李燕楠，楊小迪，陳思宇，頡麗英，劉思麒，高爾和，左琳

1. 山西醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生理學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系，山西 太原 030001；2. 蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微生物學(xué)與寄生蟲(chóng)學(xué)系，安徽 蚌埠 233030；3. 天普大學(xué)醫(yī)學(xué)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心，美國(guó) 費(fèi)城 19140

心肌梗死（myocardial infarction，MI）是一類以冠狀動(dòng)脈血供減少或中斷為基礎(chǔ)，伴隨心肌細(xì)胞壞死、溶解，漸由肉芽組織取代的不可逆的心血管疾?。?-2］。有數(shù)據(jù)顯示，目前我國(guó)心血管病患病人數(shù)約2. 9 億，該病死亡率占所有疾病的40%，位居第一，其中，MI是風(fēng)險(xiǎn)最高的危險(xiǎn)因素［3］，其死亡率在我國(guó)呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人們的生命健康［4-5］。

目前，臨床上采用藥物溶栓、心肌再灌注、心臟再同步化及左室輔助裝置等方法治療MI，可在一定程度上改善心肌缺血，降低心肌耗氧量，緩解患者急性期的臨床癥狀［6］，但并不能從根本上減少心肌細(xì)胞的丟失及后期心室的不良重塑［7］。有研究認(rèn)為，在一定程度上控制炎癥反應(yīng)可減少心肌細(xì)胞丟失，對(duì)MI 后不良的心肌重塑有一定保護(hù)作用［8-10］。因此，對(duì)MI 早期炎癥反應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)干預(yù)是治療MI 的一條有效途徑。MI 后心臟的炎癥反應(yīng)期是MI 修復(fù)的始動(dòng)期［11］，死亡的心肌細(xì)胞會(huì)激活機(jī)體的先天免疫系統(tǒng)，一方面，白細(xì)胞趨化至損傷部位，造成鄰近心肌細(xì)胞的急性壞死；另一方面，炎性細(xì)胞清除壞死細(xì)胞及基質(zhì)碎片，為組織修復(fù)奠定基礎(chǔ)［12］。MI 后長(zhǎng)期過(guò)度的炎癥反應(yīng)使組織嚴(yán)重?fù)p傷、心室不良重塑及心功能惡化，最終將導(dǎo)致心室壁瘤、心臟破裂、心力衰竭，甚至猝死等惡性不良事件［13-15］。目前，臨床上對(duì)無(wú)菌性炎癥反應(yīng)的調(diào)控尚無(wú)抗炎特效藥，研究表明，給予適量地塞米松（dexamethasone，Dex）預(yù)處理，可減少心梗面積、心臟肌鈣蛋白I 的釋放及心肌細(xì)胞的凋亡，對(duì)心臟有一定的保護(hù)效應(yīng)，其機(jī)制可能與其促進(jìn)白介素-10（interleukin-10，IL-10）分泌有關(guān)［16-18］，但糖皮質(zhì)激素不可長(zhǎng)期使用［19-20］。因此，尋找針對(duì)無(wú)菌性炎癥的抗炎藥物對(duì)治療MI 顯得尤為重要。

