文/戴旭平 王靜波 徐立蒲* 王小亮 王澎 葉仕根

本文研究了在飼料中添加益生菌發(fā)酵的黃芪對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)性能和成活率的影響。將益生菌發(fā)酵的黃芪投喂給體重為（19±1）g的雜交鱘，試驗(yàn)設(shè)8個(gè)組，每組14尾～18尾，設(shè)3個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示，飼料中添加發(fā)酵黃芪對(duì)雜交鱘的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著影響，但發(fā)酵黃芪添加量為5‰～10‰時(shí)，可有效提高雜交鱘的成活率。

我國(guó)是世界鱘魚養(yǎng)殖大國(guó)，雜交鱘是主養(yǎng)品種。然而，隨著雜交鱘養(yǎng)殖密度增高，水環(huán)境惡化、病害頻發(fā)、抗生素使用過(guò)度等問(wèn)題威脅到鱘魚養(yǎng)殖行業(yè)健康發(fā)展。目前已報(bào)道的鱘魚致病菌有嗜水氣單胞菌Aeromonas hydrophila、豚鼠氣單胞菌Aeromonas carvia、類志賀鄰單胞菌Plesiomonas shigelloides、停乳鏈球菌Streptococcus dysgalactiae和海豚鏈球菌Streptococcus iniae等。其中鏈球菌引起的疾病尤為嚴(yán)重，尚無(wú)有效防治藥物。黃芪是常用的補(bǔ)氣中草藥，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激等功效，但由于其有效成分難以被動(dòng)物機(jī)體吸收利用，因此，提高藥效是目前亟待解決的問(wèn)題。益生菌發(fā)酵中藥能夠溶出有效活性成分，增強(qiáng)藥效，兩者相輔相成。本試驗(yàn)旨在研究益生菌發(fā)酵的黃芪對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)性能及成活率的影響，為發(fā)酵中藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）主要儀器

超凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。其它還有電磁爐、移液槍、電子天平、顯微鏡、三角瓶、培養(yǎng)皿、接種環(huán)等。

（二）益生菌、黃芪等

益生菌為枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和糞腸球菌Enterococcus faecalis，取自北京市水產(chǎn)技術(shù)推廣站實(shí)驗(yàn)室，另準(zhǔn)備黃芪和發(fā)酵培養(yǎng)基麥麩。

（三）攻毒用菌種

海豚鏈球菌，為北京市水產(chǎn)技術(shù)推廣站實(shí)驗(yàn)室保存。

（四）試驗(yàn)魚

雜交鱘購(gòu)自河北省涿州市高英宇隆水產(chǎn)養(yǎng)殖有限責(zé)任公司，體重（19±1）g。

（五）飼料

飼料營(yíng)養(yǎng)成分為：粗蛋白質(zhì)≥48.0%，粗脂肪≥8.0%，粗纖維≤5.0%，粗灰分≤1 4.0%，水分≤1 2.0%，賴氨酸≥2.6%，總磷≥0.9%。

（六）試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.養(yǎng)殖管理

將購(gòu)回的雜交鱘在室內(nèi)水族箱（規(guī)格：0.7m×0.5m×0.45m；1m×0.5m×0.45m）中暫養(yǎng)7d，暫養(yǎng)期間每日按體重1%投喂1次配合飼料。7d后挑選規(guī)格整齊，健康的鱘魚410尾，隨機(jī)分為8個(gè)試驗(yàn)組（T0、T5、T10、T20、T40、TY、TH、TJ），每組14尾～18尾（按水族箱規(guī)格投放不同尾數(shù)），設(shè)3個(gè)平行，共24個(gè)組。

