邢 月，王寶維*，葛文華，凡文磊，孔 敏，張名愛，王煥森，劉晨龍，汪 超，王巧莉

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營養(yǎng)與飼料研究室，山東青島 266109；2.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460，3.青島普興生物科技有限公司，青島 266113）

維生素D是種禽必需的脂溶性維生素之一，具有促進(jìn)腸道鈣磷吸收作用，進(jìn)而影響蛋殼形成、骨骼鈣化等。維生素D添加水平對(duì)蛋禽生產(chǎn)性能、血清鈣磷水平、蛋殼品質(zhì)等非常重要，過高和過低都會(huì)產(chǎn)生不良影響。田曉曉研究表明，添加維生素D可顯著提高鵝血清鈣、脛骨鈣含量、脛骨強(qiáng)度。王寶維等研究表明，添加維生素D組1～4周齡青農(nóng)灰鵝的血清鈣含量較不添加組顯著提高。高英衛(wèi)發(fā)現(xiàn)，缺乏維生素D會(huì)直接影響蛋雞鈣吸收能力，使產(chǎn)蛋率下降、軟殼和破殼蛋增多。康樂等研究表明，產(chǎn)蛋后期蛋雞添加維生素D可提高蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度。前期研究發(fā)現(xiàn)，維生素D對(duì)種鵝的生產(chǎn)繁殖、生殖激素水平都有顯著影響。本試驗(yàn)以產(chǎn)蛋期五龍鵝為研究對(duì)象，進(jìn)一步探究不同水平維生素D對(duì)種鵝蛋品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及二者相關(guān)性、蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響，以期確定種鵝飼糧中維生素D的適宜添加水平。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧 選擇體況相近的34周齡五龍鵝種鵝180只，隨機(jī)分為6組（0、100、200、300、400、500 IU/kg組），每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)1只公鵝和4只母鵝。試驗(yàn)預(yù)試期1周，正試期10周。試驗(yàn)鵝由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所育種基地提供，試驗(yàn)用維生素D（有效成分500 000 IU/g）為浙江博朗藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）家禽營養(yǎng)需要量中推薦的種鵝飼糧營養(yǎng)水平設(shè)計(jì)配方。種鵝的飼糧組成和營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)種鵝采用開放式地面平養(yǎng)，全期自由采食和飲水。試驗(yàn)前對(duì)鵝舍進(jìn)行充分沖洗和嚴(yán)格消毒，試驗(yàn)期內(nèi)每周消毒2次。

1.3 蛋品質(zhì)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束前1周每天收集種蛋，各組每重復(fù)共收集10枚種蛋，每組60枚，共360枚，用于測(cè)定蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼顏色、蛋白高度、蛋黃顏色、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、哈市單位、蛋黃比率等蛋品質(zhì)指標(biāo)。蛋品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定與計(jì)算方法按照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計(jì)方法》（NY/T823-2004）進(jìn)行。

1.4 血清生化指標(biāo)測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組每重復(fù)抽取體重相近的鵝2只，每組12只，共72只，翅靜脈采血10 mL，3 000 r/min離心制得血清樣品，分裝，-40℃冷凍保存。白蛋白和堿性磷酸酶活性含量采用比色法測(cè)定，總蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定，鈣含量采用甲基百里香酚藍(lán)比色法測(cè)定，磷含量采用磷鉬酸法測(cè)定。以上試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.5 蛋殼超微結(jié)構(gòu)的觀察 蛋品質(zhì)測(cè)定后蛋殼保留，用去離子水洗凈，置于陰涼處自然風(fēng)干。制備蛋殼樣品，采用掃描電子顯微鏡[JEOL 7500F，JEOL（SEM）Oxford（EDS），日本電子株式會(huì)社]觀察拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 22.0軟件的單因素方差分析的Duncan′s多重比較和對(duì)比方法，分析飼糧不同維生素D添加水平的影響及各項(xiàng)指標(biāo)間的差異及線性與二次的值。其中，＜0.05表示差異顯著，＜0.01表示差異極顯著。數(shù)據(jù)以均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。采用SPSS 22.0軟件的相關(guān)性分析中的雙變量法，對(duì)繁殖性能和血清生殖激素進(jìn)行相關(guān)性分析，＜0.05和＜0.01分別為相關(guān)性顯著和極顯著水平。

2 結(jié)果

2.1 維生素D水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血清生化指標(biāo)的影響由表2可知，300、400 IU/kg組血清鈣含量高于0 IU/kg組（＜0.05），0、500 IU/kg組血清磷含量低于200、300、400 IU/kg組（＜0.01）；400 IU/kg 維生素D組血清鈣、磷含量均最高。飼糧中添加不同水平維生素D對(duì)總蛋白、白蛋白及堿性磷酸酶含量影響不顯著。

