王紫陽 謝 靜 歐亞妮 邱國斌屈勇剛 黨瑞瑩 高嘉豪

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2動(dòng)物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832003；3第四師畜牧獸醫(yī)站，新疆可克達(dá)拉 831304）

豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是圓環(huán)病毒（porcine circovirus）4個(gè)血清型中對豬群危害最大的一種血清型[1]。PCV2為無包膜的單股負(fù)鏈環(huán)狀閉合DNA病毒，是目前已知的在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)自行復(fù)制的最小DNA病毒[2]。PCV2于20世紀(jì)90年代在加拿大被首次分離報(bào)道，之后在很短的時(shí)間內(nèi)，我國也分離到該病毒（2000年）[3]。PCV2宿主譜窄，豬是該病毒的天然宿主，主要侵害豬的免疫系統(tǒng)，繼而降低豬群對其他疾病的抵抗力，病毒長期存在病豬和隱性感染豬的淋巴結(jié)與呼吸道中，既可水平傳播又可垂直傳播，是造成豬圓環(huán)病毒病廣泛傳播的主要原因[4]。各階段豬群均易患豬圓環(huán)病毒?。≒orcine Circovirus Disease,PCVD）：7日齡以內(nèi)仔豬患病主要表現(xiàn)為先天性震顫（Congenital tremors,CT），仔豬出生幾小時(shí)后，開始有規(guī)律的身體震顫，故稱“抖抖病”，通過病原檢測，可在仔豬神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)PCV2；斷奶仔豬感染PCV2后，主要表現(xiàn)為豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS），病豬生長緩慢，腹式呼吸，皮毛粗亂，病死率可達(dá)30%以上，耐過豬變?yōu)榻┴i，飼料利用率變低[5]；育肥豬豬感染PCV2后，多表現(xiàn)為皮炎腎病綜合征（Porcine dermatitis nephrotic syndrome,PDNS），病初豬體表見小紅點(diǎn)，常誤診為蚊蟲叮咬，但隨著病程延長，紅斑逐漸變大，形成丘疹，剖檢病豬可見腎臟腫大；母豬感染PCV2后，主要表現(xiàn)為母豬久配不孕、流產(chǎn)，死胎、木乃伊胎增多，在流產(chǎn)胎兒體內(nèi)可檢測到PCV2，說明該病原可突破胎盤屏障，進(jìn)行垂直傳播。

目前，對于PCV2最好的預(yù)防手段就是進(jìn)行疫苗免疫，疫苗免疫可有效提高豬群抗體水平，保護(hù)豬場的健康養(yǎng)殖。為評價(jià)新疆地區(qū)豬群PCV2的免疫效果，本試驗(yàn)采用ELISA抗體檢測的方法對采集的475份豬血清進(jìn)行抗體檢測，以便更好指導(dǎo)該地區(qū)的健康養(yǎng)殖。

1 材料

1.1 樣品

2019年1月至2020年12月期間從新疆石河子市、伊犁哈薩克自治州、阿克蘇市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市，按照地區(qū)、豬場及豬群類別的不同，隨機(jī)采集了475份血樣，分離血清后立即在石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院進(jìn)行檢測。其中血清樣本包含哺乳仔豬92份、保育豬80份、育肥豬52份、后備豬104份、繁殖母豬117份、種公豬30份。

1.2 材料和儀器

豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；獸用5 mL一次性采血器購自南昌市山力畜牧器械有限公司；自動(dòng)酶標(biāo)儀購自青島智匯谷信息技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 樣品及試劑準(zhǔn)備

新鮮的、冷藏（2～8℃少于8 d）的、冷凍的血清都可用于檢測；所有試劑需恢復(fù)至室溫，輕微震蕩混勻。

2.2 ELISA檢測方法

檢測方法嚴(yán)格按照各ELISA檢測試劑盒使用說明書進(jìn)行操作。

2.3 結(jié)果判定

OD450nm值≥臨界值為陽性；OD450nm值＜臨界值為陰性。

2.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的差異。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同豬場PCV2抗體檢測結(jié)果

5個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場（用A～E表示）的475份血液樣品中，根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，在475份樣品中，有331份血清呈PCV2抗體陽性，平均陽性率為69.68%（331/475），S/P的平均值為1.56。