蠕蟲(chóng)體內(nèi)的半胱氨酸蛋白酶抑制劑（cystatin）是半胱氨酸蛋白酶的高效抑制劑，其在蠕蟲(chóng)體內(nèi)分布廣泛，具有抑制蛋白酶活性、阻礙抗原提呈、調(diào)控抗炎因子和誘導(dǎo)抑炎特性的M2 型巨噬細(xì)胞生成等作用，利于發(fā)揮抗炎效應(yīng)，對(duì)炎癥性疾病具有較好的治療效果［21-23］。有報(bào)道表明，日本血吸蟲(chóng)（Schistosoma japonicum）重組 cystatin（rSjcystatin）對(duì)結(jié)腸炎、膿毒癥、關(guān)節(jié)炎和Ⅰ型糖尿病的治療效果顯著，但對(duì)MI產(chǎn)生炎癥的療效尚未明確［23-26］，且rSjcystatin 對(duì)不同程度的炎癥疾病，使用劑量也有差異。因此本研究通過(guò)建立MI 小鼠模型，監(jiān)測(cè)小鼠生存率、心臟黏連率、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化，評(píng)價(jià)rSjcystatin 對(duì)MI 療效的影響，并檢測(cè)小鼠血清中炎性因子的水平，初步探討rSjcystatin 治療MI 的可能機(jī)制，以期為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 主要試劑及儀器 PBS 購(gòu)自美國(guó)HyClone 公司；HE 染色試劑盒及Masson 三色染色液試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；兔抗CD45 單克隆抗體（#70257）購(gòu)自美國(guó) Cell Signaling Technology 公司；PV-9001 兔二步法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-6 和 IL-10 ELISA 試劑盒購(gòu)自上海達(dá)科為生物技術(shù)有限公司；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）ELISA 試劑盒購(gòu)自中國(guó)ABclonal 公司；rSjcystatin 蛋白由安徽省蚌埠醫(yī)學(xué)院楊小迪教授惠贈(zèng)；小動(dòng)物高分辨率成像超聲儀器購(gòu)自中國(guó)S-Sharp 公司。

1. 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)C57BL ／ 6J 小鼠，雄性，約8周齡，體重20 ~ 22 g，購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)為：SCXK（晉）2015-0001。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程符合山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理學(xué)相關(guān)法規(guī)及各項(xiàng)規(guī)定，且獲得倫理委員會(huì)認(rèn)可。

1. 3 小鼠MI 模型的建立 用異氟烷氣體麻醉小鼠，仰臥位固定，于左胸剪一斜型切口，止血鉗鈍性分離肌肉組織，于第4 肋間隙將心臟暴露于胸外，用外科手術(shù)線阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支，心尖部成為白色即造模成功。

1. 4 動(dòng)物分組及給藥 將C57BL ／ 6J 小鼠隨機(jī)分為4 組：Sham 組（心臟左冠狀動(dòng)脈前降支不結(jié)扎）、PBS 組（建模后 1、3、5、7、14、28 d 分別經(jīng)腹腔注射 PBS，0. 1 mL ／ 只）及 10、25 μg rSjcystatin 治療組（建模后1、3、5、7、14、28 d 分別經(jīng)小鼠腹腔注射含 10 及 25 μg rSjcystatin 蛋白的 PBS 混合液，0. 1 mL ／ 只）。Sham組8 只小鼠，其他每組均25 只。上述各組小鼠用于存活率的計(jì)算。相同方法另建PBS 組及10、25 μg rSjcystatin 治療組，用于小鼠心功能、心臟黏連、心室結(jié)構(gòu)重塑情況、心臟損傷、心臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度及血清中炎癥因子水平的檢測(cè)。

1. 5 小鼠存活率的計(jì)算 MI 術(shù)后28 d，統(tǒng)計(jì)小鼠存活數(shù)量，并按下式計(jì)算各組小鼠的存活率。

小鼠存活率（%）=每組小鼠存活只數(shù)／每組小鼠總數(shù)×100%

1. 6 小鼠心功能的檢測(cè) MI 術(shù)后 1、3、7、14、28 d，將 PBS 組及 10、25 μg rSjcystatin 治療組小鼠經(jīng)異氟烷麻醉，仰臥固定于超聲臺(tái)，調(diào)節(jié)超聲探頭角度置左心室，在M Mode 狀態(tài)下從左室乳頭肌水平二維左室短軸切面分別記錄左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）、左室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diameter，LVID，d）及心率（heart rate，HR）。

1. 7 小鼠心臟黏連情況的檢測(cè) MI 術(shù)后28 d 心功能檢測(cè)后，開(kāi)胸，用注射器逆行插入主動(dòng)脈將PBS 推注心臟血管，至心腔血液沖洗干凈，再用中性福爾馬林推注，結(jié)扎血管叢，取心臟，置中性福爾馬林溶液，固定24 ~ 48 h，觀察黏連情況，并按下式計(jì)算心臟前壁與胸壁的黏連率。

