吳 杰，鄧 波，張 城，詹小立，周文俊，徐子偉*

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，浙江杭州 310021；2.杭州正興牧業(yè)有限公司，浙江杭州 311301；3.浙江豐虹生物科技有限公司，浙江湖州 313300）

蒙脫石是一種硅鋁酸鹽礦物質(zhì)，由兩層硅氧四面體夾一層鋁氧八面體構(gòu)成，層間夾雜Na、K、Ca等離子。蒙脫石具有比表面積大、吸附力強(qiáng)等特點(diǎn)，在畜禽生產(chǎn)中常被用作除臭劑及霉菌毒素吸附劑使用。近年來(lái)，人們利用蒙脫石夾層中Na、K等陽(yáng)離子與具有抗菌效果的Ag、Cu等進(jìn)行交換，制備成金屬無(wú)機(jī)抗菌劑，在畜禽生產(chǎn)中展現(xiàn)出了良好的抗菌、促生長(zhǎng)效果。李靜等研究發(fā)現(xiàn)載銅蒙脫石能促進(jìn)0～21日齡肉雞的平均體重、平均日增重（ADG）。馬玉龍等研究發(fā)現(xiàn)無(wú)機(jī)銅/蒙脫石納米材料能抑制肉雞腸道大腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長(zhǎng)。在斷奶仔豬中也發(fā)現(xiàn)，載銅蒙脫石能提高ADG，降低耗料增重比（F/G），抑制小腸及近端結(jié)腸的梭菌屬及大腸桿菌屬數(shù)量，效果優(yōu)于單獨(dú)使用蒙脫石或硫酸銅。但在仔豬斷奶階段，使用金屬無(wú)機(jī)抗菌劑是否能取代氧化鋅及抗生素達(dá)到促生長(zhǎng)、提高仔豬機(jī)能的研究不多，因此本試驗(yàn)旨在研究載銅蒙脫石在無(wú)氧化鋅及抗生素條件下對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)及血清免疫、抗氧化、炎癥等相關(guān)指標(biāo)的影響，為載銅蒙脫石在仔豬中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 選取體重（25±3）日齡、體重為（7.42±0.88）kg的72頭健康仔豬（公母各半），由杭州正興牧業(yè)有限公司提供，按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分為3組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭豬（公母各半）。3組分別為對(duì)照組、氧化鋅+抗生素組及載銅蒙脫石組，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，氧化鋅+抗生素組前14 d在基礎(chǔ)飼糧中添加1 600 mg/kg氧化鋅+75 mg/kg金霉素+20 mg/kg吉他霉素，后14 d在基礎(chǔ)飼糧中添加75 mg/kg金霉素+20 mg/kg吉他霉素，載銅蒙脫石組在基礎(chǔ)飼糧中添加0.16%載銅蒙脫石，載銅蒙脫石由浙江豐虹生物科技有限公司提供。基礎(chǔ)日糧為粉料全價(jià)料，配方及主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見表1。試驗(yàn)期28 d。

表1 基礎(chǔ)日糧原料組成及營(yíng)養(yǎng)成分

同一性別的仔豬將按體重排序，從大到小共分成4個(gè)區(qū)組，每個(gè)區(qū)組3欄共18頭仔豬（公母各半）。每個(gè)區(qū)組內(nèi)的3個(gè)欄將隨機(jī)分配到對(duì)照組、氧化鋅+抗生素組、載銅蒙脫石組中。試驗(yàn)豬個(gè)體打耳號(hào)、稱重，自由采食、自由飲水，常規(guī)驅(qū)蟲和免疫。

1.2 生長(zhǎng)性能與腹瀉率 試驗(yàn)期間每日觀察仔豬表現(xiàn)情況。試驗(yàn)第1天、第14天和第28天分別對(duì)仔豬空腹稱重，并記錄各欄耗料量。分別計(jì)算各階段仔豬ADG、平均日采食量（ADFI）及F/G。每天早晚兩次記錄試驗(yàn)豬腹瀉頻數(shù)，每欄全期頻次數(shù)與每欄觀察總頭次數(shù)之比，即為該欄腹瀉率。

1.3 血清樣品的制備 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每欄選取2頭仔豬（公母各1頭）前腔靜脈采血，靜置8 h待血清析出，3 000 r/min離心10 min，上清液分裝于Eppendorf管中，置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。