除B場和D場抗體水平達(dá)到國家規(guī)定的70%以上標(biāo)準(zhǔn)外，A、C、E場的抗體水平均未達(dá)到群體免疫的抗體水平和免疫標(biāo)準(zhǔn)，其中A場的陽性率最低僅為48.65%。在A～E豬場中，A場與B場、D場、E場間均存在顯著差異（P＜0.05），B場與C、D、E場間存在顯著差異（P＜0.05），C場與D場間存在顯著差異（P＜0.05），A場與C場這2個(gè)場差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 不同豬場PCV2抗體檢測結(jié)果

3.2 不同類別豬群PCV2抗體檢測結(jié)果

各類別豬群中，哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、繁殖母豬、種公豬陽性率分別為51.09%（47/92）、42.50% （34/80） 、 75.00% （39/52） 、 80.77%（84/104）、86.32%（101/117）、86.67%（26/30）；其中種公豬群的抗體陽性率最高，為86.67%，保育豬的平均阻斷率最低，為42.50%；哺乳仔豬群、保育豬群平均阻斷率與育肥豬群、后備豬群、繁殖母豬群、種公豬群存在顯著差異（P＜0.05）；哺乳豬群的平均陽性率與保育豬群差異不顯著（P＞0.05）；育肥豬群的平均陽性率與后備豬群、繁殖母豬群、種公豬群差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 不同類別豬群PCV2抗體檢測結(jié)果

4 討論

4.1 各豬場PCV2免疫效果評價(jià)

通過對新疆地區(qū)5個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場475份血清樣品進(jìn)行豬圓環(huán)病毒抗體ELISA檢測得知，有331份血清樣品檢測呈陽性，平均抗體陽性率僅為69.68%，未達(dá)到國家規(guī)定的70%抗體水平標(biāo)準(zhǔn)。其中B場抗體合格率達(dá)90%以上，達(dá)到了規(guī)?；B(yǎng)殖場控制PCV2疫情的水準(zhǔn)[6]。與2019年張家瑞等[7]檢測到新疆部分地區(qū)豬場PCV2平均抗體陽性率70.71%相比，抗體陽性率出現(xiàn)下降，且有3個(gè)場都未能達(dá)到國家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)。這一檢測結(jié)果應(yīng)該引起這幾個(gè)場管理人員的重視，可能是由于豬場技術(shù)人員在PCV2免疫計(jì)劃的制定上存在一定的問題，存在免疫空白期以及免疫的密度不能達(dá)到100%，應(yīng)根據(jù)抗體檢測結(jié)果對豬群已有的免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，及時(shí)找出抗體陽性率不高的內(nèi)在原因，及時(shí)止損。

4.2 不同類別豬群PCV2免疫抗體的差異

通過對不同類別豬群PCV2抗體檢測結(jié)果分析得知，各類別豬群的抗體水平存在一定差異。各豬群整體的抗體陽性率僅為69.68%。種公豬的抗體陽性率最高，達(dá)86.67%；保育豬群的抗體陽性率最低，低至42.50%，保育豬群作為場區(qū)的“經(jīng)濟(jì)命脈”，做好疫苗免疫以及抗體水平的監(jiān)測至關(guān)重要，保育豬群的優(yōu)劣，也直接關(guān)系到該場的效益，只有確保保育豬群的健康，才能為下一階段的育肥提供可靠的保障。該豬群抗體陽性率不高的原因可能是由于從哺乳仔豬到保育階段存在較長的免疫空白期，在此期間豬只體內(nèi)的抗體消耗殆盡，而又未及時(shí)得到補(bǔ)充，因此應(yīng)對現(xiàn)推行的免疫時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，確保豬群能夠及時(shí)得到免疫，降低豬群在該階段的感染風(fēng)險(xiǎn)，為豬群的健康打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)[8]。

5 小結(jié)

綜上所述，從近年來本實(shí)驗(yàn)室對新疆部分地區(qū)規(guī)?；i場豬圓環(huán)病毒2型感染狀況的調(diào)查來看，新疆地區(qū)的大多數(shù)豬場都存在不同程度的PCV2感染，有些豬場的感染率甚至達(dá)到80%以上。雖然由豬圓環(huán)病毒2型本身引發(fā)的疾病很少發(fā)生，但該病毒感染后可造成感染豬的免疫細(xì)胞和免疫器官受損，使得豬的免疫力低下，容易繼發(fā)其他病原的感染。因此，在規(guī)模化豬場一般都要對豬群注射豬圓環(huán)病毒疫苗，防患于未然。從本次檢測的結(jié)果來看，免疫的效果不是特別理想，各場應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，對豬群的抗體水平進(jìn)行檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，并對現(xiàn)有的免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，探索出適合本場的圓環(huán)病毒2型的防控方案，降低損失，確保豬場的長久穩(wěn)定發(fā)展。