梁運(yùn)霞，張玉文，秦珍珠，王丹，豆穎，邱曉娣

（商丘市第一人民醫(yī)院病理科，商丘 476100）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居?jì)D科三大惡性腫瘤第二位，死亡率位居首位[1]。因卵巢位于盆腔深部，早期診斷困難，預(yù)后差，復(fù)發(fā)率達(dá)60%～70%[2]，5年生存率僅25%～30%[3]。卵巢癌病理類型較多，其中上皮性卵巢癌是最常見的病理類型，約占90%[4]，可進(jìn)一步分為漿液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、透明細(xì)胞癌和內(nèi)膜樣癌等[5]。卵巢癌早期篩查主要依靠婦科超聲和血清腫瘤標(biāo)志物CA125[6]，但卵巢腫瘤早期超聲篩查難以發(fā)現(xiàn)，CA125雖然在卵巢癌患者具有特異性，但部分良性腫瘤和絕經(jīng)后患者也可異常升高，并不能作為早期診斷、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可靠指標(biāo)[7]。因此，需要尋找新的腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物，做到早期診斷和早期治療。本組研究選取卵巢癌患者信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子2（signal transducer and activator of transcription 2, STAT2）、腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD24、CD44的表達(dá)水平與其臨床病理特征相關(guān)性分析。

資料與方法

1 研究對(duì)象

選取2017年1月至2020年2月我院病理科確診的卵巢癌患者69例，設(shè)為卵巢癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①為首次確診；②病理診斷明確，參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定標(biāo)準(zhǔn)[11]；③本研究患者充分知情同意；④隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前有放化療史；②合并其它惡性腫瘤。卵巢癌組患者年齡35～72歲，平均年齡（54.6±8.2）歲；按照國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)聯(lián)盟（ International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）標(biāo)準(zhǔn)分期[12]：（Ⅰ+Ⅱ）期22例，（Ⅲ+Ⅳ）期47例；病理類型：漿液性癌53例，粘液性癌7例，內(nèi)膜樣癌5例，透明細(xì)胞癌4例；分化程度：高分化15例，中分化35例，低分化19例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移39例，無(wú)轉(zhuǎn)移30例；腹水：有腹水41例，無(wú)腹水28例。并收集同期卵巢良性上皮組織腫瘤患者32例為良性對(duì)照組，年齡32～70歲，平均年齡（52.1±8.9）歲。兩組患者平均年齡差別無(wú)顯著性，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批號(hào)：2016-005）。

2 主要試劑

兔抗人STAT2單克隆抗體（Abcam，ab134192），小鼠抗人CD24單克隆抗體（Abcam，ab134234），小鼠抗人 CD44單克隆抗體（Abcam，ab134678），生物素化羊抗小鼠IgG二抗（北京佰瑞達(dá)生物科技，SA0103B），DAB顯色劑（DAKO，K5007）。

3 免疫組織化學(xué)染色

應(yīng)用鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶（SP）法免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)兩組患者卵巢組織中STAT2、CD24和CD44表達(dá)。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行[13]，卵巢病變組織常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片（4μm厚），依次梯度降酒精水化、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）漂洗、抗原熱修復(fù)、PBS漂洗后入一抗（1:200）4 ℃孵育過夜，PBS漂洗后入二抗（1:1000）、DAB呈色、蘇木精復(fù)染后，梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

4 判定標(biāo)準(zhǔn)

由兩名有5年以上工作經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師采用半定量法[14]進(jìn)行評(píng)分，判定不一致時(shí)，取平均值。根據(jù)染色強(qiáng)度分為：0分，無(wú)染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，褐色或深棕色。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分：1分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比在11%～50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比在51%～75%；4分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比在＞75%。染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，組間資料比較采用卡方檢驗(yàn)（χ2）；以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 卵巢癌中STAT2、 CD24和CD44表達(dá)率增高

免疫組織化學(xué)染色顯示，卵巢癌組STAT2、CD24和CD44陽(yáng)性表達(dá)率分別高于良性對(duì)照組（見表1）。卵巢癌組STAT2主要表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，CD24蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜邊緣部位，CD44蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，染色呈棕黃色或深棕色；良性對(duì)照組無(wú)染色或呈淡黃色（圖1）。

圖1 STAT2、 CD24和CD44在卵巢良、惡性腫瘤中表達(dá)的免疫組織化學(xué)檢測(cè)。A，卵巢癌組STAT2；B，卵巢癌組CD24；C，卵巢癌組CD44；D，良性對(duì)照組STAT2；E，良性對(duì)照組CD24；F，良性對(duì)照組CD44；比例尺，10μmFig.1 Immunohistochemical examination of the expression of STAT2, CD24 and CD44 in benign and malignant tumors of ovarian. A, STAT2 in the ovarian cancer group; B, CD24 in the ovarian cancer group; C, CD44 in the ovarian cancer group; D, STAT2 in the benign control group; E, CD24 in the benign control group; F, CD44 in the benign control group; scale bar, 10μm

表1 兩組患者STAT2、CD24和CD44蛋白陽(yáng)性表達(dá)率Tab.1 Positive expression rate of STAT2, CD24 and CD44 protein in the two groups