表2 維生素D3水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血清生化指標(biāo)的影響

2.2 維生素D水平對(duì)種蛋品質(zhì)的影響 由表3可知，各組間蛋殼顏色、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位及蛋黃比率差異不顯著。400、500 IU/kg組蛋重高于0、100 IU/kg組（＜0.05）；200、300、400 IU/kg組蛋形指數(shù)大于0、100 IU/kg組（＜0.01）；0 IU/kg組蛋殼強(qiáng)度低于其他各組（＜0.01）；0、100 IU/kg組蛋殼厚度低 于400和500 IU/kg組（＜0.01）、200和300 IU/kg組（＜0.05）。

表3 維生素D3水平對(duì)種蛋品質(zhì)的影響

2.3 蛋品質(zhì)與血清鈣磷含量相關(guān)性分析 由表4可知，隨飼糧維生素D添加水平的變化，蛋重、蛋殼強(qiáng)度與血清鈣、磷含量顯著正相關(guān)，蛋形指數(shù)、蛋殼厚度與血清鈣、磷含量的相關(guān)性不顯著。血清鈣含量與蛋重、蛋殼強(qiáng)度顯著正相關(guān)；血清磷含量與蛋殼強(qiáng)度顯著正相關(guān)。

表4 維生素D3水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝蛋品質(zhì)與血清鈣磷含量相關(guān)性的影響

2.4 維生素D水平對(duì)種蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響 如圖1可見，蛋殼結(jié)構(gòu)包括4層，由外至內(nèi)分別為表面角質(zhì)層、垂直晶體層、柵欄層及乳突層，內(nèi)部為殼膜包裹的胚胎結(jié)構(gòu)。如表5可知，0 IU/kg組垂直晶體層厚度低于其他各組（＜0.01）；300、400、500 IU/kg組乳突層厚度大于0和100 IU/kg組（＜0.01）、200 IU/kg組（＜0.05）；400、500 IU/kg組蛋殼總厚度大于0和100 IU/kg組（＜0.01）、200和300 IU/kg組（＜0.05）。結(jié)果表明，隨飼糧維生素D添加水平增加，種鵝蛋殼的垂直晶體層和乳突層厚度顯著增加，而表面角質(zhì)層和柵欄層雖無顯著性變化，但是蛋殼總厚度增加。

表5 維生素D3水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼各層結(jié)構(gòu)厚度的影響

圖1 各組蛋殼斷面超微結(jié)構(gòu)（150×）

3 討 論

3.1 維生素D水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血液生化指標(biāo)的影響在血液生化研究方面，王爽研究指出，在維生素D低于3 000 IU/kg時(shí)，隨著維生素D水平的增加，生長前期北京鴨的血液鈣含量呈明顯上升趨勢(shì)，磷含量逐漸下降，在250 IU/kg 維生素D水平時(shí)，堿性磷酸酶含量可以達(dá)到最高。解俊美研究表明，隨維生素D添加水平的增加，蛋雛鴨血清總蛋白、白蛋白含量呈先增高后降低的趨勢(shì)。田曉曉等研究指出，飼糧添加維生素D可顯著提高血清鈣含量，對(duì)磷、堿性磷酸酶含量無顯著影響。結(jié)合本試驗(yàn)結(jié)果，維生素D水平對(duì)血清鈣磷的吸收代謝存在一定影響，可能因環(huán)境、物種及生長發(fā)育等不同，其結(jié)果表現(xiàn)不同。

3.2 維生素D水平對(duì)鵝種蛋品質(zhì)的影響 Kakhki等發(fā)現(xiàn)，飼糧添加25-羥基維生素D可使不同鈣水平的蛋雞保持蛋殼質(zhì)量穩(wěn)定。張繼良等研究也指出，蛋雞飼糧添加活性維生素D及鋅、錳復(fù)合物可顯著提高蛋殼質(zhì)量。劉禹辰等研究表明，產(chǎn)蛋后期的蛋雞補(bǔ)充含有維生素D的液態(tài)維生素，可促進(jìn)鈣的吸收，破殼率、砂殼蛋、軟殼蛋減少，蛋殼品質(zhì)得到改善。康樂等研究指出，與未添加維生素D組相比，添加維生素D組蛋殼重、蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度都有顯著增強(qiáng)。楊濤研究表明，隨著維生素D水平的提高，蛋雞軟殼蛋、破蛋情況得到明顯減弱。王爽等研究指出，產(chǎn)蛋初期蛋鴨飼糧添加維生素D并未對(duì)蛋殼質(zhì)量產(chǎn)生影響，這與本研究結(jié)果不相符，可能與試驗(yàn)期短、機(jī)體鈣磷儲(chǔ)備及物種不同有關(guān)。Navickis等研究指出，飼糧中添加適量的維生素D可提高蛋殼鈣含量和蛋殼厚度。劉旭研究指出，當(dāng)維生素D添加水平為3 600 IU/kg時(shí)，烏骨雞蛋哈氏單位和蛋黃比率較高。黨曉鵬等研究指出，隨著尼克粉蛋雞飼糧中維生素D含量增加，蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度有先增強(qiáng)后降低的趨勢(shì)。產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中維生素D水平與蛋雞、蛋鴨飼糧維生素D水平是否存在較大差異，是否與采用開放式舍和密閉舍家禽接受陽光程度不同有關(guān)，還有待于進(jìn)一步研究。