對(duì)照組T0和疫苗組TY投喂配合飼料；疫苗組TY將1.0×109cfu/mL鏈球菌用甲醛溶液于28℃滅活48h。鏈球菌滅活疫苗浸泡免疫鱘魚終濃度將為1.0×106cfu/mL；發(fā)酵中藥組（T5、T10、T20、T40）投喂的飼料分別按5‰、10‰、20‰、40‰添加發(fā)酵黃芪；黃芪添加組TH按飼料的1%添加破碎后的黃芪；益生菌組TJ以兩種益生菌（枯草芽孢桿菌、糞腸球菌）按1:1混合后按1%添加。每天投喂2次，日投喂率2%。

試驗(yàn)期間用充氣泵增氧，保持溶氧5.9mg/L～8.2mg/L，水溫控制在（21±1）℃，pH7.8～8.2。每日清污，每2d換水1次，換水量1/4，試驗(yàn)持續(xù)19d。試驗(yàn)結(jié)束后，每尾稱重并記錄尾數(shù)，用于計(jì)算生長(zhǎng)性能指標(biāo)、增重率。

2.攻毒試驗(yàn)

每尾魚測(cè)量后，進(jìn)行鏈球菌攻毒。采用生長(zhǎng)16h的1.0×104cfu/mL鏈球菌菌液浸泡感染各組雜交鱘20min，再分裝至各水族箱中。每日觀察魚健康狀況，記錄感染魚癥狀，并及時(shí)撈出死亡個(gè)體，記錄死亡尾數(shù)及時(shí)間，對(duì)瀕死魚體組織進(jìn)行劃線培養(yǎng)細(xì)菌并采用API鑒定條鑒定。試驗(yàn)過(guò)程中水溫保持在（21±1）℃，養(yǎng)殖觀察14d。

（七）數(shù)據(jù)分析

成活率（%）=終末尾數(shù)／初始尾數(shù)×100

免疫保護(hù)率（%）=（1-試驗(yàn)組死亡率／對(duì)照組死亡率）×100

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0

式中：Wt——第t天后各組魚平均體重（g）；

W0——初始時(shí)各組魚平均體重（g）。采用SPSS v26.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

二、結(jié)果

（一）生長(zhǎng)指標(biāo)

如圖1所示，不同試驗(yàn)組雜交鱘的增重率由高到低依次為T20＞T40＞T0＞TJ＞T5＞T10＞TY＞TH，但各組之間差異不顯著（P＞0.05）（見(jiàn)表1）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明飼料中添加發(fā)酵黃芪對(duì)雜交鱘的增重效果不明顯（見(jiàn)圖1）。

表1 不同處理對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)性能的影響

圖1 不同處理對(duì)雜交鱘增重率的影響

（二）成活率和免疫保護(hù)率

雜交鱘感染鏈球菌后觀察14d，如圖2所示，不同試驗(yàn)組雜交鱘的成活率由高到低依次為T10＞T5＞TY＞T40＞T20＞TH＞T0＞TJ。益生菌組成活率低于對(duì)照組，對(duì)照組成活率低于黃芪組，但差異不顯著（P＞0.05）。疫苗組成活率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。所有發(fā)酵黃芪組的成活率均高于對(duì)照組，但僅5‰、10‰發(fā)酵黃芪組與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵黃芪與疫苗均能提高雜交鱘的成活率，且發(fā)酵黃芪的效果優(yōu)于疫苗。

圖2 不同處理對(duì)雜交鱘成活率的影響

由圖3可見(jiàn)，5‰、10‰發(fā)酵黃芪組和疫苗組的免疫保護(hù)率顯著高于對(duì)照組、益生菌組、黃芪組及20‰、40‰發(fā)酵黃芪組（P＜0.05），也高于疫苗組。試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加發(fā)酵黃芪能有效提高雜交鱘的成活率和免疫保護(hù)率，但其添加量與雜交鱘成活率和免疫保護(hù)率并不成正比，添加量為5‰～10‰時(shí)效果最佳。

