床HPV 感染的個(gè)體。雖然該方法無創(chuàng)傷、簡單、耐受性好，但敏感性不高［14］。另有文獻(xiàn)表明，男性HPV 的流行與受試者的居住、教育水平和性伴侶的數(shù)量具有顯著相關(guān)性［15-16］，即性伴侶較多、居住在城市地區(qū)、受教育程度較低的男性，其HPV 的檢出率較高。而有研究報(bào)道，年齡、婚姻狀況、性取向等社會(huì)人口特征和性行為特征與HPV 檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系［17-18］。

本研究618 例HPV 陽性感染者中，單重感染率為63.67%，HPV6（47.77%）和HPV11（24.84%）是低危型最常見的亞型，感染率高于其他亞型；HPV52（18.94%）是高危型中最常見感染亞型。本研究數(shù)據(jù)顯示，二重及以上感染占36.33%，最多達(dá)到六重感染。其中二重（21.10%）和三重（11.32%）感染比例最高。本研究結(jié)果顯示，單一高危型感染比例最高，其次是單一低危型、多重混合型，表明甘肅地區(qū)HPV 感染多數(shù)為單純感染和高、低危亞型混合感染，所以研究檢測時(shí)不能只檢測高危亞型或低危亞型，避免漏診。

綜上所述，我院就診的男性中HPV 感染并不少見，男性HPV 感染主要以6、11、52 和16 亞型為主，多發(fā)于21～40 歲，單一感染和高、低?；旌细腥据^常見，多重HPV 混合感染比例相對較高，達(dá)到了23.83%。本研究為HPV 在男性中的感染亞型的確定，了解HPV 感染的流行病學(xué)特征和男性人群HPV 感染的防治提供參考依據(jù)。