2 STAT2、 CD24和CD44表達(dá)與卵巢癌病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水相關(guān)

卡方檢驗(yàn)顯示：STAT2、 CD24和CD44陽(yáng)性率與卵巢癌患者年齡、病理類型無(wú)顯著相關(guān)，但與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水顯著相關(guān)，即在（Ⅲ+Ⅳ）期陽(yáng)性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化陽(yáng)性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高于未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有腹水患者陽(yáng)性率高于無(wú)腹水患者（表2）。

表2 STAT2、 CD24和CD44與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)分析Tab.2 Analysis of STAT2, CD24 and CD44 expression and clinicopathological parameters of patients with ovarian cancer

臨床病理參數(shù) n STAT2(n=47) CD24(n=45) CD44(n=51)陽(yáng)性率 χ2 P 陽(yáng)性率 χ2 P 陽(yáng)性率 χ2 P低分化 19 17(89.47) 17(89.47) 18(94.74)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 5.341 0.021 11.206 0.001 5.329 0.021有39 31(79.49) 32(82.05) 33(84.62)無(wú)30 16(53.33) 13(43.33) 18(60.00)腹水 4.590 0.032 4.810 0.028 4.257 0.039有41 32(78.05) 31(75.61) 34(82.93)無(wú)28 15(53.57) 14(50.00) 17(60.71)

3 術(shù)后分析

術(shù)后隨訪表明：卵巢癌組患者1年總生存率為78.26%（54/69），STAT2、CD24和CD44陽(yáng)性者1年生存率為72.34%、71.11%和74.51%，均低于STAT2、CD24和CD44陰性者1年生存率90.91%、91.67%和88.89%，其中CD24陽(yáng)性性1年生存率低于CD24陰性患者1年生存率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。

表3 STAT2、 CD24和CD44蛋白不同表達(dá)患者1年生存率Tab.3 One-year survival rate of patients with different expression level of STAT2, CD24 and CD44

討 論

卵巢癌的發(fā)生發(fā)展主要與長(zhǎng)期的性激素受體敏感性改變以及家族易感基因攜帶有關(guān)，尤其在45歲以后伴有卵巢癌家族史的人群中發(fā)病率進(jìn)一步升高[15]、全球每年有239 000例新發(fā)病例，152 000例死亡病例[16]。臨床上一直缺乏早期有效的診斷，約75%的患者出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)為中晚期[17]，失去手術(shù)根治機(jī)會(huì)[18]。盡管近年卵巢癌的手術(shù)和化療取得較大進(jìn)展，以及新的靶向藥物的問世[19]，患者生存期得到不斷延長(zhǎng)，但早期診斷仍然比較困難，患者術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[20]。針對(duì)卵巢癌發(fā)病機(jī)制從分子水平研究致病相關(guān)基因，尋找新的治療靶點(diǎn)是臨床研究熱點(diǎn)。腫瘤干細(xì)胞的提出，為卵巢癌早期診斷提供新的思路。2005年，Bapat首次證實(shí)卵巢癌組織中存在腫瘤干細(xì)胞，可能來(lái)源于卵巢表面上皮，當(dāng)細(xì)胞DNA損傷無(wú)法修復(fù)時(shí)，可轉(zhuǎn)化為腫瘤干細(xì)胞。

細(xì)胞粘附分子是一類可以介導(dǎo)細(xì)胞間，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用的分子的統(tǒng)稱[21]。STAT2是STATs家族重要成員，是構(gòu)成JAK-STAT信號(hào)通路的重要組成，是最常見腫瘤干細(xì)胞之一，可介導(dǎo)多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在免疫、炎癥反應(yīng)、抗病毒、腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤耐藥等多種生物學(xué)行為發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)與卵巢癌密切相關(guān)[22]。CD24是一種糖蛋白，不僅參與人體正常生理過程，在乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤可呈過表達(dá)狀態(tài)，可能與腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)，既往有關(guān)于CD24參與卵巢癌發(fā)病過程報(bào)道，但是其與臨床病理資料相關(guān)性鮮有研究[23]。CD44屬于跨膜糖蛋白，是卵巢癌腫瘤干細(xì)胞的一種，在多種惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程高表達(dá)，在卵巢癌腫瘤干細(xì)胞同樣高表達(dá)，介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞生存、生長(zhǎng)和種植轉(zhuǎn)移的重要信號(hào)分子[24]。

本組研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組患者STAT2、CD24和CD44陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性對(duì)照組，提示STAT2、CD24和CD44蛋白可能為卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，STAT2、CD24和CD44蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平與年齡、病理類型無(wú)顯著相關(guān)性，而與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水顯著相關(guān)，即在（Ⅲ+Ⅳ）期陽(yáng)性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化陽(yáng)性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高于未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有腹水患者陽(yáng)性率高于無(wú)腹水患者，再次佐證其高表達(dá)可能在卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌細(xì)胞播散等病理過程發(fā)揮一定作用。此外，尤其是CD24陽(yáng)性表達(dá)患者1年生存率顯著低于CD24陰性表達(dá)患者，說明CD24高表達(dá)可能為潛在預(yù)后不良標(biāo)志物；STAT2和CD44表達(dá)與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水的相關(guān)性還需要收集更多樣本研究證明。

卵巢癌患者STAT2、CD24和 CD44表達(dá)水平明顯高于卵巢良性腫瘤患者的結(jié)果除了提示其可作為卵巢癌患者腫瘤標(biāo)志物外，還提示下調(diào)其（尤其是CD24）表達(dá)水平可能成為卵巢癌治療的潛在靶點(diǎn)。