心臟黏連率（%）= 每組心臟黏連小鼠只數(shù) ／ 每組小鼠只數(shù) × 100%

1. 8 小鼠心室結(jié)構(gòu)重塑情況的檢測(cè) 采用Masson染色法。將1. 7 項(xiàng)摘取的小鼠（各組取5 只）心臟組織冠狀切開(kāi)，保留梗死部分，進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋，切成厚度為 3 ~ 4 μm 的切片，60 ℃烤片，室溫干燥。石蠟切片置65 ℃干燥箱干燥約50 min，采用Masson 三色染色液試劑盒進(jìn)行脫蠟水化及Weigert 鐵蘇木素、麗春紅品紅、苯胺藍(lán)染色，封片。應(yīng)用Image Pro Plus 6. 0 軟件測(cè)量各組小鼠MI 術(shù)后28 d 心臟梗死面積百分比及左心室游離壁厚度。

1. 9 小鼠心臟損傷情況的檢測(cè) 采用HE 染色法。于 MI 術(shù)后 1、3、7 d，PBS 組及 10、25 μg rSjcystatin治療組各取5 只小鼠，按1. 8 項(xiàng)方法制備心臟組織石蠟切片，采用HE 染色試劑盒進(jìn)行蘇木素、伊紅染色后封片，置熒光倒置顯微鏡下拍照，觀察心臟組織結(jié)構(gòu)的變化及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的情況。

1. 10 小鼠心臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度的檢測(cè) 采用免疫組化染色法。將1. 9 項(xiàng)制備的石蠟切片置65 ℃干燥箱干燥約30 min；常規(guī)脫蠟，PBS 洗滌2 次，EDTA抗原修復(fù)20 min；室溫冷卻，PBS 洗滌3 次；滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑（PV-9001 兔二步法檢測(cè)試劑盒自帶），避光封閉 20 min；PBS 洗滌 3 次，加入兔抗 CD45 單克隆抗體（1 ∶200 稀釋），于 4 ℃濕盒孵育過(guò)夜；室溫放置30 min，PBS 洗滌3 次，加入二抗反應(yīng)增強(qiáng)液，避光孵育30 min；PBS 洗滌3 次，加入羊抗兔IgG（PV-9001 兔二步法檢測(cè)試劑盒自帶），避光孵育 1 h；PBS 洗滌 3 次，DAB 顯色，蘇木素染色 35 s，三蒸水洗滌，滴加分化液，變淺藍(lán)即刻放入PBS 中，脫水透明，封片。應(yīng)用Image J 軟件測(cè)量棕黃色炎性細(xì)胞顆粒的平均光密度值。

1. 11 小鼠血清中炎癥因子水平的檢測(cè) 采用ELISA法。于 MI 術(shù)后 7 d，PBS 組及 25 μg rSjcystatin 治療組各取5 只小鼠，經(jīng)眼球采血，分離血清，采用相應(yīng)ELISA 試劑盒檢測(cè)小鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β1 的含量。

1. 12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用GraphPad Prism 6. 01 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)均采用均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤（mean ± SEM）表示，兩組間生存率的比較采用Log-rank（Mantel-Cox）檢驗(yàn)，其他結(jié)果多組間差異的比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩組間差異的比較采用t 檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠的存活率 MI 術(shù)后 28 d，Sham 組小鼠 8 只全部存活，PBS 組、10 及 25 μg rSjcystatin 治療組分別死亡7、3 和2 只小鼠，存活率分別為72%、88%和92%。與 PBS 組比較，10 和 25 μg rSjcystatin 治療組小鼠存活率均呈上升趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t 分別為 2. 082 和 3. 149，P > 0. 05），見(jiàn)圖 1。小鼠死亡主要發(fā)生在MI 術(shù)后7 d 內(nèi)，其原因主要為左心室壁梗死變薄，在左室應(yīng)力作用下破裂出血，導(dǎo)致胸腔積血。