1.4 血清生理生化指標(biāo)的測(cè)定 血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（Immunog lobulin M，IgM）、白介素6（IL-6）、白介素1（IL-1）、腫瘤壞死因子-（TNF-）、過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、二胺氧化酶（DAO）、內(nèi)毒素（LPS）、髓過氧化物歧化酶（MPO）的測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法按說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行初步處理，用SPSS 21.0軟件進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。其中生長(zhǎng)性能指標(biāo)采用以處理為固定因子、區(qū)組為隨機(jī)因子進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組分析，并用LSD多重比較檢測(cè)方差顯著性。血液生化指標(biāo)進(jìn)行One-way ANOVA對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，并用LSD多重比較檢測(cè)方差顯著性。以＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 載銅蒙脫石對(duì)仔豬生產(chǎn)性能及腹瀉率的影響 試驗(yàn)全期仔豬均較為活躍，精神狀態(tài)良好，采食及飲水情況均正常。如表2所示，與對(duì)照組相比，氧化鋅+抗生素組及載銅蒙脫石組仔豬14 d體重、28 d體重、0～14 d ADG及0～28 d ADG顯著提高，0～14 d F/G顯著降低。飼料中添加氧化鋅和抗生素或添加載銅蒙脫石在生產(chǎn)性能上并未見顯著差異。整個(gè)試驗(yàn)期腹瀉率均處于較低水平，各組間未見顯著差異。

表2 載銅蒙脫石對(duì)仔豬生產(chǎn)性能及腹瀉率的影響

2.2 載銅蒙脫石對(duì)仔豬血清免疫及抗氧化指標(biāo)的影響如圖1所示，飼糧中添加氧化鋅+抗生素或載銅蒙脫石對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)IgA、IgM、IgG未見顯著影響。與對(duì)照組相比，飼糧中添加載銅蒙脫石能顯著降低血清MDA含量，各處理組T-AOC及過氧化氫酶無(wú)顯著差異。

圖1 載銅蒙脫石對(duì)仔豬血清免疫及抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 載銅蒙脫石對(duì)仔豬血清MPO、DAO、LPS及炎癥因子的影響 如圖2所示，與對(duì)照組相比，飼糧中添加氧化鋅+抗生素或載銅蒙脫石能顯著降低血清DAO、IL-1及TNF-含量，并且添加載銅蒙脫石還降低血清MPO（=0.10）及IL-6（＜0.05），各處理對(duì)血清LPS影響不顯著。

圖2 載銅蒙脫石對(duì)仔豬血清MPO、LPS、DAO及炎癥因子指標(biāo)的影響

3 討 論

載銅蒙脫石是將抗菌效果較強(qiáng)的Cu與蒙脫石夾層中Na、K等陽(yáng)離子交換后得到的金屬無(wú)機(jī)抗菌劑，其在動(dòng)物機(jī)體中發(fā)揮作用一方面是利用蒙脫石的物理化學(xué)吸附力將細(xì)菌吸附于蒙脫石中，另一方面利用夾層中的Cu將細(xì)菌殺滅，其具有耐高溫、化學(xué)穩(wěn)定性好，不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)。

Xia等研究表明，添加1.5 kg/t載銅蒙脫石能顯著提高仔豬的ADG及飼料轉(zhuǎn)化率，效果優(yōu)于單獨(dú)添加蒙脫石或硫酸銅。郭彤等也發(fā)現(xiàn)添加0.2%～0.3%載銅硅酸鹽能提高仔豬斷奶后0～6周的ADG及F/G，并且劑量越高效果越好。李靜等在肉雞中添加0.2%載銅蒙脫石也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果，但效果主要集中在0～21日齡。本試驗(yàn)中，0.16%添加量的載銅蒙脫石顯著提高了斷奶仔豬0～14 d的F/G，0～14d的ADG增長(zhǎng)趨勢(shì)也較明顯，增幅達(dá)到7.89%，但后期效果并不明顯。前后期作用不一致的原因可能是因?yàn)楹笃谧胸i漸漸從斷奶應(yīng)激的損傷中恢復(fù)，此時(shí)添加載銅蒙脫石效果得不到體現(xiàn)。