圖3 不同處理對(duì)雜交鱘免疫保護(hù)率的影響

三、討論

（一）益生菌發(fā)酵黃芪對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

根據(jù)報(bào)道中草藥能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，如對(duì)羅非魚Oreochromis niloticus、紅笛鯛Lutjanus sanguineus、異育銀鯽Carassius auratus gibelio等都有促生長(zhǎng)作用。而朱傳忠等研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能改善生長(zhǎng)性能，但對(duì)增重率沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，該研究與本次試驗(yàn)結(jié)果相似，即對(duì)增重率沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。中草藥對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)作用的不同影響可能與中藥產(chǎn)地質(zhì)量、中藥配伍、魚的品種及養(yǎng)殖時(shí)間有關(guān)。同時(shí)，有研究表明，飼料中添加益生菌能促進(jìn)鱘魚生長(zhǎng)。而本研究益生菌試驗(yàn)組的增重率與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，推測(cè)可能與養(yǎng)殖時(shí)間較短有關(guān)。

謝炎福等認(rèn)為發(fā)酵中藥有促進(jìn)澎澤鯽Pengze crucian carp幼魚生長(zhǎng)，降低飼料用量的作用，其在飼料中添加0.3%益生菌發(fā)酵復(fù)方中藥飼喂黃河鯉Cyprinus carpio haematopterus，有明顯的促生長(zhǎng)及降低餌料系數(shù)的作用。然而，本研究結(jié)果表明增重率在試驗(yàn)組和對(duì)照組之間差異不顯著，其可能與發(fā)酵中藥種類、發(fā)酵菌株、實(shí)驗(yàn)魚品種及養(yǎng)殖時(shí)間有關(guān)。

（二）益生菌發(fā)酵黃芪對(duì)雜交鱘成活率的影響

有研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能提高鯽魚Carassius auratus、大菱鲆Scophthalmus maximus、草魚Ctenopharyngodon idellus等的免疫力，增強(qiáng)抗病力。劉慧玲等研究發(fā)現(xiàn)添加1.0×104cfu/mL枯草芽孢桿菌組的羅非魚魚苗成活率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；有研究顯示，濃度為9×109cfu/g的彎曲乳桿菌能提高波斯鱘Acipenser persicus的存活率。而本研究將黃芪與益生菌分別添加到飼料中均沒(méi)有顯著提高雜交鱘的成活率，中草藥和益生菌對(duì)鱘魚成活率的影響有待進(jìn)一步研究。

但中草藥經(jīng)發(fā)酵后，中草藥細(xì)胞中的營(yíng)養(yǎng)成分和有益成分容易被魚類利用。發(fā)酵有利于促進(jìn)中藥有效成分在魚體內(nèi)的吸收、運(yùn)輸和代謝，提高中藥藥效，改善中藥口味，分解部分有毒物質(zhì)。李澤鑫等研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵銀杏葉和發(fā)酵甘草能提高斜帶石斑魚Epinepheluscoioides在亞硝酸鹽脅迫下的耐受性和存活率。有研究顯示，高脂飼料中添加發(fā)酵中藥對(duì)草魚生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著影響，但能提高其養(yǎng)殖過(guò)程中的存活率和抗嗜水氣單胞菌感染能力，增強(qiáng)魚體的免疫機(jī)能。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵黃芪添加量在10‰的試驗(yàn)組，顯著降低了鏈球菌感染中的累計(jì)死亡率，提高了養(yǎng)殖成活率。表明發(fā)酵黃芪增強(qiáng)了雜交鱘的免疫力，提高了機(jī)體的抗病能力。而發(fā)酵中藥和中藥均有提高雜交鱘成活率、增強(qiáng)抗病力的作用，且發(fā)酵中藥的效果優(yōu)于中藥。

四、結(jié)論

飼料中添加益生菌發(fā)酵黃芪對(duì)雜交鱘的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著影響，但發(fā)酵黃芪添加量為5‰～10‰時(shí)，可提高雜交鱘抵抗鏈球菌感染的能力。