任 晶 閆錦慧 張安懿 閆宇星 王存存 李 林,2

(1太原師范學(xué)院化學(xué)系，晉中 030619)

(2山西省腐植酸工程技術(shù)研究中心，晉中 030619)

0 引 言

乳腺癌具有患者年輕化、發(fā)病率及死亡率高的特點(diǎn)，不僅威脅到個(gè)人身體健康和生命安全，而且嚴(yán)重影響我國(guó)乃至世界經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展[1]。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)2020年2月發(fā)布了全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告，這份報(bào)告顯示乳腺癌排在女性罹患癌癥的第一位。據(jù)IARC估計(jì)，到2040年全球乳腺癌確診患者人數(shù)將達(dá)到310萬(wàn)[2]。目前，手術(shù)和化療是治療乳腺癌最常用的方法[3?4]。然而，化療雖可殺滅腫瘤細(xì)胞，但在治療過(guò)程中，患者會(huì)出現(xiàn)身體疲乏、心臟中毒、肝功異常等情況，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，限制其在臨床上的廣泛應(yīng)用[5?6]。為了提供最優(yōu)化的腫瘤患者給藥治療方式，20世紀(jì)60年代中期研究者提出了藥物緩釋及靶向性治療策略[7]。即利用腫瘤和正常組織之間的高通透、高滯留(EPR)效應(yīng)、pH值差異性、谷胱甘肽含量不同等區(qū)別，將藥物定向轉(zhuǎn)運(yùn)到腫瘤組織，實(shí)現(xiàn)藥物對(duì)正常細(xì)胞的低毒副作用，從而有效提高癌癥治療效率[8?13]。

納米技術(shù)的出現(xiàn)為早日攻克癌癥提供了新的視野，利用納米材料的優(yōu)勢(shì)將抗癌藥物阿霉素(DOX，結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1)、順鉑、甲氨蝶呤、紫杉醇等設(shè)計(jì)為負(fù)載藥物輸送體系已經(jīng)成為研究熱潮[14?20]。例如：Rao等設(shè)計(jì)、合成了兩親性嵌段聚合物負(fù)載DOX的納米藥物輸送體系(COPY?DOX)，并且研究了它的抗腫瘤功效[21]。Fan等把水分散性好的富勒烯作為納米載體，制備出多功能性抗腫瘤前藥體系，該體系有主動(dòng)靶向性、光動(dòng)力治療和pH響應(yīng)化療3個(gè)特性[22]。盡管納米藥物輸送體系已經(jīng)被大量開(kāi)發(fā)，但其在腫瘤微環(huán)境中釋放藥物的特性卻不盡如人意，并且其抗腫瘤效果也比游離的DOX弱，且生物相容性也有待繼續(xù)研究。

圖1 DOX的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of DOX

Vallet?Regi等于2001年首次提出硅基介孔材料能夠用于藥物緩釋，之后科研人員就展開(kāi)了大量研究[23]。如探究介孔載體表面性質(zhì)、孔徑、形貌等對(duì)其載藥釋藥性能影響[24?26]。分子篩孔道均勻、表面基團(tuán)豐富、穩(wěn)定性高和無(wú)毒等特點(diǎn)使其在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用備受關(guān)注[27?30]。綜合各項(xiàng)研究成果發(fā)現(xiàn)：介孔分子篩不僅可以作為藥物載體成為臨床上的首選納米材料，而且還提供了安全保障，這一點(diǎn)對(duì)臨床醫(yī)學(xué)至關(guān)重要。如Wen等研究了ZSM?5負(fù)載DOX以及pH對(duì)藥物釋放的影響[31]；Abasian等研究了PLA/chitosan/NaX/Fe3O4/DOX納米纖維復(fù)合物對(duì)H1355細(xì)胞的殺傷力作用，結(jié)果表明其可有效殺死75%的腫瘤細(xì)胞[32]。雖然上述分子篩-DOX納米藥物體系均取得一定成效，但其藥物負(fù)載量還不是令人十分滿意，且其合成過(guò)程繁瑣，生物相容性及抗腫瘤效率還有待提高。

為了得到一種制備過(guò)程綠色簡(jiǎn)單，且具有高負(fù)載率和低毒副作用的分子篩納米藥物，我們以Y型分子篩(YMS)作為基體，通過(guò)不同pH、不同負(fù)載時(shí)間和不同DOX加入量等實(shí)驗(yàn)探究最佳負(fù)載條件，將DOX借助氫鍵和范德華力等負(fù)載在YMS上制備出高負(fù)載納米藥物體系(YMS?DOX)。對(duì)YMS和YMS?DOX進(jìn)行了功能基團(tuán)、粒徑和電位等表征，證實(shí)YMS?DOX藥物體系成功制備。以人乳腺癌細(xì)胞(MM?231)和樹(shù)突細(xì)胞(DC)為模型，經(jīng)細(xì)胞毒性試驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試表明，YMS?DOX具有緩釋藥物作用，能有效殺死腫瘤細(xì)胞，且可降低對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