圖1 MI 術(shù)后各組小鼠的存活率Fig. 1 Survival rates of mice in various groups after MI

2. 2 小鼠的心功能 MI 術(shù)后28 d，PBS 組超聲圖前后室壁活動(dòng)范圍小，尤其是前壁的運(yùn)動(dòng)，室腔明顯變大；與 PBS 組比較，10 及 25 μg rSjcystatin 治療組室壁的運(yùn)動(dòng)功能明顯改善，且后者的左室前壁活動(dòng)幅度明顯大于前者，見(jiàn)圖2。3 組小鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的HR 總體維持在約430 次 ／ min，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 0. 104 ~ 3. 132，P > 0. 05）。MI 術(shù)后 28 d，25 μg rSjcystatin 治療組的 LVFS 及 LVEF 顯著高于PBS 組和 10 μg rSjcystatin 治療組（t=2.809~4.212，P < 0. 05）；10 和 25 μg rSjcystatin 治療組的 LVID，d均顯著低于 PBS 組（t 分別為 2.778 和 3.650，P<0.05），但兩者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 0.535，P﹥0. 05）。見(jiàn)圖3。表明rSjcystatin 可有效改善MI 后心室壁運(yùn)動(dòng)及左心室血流動(dòng)力學(xué)變化，利于心臟功能活動(dòng)，25 μg 治療劑量的效果優(yōu)于 10 μg。

圖2 MI 術(shù)后28 d 各組小鼠的心臟超聲圖Fig. 2 Echocardiography of hearts of mice in various groups 28 d after MI

圖3 各組小鼠的心功能情況Fig. 3 Cardiac function of mice in various groups

2. 3 小鼠的心臟黏連率 PBS組、10和25μgrSjcystatin治療組小鼠的心臟黏連率分別為44. 44%（8 ／ 18）、40.91%（9 ／22）和 17.39%（4 ／23），表明 rSjcystatin 治療可降低MI 后小鼠心臟的黏連率，25 μg 治療劑量的效果優(yōu)于10 μg。

2. 4 小鼠心室結(jié)構(gòu)的重塑 兩個(gè)劑量rSjcystatin治療組藍(lán)色膠原纖維區(qū)域明顯少于PBS 組，見(jiàn)圖4。PBS 組、10 和 25μg rSjcystatin 治療組的左室梗死面積百分比分別為（21. 00 ± 2. 40）%、（15. 80 ± 1. 96）%和（10. 13 ± 0. 66）%，25 μg rSjcystatin 治療組顯著低于 PBS 組和 10 μg rSjcystatin 治療組（t 分別為 3. 483和 2. 744，P 分別 < 0. 01 和 0. 05）。PBS 組、10 和25 μg rSjcystatin 治療組的左室游離壁厚度分別為（109.6 ± 2.97）、（156.3 ± 7.28）和（200.1 ± 4.72）mm，與 PBS 組比較，10 和 25 μg rSjcystatin 治療組明顯升高（t 分別為 7. 087 和 15. 830，P < 0. 001），后者顯著高于前者（t = 5. 055，P < 0. 001）。表明rSjcystatin 可顯著改善MI 后小鼠心臟的纖維化程度、梗死范圍與室壁厚度，25 μg 治療劑量的效果優(yōu)于 10 μg。

圖4 各組小鼠心臟切片的Masson 染色圖（標(biāo)尺為：1 000 μm）Fig. 4 Masson staining of heart section of mice in various groups（bar = 1 000 μm）

2. 5 小鼠心臟損傷情況 MI 術(shù)后 1、3、7 d，與 PBS組比較，10 及 25 μg rSjcystatin 治療組心肌組織損傷減輕、心肌纖維疏松斷裂程度和藍(lán)色炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，見(jiàn)圖5。表明MI 術(shù)后7 d，rSjcystatin 腹腔治療可適度減弱MI 后的心臟損傷。