仔豬斷奶后常常會(huì)引發(fā)腹瀉，腹瀉的原因一部分是飼料中抗原物質(zhì)造成，一部分是由致病菌特別是大腸桿菌感染所致。治療腹瀉最經(jīng)濟(jì)快速的方法是添加氧化鋅及抗生素，但易產(chǎn)生耐藥性并且污染環(huán)境。Song等研究發(fā)現(xiàn)0.15%的Cu-Ca蒙脫石或Cu-Na蒙脫石均能顯著降低糞便評(píng)分及回腸結(jié)腸中大腸桿菌數(shù)量。郭彤等發(fā)現(xiàn)0.2%～0.3%載銅蒙脫石能降低仔豬腹瀉率，降幅可達(dá)72%。載銅蒙脫石緩解腹瀉的效果可能得益于其收斂腸道并吸附殺滅病毒的特性。本試驗(yàn)中，添加氧化鋅或氧化鋅抗生素聯(lián)用對(duì)降低仔豬腹瀉率效果最好，添加載銅蒙脫石對(duì)腹瀉也有一定的防治作用，降幅達(dá)到39%，但各組間差異并不顯著，這可能是因?yàn)樵囼?yàn)在7—8月進(jìn)行，溫度較高，仔豬整體腹瀉率均較低，均不超過3%，低腹瀉率掩蓋了包括氧化鋅、抗生素或載銅蒙脫石等對(duì)腹瀉的影響。

目前載銅蒙脫石對(duì)仔豬免疫及抗氧化指標(biāo)的影響還未見報(bào)道，但添加蒙脫石對(duì)仔豬免疫功能及抗氧化功能的正面效果已得到證實(shí)。胡屹屹等研究發(fā)現(xiàn)蒙脫石可大幅提高血清中IgG及IgM水平，影響體液免疫反應(yīng)。姜淑貞等在玉米赤霉烯酮污染的日糧中也發(fā)現(xiàn)添加蒙脫石能夠吸附飼糧中的玉米赤霉烯酮，降低其對(duì)仔豬的損害從而提高仔豬免疫力。本試驗(yàn)中，添加載銅蒙脫石顯著降低了血清MDA含量，表明機(jī)體內(nèi)自由基含量下降，抗氧化力提高，結(jié)果與之前研究一致。但載銅蒙脫石對(duì)血清免疫指標(biāo)的影響不顯著，這可能和動(dòng)物機(jī)體本身的免疫狀態(tài)有關(guān)。

腸道黏膜完整性對(duì)維持上皮細(xì)胞功能、抵抗細(xì)菌入侵具有十分重要的作用。郭彤等在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，載銅蒙脫石能覆蓋在Caco-2細(xì)胞表面，降低病原菌對(duì)細(xì)胞的黏附及入侵，并且對(duì)病原菌有較強(qiáng)殺滅作用。馬玉龍等研究發(fā)現(xiàn)，添加0.2%的載銅蒙脫石，斷奶仔豬中腸道微絨毛排列更規(guī)律、致密且整齊，絨毛高度及絨隱比顯著增加。Song等也在血清學(xué)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)添加載銅蒙脫石顯著降低了血清DAO及-乳酸含量。DAO及-乳酸均為腸道黏膜損傷的敏感指標(biāo)，其含量下降間接反映黏膜損傷的緩解，結(jié)果與本研究一致，本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)載銅蒙脫石組血清DAO含量顯著降低，效果要優(yōu)于氧化鋅+抗生素組。

斷奶會(huì)引發(fā)仔豬CD4、CD8等T細(xì)胞亞群的釋放及腸道炎性因子基因的表達(dá)，炎癥發(fā)生會(huì)進(jìn)一步損害腸道上皮細(xì)胞，破壞腸道黏膜屏障功能。呂航研究發(fā)現(xiàn)飼喂高鋅能顯著降低斷奶仔豬空腸IL-1和IFN-表達(dá)，Boontiam等也發(fā)現(xiàn)飼糧中添加抗生素能有效降低斷奶仔豬血清中炎癥因子的含量。本試驗(yàn)中，飼喂載銅蒙脫石顯著降低了血清IL-1、IL-6、TNF-含量，效果與飼喂氧化鋅+抗生素組一致，結(jié)果與之前研究一致。Song等研究發(fā)現(xiàn)載銅蒙脫石能顯著降低斷奶仔豬腸道黏膜IL-6及TNF-含量，效果與飼喂金霉素一致。Jiao等研究也發(fā)現(xiàn)，在LPS致炎仔豬中添加載銅鋅蒙脫石能顯著降低空腸黏膜中IL-1、IL-6、IL-8、TNF-、IFN-的基因表達(dá)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加0.16%載銅蒙脫石能提高斷奶仔豬抗氧化力，降低體內(nèi)炎癥反應(yīng)，從而促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育。在本試驗(yàn)條件下，載銅蒙脫石在生長(zhǎng)性能、血清抗氧化和炎癥指標(biāo)上效果與添加抗生素+氧化鋅差異不大，具有替抗、替鋅的潛力。