3.3 維生素D水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血清鈣磷含量與種蛋品質(zhì)相關(guān)性的影響 鈣磷是蛋殼的主要組成成分。大量研究證明，機(jī)體所攝入、吸收和利用的鈣量對(duì)蛋品質(zhì)有重要影響，當(dāng)鈣含量不足時(shí)，蛋殼中鈣沉積量減少，蛋品質(zhì)下降。高喜良研究發(fā)現(xiàn)，低鈣飼糧會(huì)降低雞蛋品質(zhì)。Navickis等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適量維生素D可使蛋殼厚度增加，改善蛋品質(zhì)。黃福標(biāo)等的研究表明，飼糧適宜鈣水平可改善蛋殼品質(zhì)。本試驗(yàn)中，蛋品質(zhì)與血清鈣、磷含量呈正相關(guān)，與前人研究結(jié)果一致。

3.4 維生素D水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響蛋殼是重要的保護(hù)結(jié)構(gòu)，也是外界環(huán)境與蛋殼內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交流的重要屏障。研究維生素D添加量變化對(duì)蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響，對(duì)于改善蛋殼品質(zhì)具有重要意義。崔琳等研究表明，柵欄層決定蛋殼質(zhì)量。也有人認(rèn)為，乳突層是鈣化開始部位，能夠直接影響其他各層的形成，對(duì)蛋殼質(zhì)量有決定意義。王佩倫研究表明，高強(qiáng)度雞蛋殼中乳突層中乳突顆粒排列規(guī)則、連接緊密，乳突層對(duì)于形成蛋殼和蛋殼延展性等有重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨飼糧維生素D添加水平的變化，產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼掃描電鏡下各層超微結(jié)構(gòu)均有增厚，其中乳突層厚度變化最為顯著。

3.5 產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中維生素D的適宜添加量 本試驗(yàn)條件下，血清鈣磷含量及蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度存在顯著的二次關(guān)系，為對(duì)維生素D添加量進(jìn)行更加準(zhǔn)確地探究，對(duì)其做二次曲線擬合。

對(duì)0～500 IU/kg組鈣含量、磷含量、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度（Y）分別與維生素D添加水平（X）進(jìn)行二次曲線擬合，建立回歸方程：

（鈣含量）=4.307+0.018-3.518E（=0.811，＜0.001）

（磷含量）=7.778+0.018-2.397E（=0.914，＜0.001）

（蛋殼強(qiáng)度）=4.745+0.003-3.700E（=0.696，＜0.001）

（蛋殼厚度）=0.461+0.000362-4.299E（=0.906，＜0.001）

由二次擬合曲線可得，維生素D添加水平在357.43 IU/kg時(shí)，血清鈣含量可取得最大值；添加水平為375.47 IU/kg時(shí)，血清磷含量可取得最大值；維生素D添加水平在405.405 IU/kg時(shí)，蛋殼強(qiáng)度可取得最大值，但此時(shí)＜0.700，曲線擬合度低，故舍去；維生素D添加水平為421.03 IU/kg時(shí)，蛋殼厚度可取得最大值。綜上，維生素D添加量為350～450 IU/kg時(shí)，種鵝可獲得較好的蛋品質(zhì)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，適宜維生素D水平可提高產(chǎn)蛋期種鵝血清鈣、磷含量；蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度隨著維生素D添加量升高有增加趨勢(shì)；血清鈣磷含量與蛋重和蛋殼強(qiáng)度呈正相關(guān)；維生素D對(duì)種鵝蛋殼結(jié)構(gòu)中的乳突層的影響最為顯著，進(jìn)而影響蛋殼質(zhì)量。在開放式種鵝舍飼養(yǎng)條件下，飼糧中維生素D的建議添加水平為350～450 IU/kg。