劉登海 山東省鄆城縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 274700

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是以炎性滑膜炎為主要表現(xiàn)的系統(tǒng)性疾病，病因未明、呈慢性病程，多累及手足等小關(guān)節(jié)，隨病情進(jìn)展可出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形、功能喪失，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[1]。早期診斷并判斷嚴(yán)重程度對(duì)于RA治療方案確定、預(yù)期治療效果獲取等均有重要意義，故選擇高效敏感的血清學(xué)指標(biāo)成為當(dāng)下臨床研究的重點(diǎn)。粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)是具有增殖、活化中性粒細(xì)胞系造血細(xì)胞功能的糖蛋白，既往研究證實(shí)RA患者關(guān)節(jié)液中存在大量高表達(dá)的GM-CSF，推測(cè)其表達(dá)異常參與了RA的發(fā)生發(fā)展[2]。為了明確GM-CSF在RA診斷、病情判斷中的價(jià)值，本次檢測(cè)RA患者及正常人群的血清GM-CSF含量，進(jìn)一步探討GM-CSF含量與病情相關(guān)指標(biāo)水平的內(nèi)在聯(lián)系，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選擇2018年9月—2021年2月在本院接受住院治療的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者98例作為觀察組，另選取同期在本院進(jìn)行體檢的健康志愿者50例作為正常對(duì)照組，研究對(duì)象本人/家屬簽署知情同意書。正常對(duì)照組中男26例，女24例，年齡45～71歲，平均年齡(56.82±9.17)歲；觀察組中男50例，女48例，年齡46～73歲，平均年齡(55.79±9.63)歲。在性別、年齡分布中兩組差異不顯著(P>0.05)，具有可比性，研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) (1)每日晨僵≥1h，持續(xù)時(shí)間≥6周；(2)受累關(guān)節(jié)數(shù)目≥3個(gè)，持續(xù)時(shí)間≥6周；(3)腕關(guān)節(jié)、掌指關(guān)節(jié)、近端指關(guān)節(jié)受累，持續(xù)時(shí)間≥6周；(4)對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎，持續(xù)時(shí)間≥6周；(5)伴類風(fēng)濕皮下結(jié)節(jié)；(6)X線檢查可見骨關(guān)節(jié)改變；(7)血清類風(fēng)濕因子含量異常升高，達(dá)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。上述7點(diǎn)中符合4條及以上，且排除其他原因所致關(guān)節(jié)炎者，即可確診RA。

1.3 入選標(biāo)準(zhǔn) 入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)首次確診RA；(2)院外未接受自主其他藥物治療；(3)全程配合相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床數(shù)據(jù)獲取完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他原因所致全身感染性疾??；(2)合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡、強(qiáng)直性脊柱炎等其他自身免疫性疾病；(3)合并惡性腫瘤性疾病。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 入院即刻，抽取兩組患者的空腹肘靜脈血5.0ml，置入肝素化抗凝的無(wú)菌EP管中，3 500r/min離心10～15min，留取上層血清并凍存于-80℃低溫環(huán)境中備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中GM-CSF的含量；采用ELISA測(cè)定血清中炎癥介質(zhì)白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)、白介素-22(IL-22)的含量；采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定血清中抗RA33抗體、抗CCP(環(huán)瓜氨酸肽)抗體、抗角蛋白抗體(AKA)的含量。

2 結(jié)果

2.1 血清GM-CSF含量 正常對(duì)照組血清中GM-CSF含量為(30.82±6.19)ng/L，觀察組患者血清中GM-CSF含量為(173.29±22.51)ng/L。觀察組患者血清中GM-CSF的含量顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 炎癥介質(zhì) 入院即刻，觀察組患者血清中炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6、IL-17、IL-22的含量均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清中炎癥介質(zhì)含量比較

2.3 RA相關(guān)抗體 入院即刻，觀察組患者血清中抗RA33抗體、抗CCP抗體、AKA的水平均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清中RA相關(guān)抗體水平比較

2.4 相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RA患者血清中GM-CSF的含量與炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6、IL-17、IL-22的含量呈正相關(guān)，與RA相關(guān)抗體抗RA33抗體、抗CCP抗體、AKA的水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 RA患者血清中GM-CSF含量與炎癥介質(zhì)、抗體水平相關(guān)關(guān)系

