王 真 朱 琳 舒 丹 羅中明

1 江西省上饒市廣信區(qū)人民醫(yī)院急診科 334000； 2 江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)系

胃癌是消化道常見(jiàn)惡性腫瘤之一，我國(guó)胃癌發(fā)病人數(shù)占全球所有新發(fā)胃癌病例的40%以上[1]。我國(guó)胃癌患者多數(shù)發(fā)現(xiàn)時(shí)已到晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)，為進(jìn)一步提高胃癌早期診斷率，胃癌診斷相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物在臨床越來(lái)越被重視[2]。DNA結(jié)合抑制因子2是人體內(nèi)常見(jiàn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子之一，在腫瘤細(xì)胞的增殖及遷移中具有重要作用[3]。NF-κB是多向性核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，激活后能與靶基因結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、黏附因子及炎性介質(zhì)表達(dá)，P50/P65二聚體是NF-κB最常見(jiàn)亞型[4]。研究證實(shí)，NF-κB/P65可以影響某些抗凋亡基因及細(xì)胞增殖基因表達(dá)，參與腫瘤發(fā)生過(guò)程[5]。近期研究顯示[6]，DNA結(jié)合抑制因子2能夠通過(guò)NF-κB信號(hào)通路參與免疫應(yīng)答及腫瘤微環(huán)境改變。本次研究回顧性分析了168例胃癌患者的臨床資料，進(jìn)一步探討NF-κB/P65與DNA結(jié)合抑制因子2在胃癌中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性，為后續(xù)胃癌臨床診治提供更多參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2016年1月—2017年12月收治的168例胃癌患者臨床資料。其中男107例，女61例，年齡32～74歲，平均年齡(58.72±4.89)歲；腫瘤位置：賁門及胃底83例，胃體27例，胃竇及幽門58例；TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期57例，Ⅲ期68例，Ⅳ期20例；分化程度：高分化10例，中分化35例，低分化123例；組織學(xué)類型：管狀腺癌36例，黏液腺癌20例，低分化腺癌84例，印戒細(xì)胞癌16例，其他類型12例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理確診為胃癌；(2)Hp感染陽(yáng)性；(3)均在我院接受手術(shù)，病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前行新輔助放化療；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)資料不全。

1.2 方法 檢測(cè)168例胃癌組織和30例癌旁正常組織的NF-κB/P65及DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)，其中癌旁正常組織指距腫瘤邊緣5cm以上的組織。采用PV6000二步法檢測(cè)兩者表達(dá)：組織蠟塊連續(xù)切片，切片厚度4μm，經(jīng)脫蠟、水化、熱修復(fù)及H2O2封閉后滴加一抗(兔抗人NF-κB/P65多克隆抗體，1∶100，Abcam)，4℃過(guò)夜后再滴加二抗IgG，37℃孵育0.5h，依次行DAB顯色、蘇木精復(fù)染及透明封片。NF-κB/P65為細(xì)胞核表達(dá)，DNA結(jié)合抑制因子2為細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性細(xì)胞比例≥10%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS24.0軟件處理數(shù)據(jù)；計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示，用χ2檢驗(yàn)或確切概率法；兩變量的相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析，P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB/P65與DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)水平 168例胃癌患者中NF-κB/P65表達(dá)陽(yáng)性率為56.55%(95/168)，DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)陽(yáng)性率為71.43%(120/168)，兩者癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性率均為26.67%(8/30)；胃癌組織NF-κB/P65和DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)陽(yáng)性率均顯著高于癌旁組織(P<0.05)。

2.2 NF-κB/P65及DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 DNA結(jié)合抑制因子2及NF-κB/P65表達(dá)均與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 NF-κB/P65及DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 NF-κB/P65與DNA結(jié)合抑制因子2表達(dá)相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，DNA結(jié)合抑制因子2和NF-κB/P65在胃癌患者表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.568，P<0.05)。

3 討論

NF-κB/P65廣泛參與了細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、炎癥、免疫應(yīng)答等多方面的表達(dá)調(diào)控；同時(shí)還可直接作用于機(jī)體微環(huán)境，誘發(fā)或加重炎癥反應(yīng)，激活癌癥干細(xì)胞，拮抗其凋亡，加快其增殖[7]。DNA結(jié)合抑制因子2是人體內(nèi)廣泛表達(dá)的分化抑制因子，通過(guò)與bHLH蛋白結(jié)合，能夠干擾 bHLH與相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，從而調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡、增殖、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移等多項(xiàng)活動(dòng)[8]。已有研究表明[6]，DNA結(jié)合抑制因子2可作用于NF-κB信號(hào)通路，調(diào)控NF-κB活性，影響炎癥及腫瘤微環(huán)境。另外的實(shí)驗(yàn)研究還證實(shí)[9]，腫瘤細(xì)胞株轉(zhuǎn)染DNA結(jié)合抑制因子2后可見(jiàn)NF-κB表達(dá)水平顯著提高，故推測(cè)DNA結(jié)合抑制因子2對(duì)于癌細(xì)胞增殖促進(jìn)作用可能依賴于NF-κB/cyclin D1途徑。此外，DNA結(jié)合抑制因子2還被證實(shí)可通過(guò)TLR4/NF-κB信號(hào)通路對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答作用進(jìn)行調(diào)節(jié)[10]。但兩者在胃癌患者中應(yīng)用仍有待進(jìn)一步探討。

有報(bào)道證實(shí)[11]，胃癌組織中NF-κB/P65表達(dá)水平較癌旁正常組織更高。本次研究結(jié)果顯示，胃癌組織NF-κB/P65表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織(P<0.05)，與上述報(bào)道結(jié)果一致。研究證實(shí)[12-13]，DNA結(jié)合抑制因子2在結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤中處于高表達(dá)水平，且其高表達(dá)可能與臨床預(yù)后不良相關(guān)。本次研究結(jié)果顯示，DNA結(jié)合抑制因子2在胃癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為71.43%，顯著高于癌旁組織(P<0.05)。通過(guò)分析臨床病理資料發(fā)現(xiàn)，DNA結(jié)合抑制因子2及NF-κB/P65表達(dá)均與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)(P<0.05)。可見(jiàn)兩者均與胃癌的病情及病程有關(guān)。胃癌患者腫瘤直徑越大、分化越差、浸潤(rùn)越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量越多、合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期高，DNA結(jié)合抑制因子2及NF-κB/P65表達(dá)水平亦越高。通過(guò)相關(guān)性分析顯示，DNA結(jié)合抑制因子2和NF-κB/P65在胃癌患者表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。提示兩者在促進(jìn)腫瘤發(fā)展過(guò)程中可能具有協(xié)同作用。胃癌的發(fā)生可能涉及多條通路、多個(gè)靶點(diǎn)，NF-κB/P65 與DNA結(jié)合抑制因子2就是其中之一，兩者可能具有協(xié)同促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用，但是其機(jī)制尚需要進(jìn)一步采取體外研究證實(shí)。

綜上所述，NF-κB/P65與DNA結(jié)合抑制因子2在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有協(xié)同促進(jìn)效應(yīng)，兩者表達(dá)水平均與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)，但具體分子作用機(jī)制仍有待后續(xù)更為深入研究確證。