圖5 各組小鼠心臟切片的HE 染色圖（標(biāo)尺為：200 μm）Fig. 5 HE staining of heart section of mice in various groups（bar = 200 μm）

2. 6 小鼠心臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度 MI 術(shù)后1、3 d，25 μg rSjcystatin 治療組棕黃色炎性細(xì)胞顆粒平均光密度值明顯低于 PBS 組（t 分別為 5.501 和 4.825，P<0. 05），10 μg 與 25 μg rSjcystatin 治療組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t 分別為 2.177 和 1.747，P<0.05）；MI 術(shù)后 7d，25 μg rSjcystatin 治療組顯著低于 PBS 組和 10 μg rSjcystatin 治療組（t 分別為 3.806 和 12.710，P 分別 <0. 05 和 < 0. 001），見(jiàn)圖6 和圖7。表明建模后7 d，rSjcystatin 腹腔治療可適度減弱MI 后損傷部位的炎性細(xì)胞聚集浸潤(rùn)程度，防止炎癥過(guò)度對(duì)心臟的損害，25 μg 治療劑量的效果優(yōu)于 10 μg。

圖6 各組小鼠心臟切片免疫組化染色圖（標(biāo)尺為：500 μm）Fig. 6 Immunohistochemical staining of heart sections of mice in various groups（bar = 500 μm）

圖7 各組小鼠心臟棕黃色陽(yáng)性顆粒的平均光密度值Fig. 7 Mean optical density of brown yellow positive granules in heart of mice in various groups

2. 7 血清中炎癥因子水平 MI 術(shù)后7 d，與PBS 組比較，25 μg rSjcystatin 治療組小鼠血清 TNF-α 和IL-6 含量顯著降低（t 分別為 2. 527 和 27. 460，P 分別為 < 0. 05 和 < 0. 01），TGF-β1 含量顯著升高（t =9. 069，P < 0. 001），IL-10 含量呈升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 0. 556，P > 0. 05），見(jiàn)表 1。表明建模后7 d，25 μg rSjcystatin 可調(diào)控小鼠血清中的炎癥因子水平，適度減少促炎因子分泌，且增加抗炎因子分泌，利于減輕MI 時(shí)炎癥對(duì)組織的損傷，加強(qiáng)心肌修復(fù)。

表1 小鼠血清中炎癥因子的表達(dá)水平（pg ／ mL，，n = 5）Tab.1 Expression levels of cytokines in sera of mice（pg ／mL，，n = 5）

表1 小鼠血清中炎癥因子的表達(dá)水平（pg ／ mL，，n = 5）Tab.1 Expression levels of cytokines in sera of mice（pg ／mL，，n = 5）

注：與 PBS 組比較，a 表示 P<0.05，aa 表示 P<0.01，aaa 表示 P<0. 001。

組別 TNF-α IL-6 TGF-β1 IL-10 25 μg rSjcystatin 治療組 26. 95 ± 3. 93a 2. 38 ± 0. 03aa 42 739 ± 1 705aaa 61. 41 ± 19. 35 PBS 組 47. 75 ± 0. 01 3. 91 ± 0. 05 24 133 ± 1 142 49. 58 ± 8. 86

3 討 論

cystatin 是一類分布廣泛的半胱氨酸內(nèi)肽酶抑制劑，可保護(hù)細(xì)胞免受蛋白酶的降解，參與機(jī)體的免疫、感染及細(xì)胞凋亡等生理病理過(guò)程，cystatin 依據(jù)氨基酸序列被分為 Stefins、Cystatins 和 Kininogens 3 大家族［27］。通過(guò)基因工程技術(shù)可制備大量活性較好的蠕蟲(chóng)cystatin 蛋白，使用時(shí)劑量易控制，且安全性較好，無(wú)明顯毒副作用［28-29］。cystatin 蛋白可通過(guò)上調(diào)抗炎細(xì)胞因子，下調(diào)促炎細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)T 細(xì)胞反應(yīng)及促進(jìn)巨噬細(xì)胞的極化來(lái)調(diào)控機(jī)體的免疫反應(yīng)，在結(jié)腸炎、膿毒癥、關(guān)節(jié)炎和Ⅰ型糖尿病等炎癥性疾病的治療過(guò)程中療效顯著［23-24，30］。本研究結(jié)果表明，MI 模型小鼠經(jīng)rSjcystatin 多次腹腔注射治療后，可顯著減輕心臟與胸壁的黏連程度，減少心肌損傷（P <0. 05），改善MI 小鼠的心功能，同時(shí)緩解MI 后的心肌重構(gòu)（P<0.05），具有一定的心肌保護(hù)效應(yīng)，25 μg rSjcystatin 的治療及保護(hù)效果優(yōu)于10 μg。