3 討論

較多研究證實(shí)，單核/巨噬細(xì)胞在滑膜組織中的浸潤(rùn)是導(dǎo)致RA關(guān)節(jié)炎癥發(fā)生、關(guān)節(jié)功能障礙的主要原因，GM-CSF是單核細(xì)胞活化的重要因子，其作用后細(xì)胞呈多形性并出現(xiàn)貼壁現(xiàn)象(單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化)[3]，推測(cè)GM-CSF是RA發(fā)生及進(jìn)展的原因之一，但具體相關(guān)關(guān)系目前尚未有明確報(bào)道。本次研究檢測(cè)RA患者、健康志愿者的血清GM-CSF含量并發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照組比較，觀察組患者血清中GM-CSF的含量大幅增加，說(shuō)明RA患者存在循環(huán)血中GM-CSF的異常高表達(dá)、GM-CSF參與RA的發(fā)生發(fā)展。

受累關(guān)節(jié)局部及全身炎癥反應(yīng)是RA的主要病理表現(xiàn)，單核/巨噬細(xì)胞活化后可分泌多種炎癥因子，持續(xù)參與滑膜破壞及骨關(guān)節(jié)侵蝕，換言之RA患者全身炎癥反應(yīng)程度可客觀反映RA整體病情嚴(yán)重程度[4]。IL-1β、IL-6均是臨床最多見的促炎因子，其水平可間接反映機(jī)體單核/巨噬細(xì)胞的激活狀態(tài)，已經(jīng)有研究證實(shí)其大量分泌可損傷關(guān)節(jié)軟骨組織，同時(shí)可刺激B淋巴細(xì)胞合成自身抗體、促進(jìn)類風(fēng)濕因子形成[5-6]。IL-17是Th17細(xì)胞分泌的重要因子，可誘導(dǎo)促炎因子、趨化因子、基質(zhì)金屬蛋白酶分泌，同時(shí)協(xié)同活化T細(xì)胞[7]。IL-22是Th17細(xì)胞分泌的另一因子，已經(jīng)有研究在銀屑病患者關(guān)節(jié)液中發(fā)現(xiàn)其含量大幅增高，且抗IL-22治療有助于緩解炎癥反應(yīng)，說(shuō)明IL-22也具有促炎作用[8]。本次研究首先對(duì)比兩組研究對(duì)象血清中上述炎癥介質(zhì)含量的差異，發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照組比較，觀察組患者血清中IL-1β、IL-6、IL-17、IL-22的含量較高，這與既往研究結(jié)果吻合。進(jìn)一步經(jīng)Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RA患者血清中GM-CSF的含量與IL-1β、IL-6、IL-17、IL-22含量呈正相關(guān)，證實(shí)高表達(dá)的GM-CSF可加重RA患者全身炎癥反應(yīng)程度，GM-CSF含量可客觀反映RA患者的炎癥程度。

RA屬于自身免疫性疾病，其血清中自身抗體的檢出是鑒別RA與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的重要標(biāo)志[9]?？筊A33抗體、抗CCP抗體、AKA均是RA最為敏感、特異的抗體，抗RA33抗體多在RA早期出現(xiàn)；抗CCP抗體滴度較高是RA患者骨關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重的標(biāo)志；AKA的出現(xiàn)可早于RA發(fā)病前，且隨訪后大部分最終進(jìn)展至RA[10]。自身抗體滴度與RA病情嚴(yán)重程度緊密相關(guān)，本次研究發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照組比較，觀察組患者血清中抗RA33抗體、抗CCP抗體、AKA的水平較高，說(shuō)明RA患者存在上述抗體的異常高表達(dá)，是RA的特異性標(biāo)志。進(jìn)一步采用Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RA患者血清中GM-CSF的含量與抗RA33抗體、抗CCP抗體、AKA水平呈正相關(guān)，說(shuō)明高表達(dá)的GM-CSF可加重RA患者的自身免疫反應(yīng)，再次說(shuō)明GM-CSF含量與RA病情的一致性。

綜上所述，RA患者血清GM-CSF含量異常增高，且GM-CSF具體含量可客觀反映RA患者的全身炎癥反應(yīng)程度、抗體滴度，可作為RA病情判斷的可靠指標(biāo)，值得在日后臨床實(shí)踐中推廣應(yīng)用。