rSjcystatin 可通過(guò)影響組織炎性細(xì)胞的水平來(lái)發(fā)揮其抗炎作用［31］。研究表明，rSjcystatin 可減少膿毒癥小鼠的單核細(xì)胞活化［23］；絲蟲(chóng)來(lái)源的cystatin治療哮喘后可顯著減少炎癥細(xì)胞，尤其是嗜酸性粒細(xì)胞向肺組織的募集，從而減輕局部組織損傷［20］；華支睪吸蟲(chóng)和馬來(lái)絲蟲(chóng)的cystatin 能夠使結(jié)腸炎小鼠的炎癥明顯減輕，其機(jī)制與激活腸道內(nèi)M2 型巨噬細(xì)胞，參與組織修復(fù)有關(guān)［32］。已知CD45 分子在白細(xì)胞上均有表達(dá)，是反映炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況的重要標(biāo)記物，因此本實(shí)驗(yàn)用其反映炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。本研究結(jié)果顯示，rSjcystatin 治療MI 小鼠后，可在一定程度上減輕MI 局部炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，尤其是炎癥早期的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，降低炎癥活性物質(zhì)釋放所產(chǎn)生的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而防止缺血心肌的慢性病理?yè)p害，可在一定程度上延緩心室壁變薄的進(jìn)程，對(duì)心衰的發(fā)生有一定延緩作用。cystatin 的抗炎作用可通過(guò)影響血清炎癥因子水平實(shí)現(xiàn)［33-35］。有研究發(fā)現(xiàn)，用rSjcystatin 治療小鼠結(jié)腸炎，可促炎細(xì)胞因子TNF-α 及IL-6 明顯下調(diào)（P < 0. 05），抗炎細(xì)胞因子 IL-10 及TGF-β 呈上調(diào)的趨勢(shì)［25］。另外，rSjcystatin 能通過(guò)增加調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的數(shù)量，抑制IFNγ 的分泌，同時(shí)增加 IL-10、TGF-β 的表達(dá)，改善Ⅰ型糖尿病的預(yù)后［22］。還有學(xué)者證實(shí)，rSjcystatin 對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的緩解作用與 IL-4、IL-10 升高及 IFNγ、IL-6、IL-17、TNF-α 等促炎因子的顯著降低均密切相關(guān)［24］。本研究結(jié)果提示，25 μg rSjcystatin 治療 MI 可明顯下調(diào)促炎因子TNF-α 和 IL-6（P<0.05），明顯上調(diào)抗炎因子 TGF-β1（P < 0. 001），可上調(diào)IL-10 水平，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0. 05），從而減輕心臟過(guò)度的炎癥損害，為后期的修復(fù)組織奠定了環(huán)境基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)rSjcystatin 治療小鼠MI 后，可適度減弱炎細(xì)胞浸潤(rùn)、降低促炎因子TNF-α 和IL-6的分泌、增加抗炎因子IL-10 和TGF-β1 的分泌，從而抑制MI 后的炎癥反應(yīng)，在一定程度上延緩小鼠MI 后心肌結(jié)構(gòu)及功能重構(gòu)的發(fā)生，具有一定的心肌保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)為rSjcystatin 應(yīng)用于臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。