YMS(粒徑約200 nm)由太原理工大學(xué)贈(zèng)送。檸檬酸(C6H10O8)和磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)購(gòu)自上海阿拉丁試劑有限公司。DOX購(gòu)自合肥博美生物科技有限責(zé)任公司。MM?231和DC細(xì)胞由山西醫(yī)科大學(xué)提供。3?(4，5?二甲基噻唑?2)?2，5?二苯基四氮唑溴鹽(MTT)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.2 YMS?DOX納米藥物制備及DOX負(fù)載量測(cè)定

稱取1.0 mg YMS[33]，首先用無(wú)水乙醇超聲高速離心洗滌2次，隨后加入1.0 mL pH=9.0的緩沖溶液(C6H10O8和 Na2HPO4·12H2O 調(diào)配)，超聲分散 0.5 h。接著加入0.2 mg DOX，混合均勻后置于WIGGENS(WH220?R)型紅外線加熱電磁攪拌器(德國(guó))上室溫反應(yīng)20.0 h。待反應(yīng)結(jié)束，高速離心并用去離子水洗滌2～3次，直到上清液接近無(wú)色為止。待洗滌完畢，將YMS?DOX納米顆粒用冷凍干燥機(jī)干燥備用，用棕色試劑瓶收集所有洗滌液，避光儲(chǔ)存，此YMS?DOX為最佳制備條件所得樣品。

借助UV?Vis吸收光譜法[34]和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算DOX負(fù)載量。在2.0 mL的EP管中將1.0 mg·mL-1的DOX溶液用pH=9.0的緩沖液依次稀釋到10、20、30、40、50、60 μg·mL-1。然后用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)DOX的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，DOX濃度為橫坐標(biāo)，繪制DOX的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 pH、作用時(shí)間和加入量對(duì)YMS?DOX負(fù)載量的影響

稱取10份1.0 mg的YMS，首先用無(wú)水乙醇超聲高速離心洗滌2次，隨后分別加入1.0 mL pH為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0和12.0的緩沖溶液(C6H10O8和Na2HPO4·12H2O調(diào)配)，超聲分散0.5 h。接著加入0.2 mg DOX，混合均勻后置于紅外線加熱電磁攪拌器上室溫反應(yīng)20.0 h。待反應(yīng)結(jié)束，高速離心并用去離子水洗滌2～3次，直到上清液接近無(wú)色為止。將YMS?DOX納米顆粒置于冷凍干燥機(jī)干燥備用，用棕色試劑瓶收集所有洗滌液，避光儲(chǔ)存。通過(guò)測(cè)定DOX在480 nm處吸光度，利用εDOX=11 500 L·mol-1·cm-1計(jì)算出上清液中 DOX 含量，DOX加入總量與上清液中DOX含量的差值即為YMS中DOX負(fù)載量。

稱取5份1.0 mg的YMS，首先用無(wú)水乙醇超聲高速離心洗滌2次，隨后加入1.0 mL pH=9.0的緩沖溶液(C6H10O8和Na2HPO4·12H2O調(diào)配)，超聲分散0.5 h。接著加入0.2 mg DOX，混合均勻后置于紅外線加熱電磁攪拌器上室溫下依次反應(yīng)0.5、1.0、4.0、12.0和20.0 h，待反應(yīng)結(jié)束，后續(xù)操作如上所述。

稱取6份1.0 mg的YMS，首先用無(wú)水乙醇超聲高速離心洗滌2次，隨后加入1.0 mL pH=9.0的緩沖溶液(C6H10O8和Na2HPO4·12H2O調(diào)配)，超聲分散0.5 h。隨后依次分別加入0.1、0.2、0.4、0.5、0.8和1.0 mg的DOX，混合均勻后置于紅外線加熱電磁攪拌器上室溫反應(yīng)20.0 h，待反應(yīng)結(jié)束，后續(xù)按上述操作處理。

1.4 YMS?DOX納米藥物形貌、粒徑和光譜表征

取少量YMS和按照最佳條件制備得到的YMS?DOX(下同，不再特別說(shuō)明)加入無(wú)水乙醇中，超聲分散0.5 h后，將樣品分別滴至數(shù)個(gè)銅網(wǎng)上，風(fēng)干，借助FEI Tecnai F30型透射電子顯微鏡(TEM，荷蘭)對(duì)其形貌進(jìn)行觀察，加速電壓200 kV。

取少量YMS和YMS?DOX加入到蒸餾水中，超聲分散0.5 h后，利用Nano ZS90馬爾文激光粒度散射儀(英國(guó))于25℃和90°測(cè)其粒徑和ζ電位。

取YMS、YMS?DOX和DOX分別加入到磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中，超聲分散0.5 h，隨后借助日立U?3900紫外可見(jiàn)吸收光譜儀(日本)測(cè)定其吸光度，掃描范圍為800～200 nm。借助日立F?7000熒光光譜儀(日本)測(cè)定其熒光光譜圖，設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)為480 nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍為500～700 nm，狹縫均設(shè)為5 nm。取冷凍干燥好的YMS?DOX與KBr混合，研磨壓片，采用熱電Nicolet Is5型紅外光譜儀(美國(guó))表征樣品骨架結(jié)構(gòu)，判斷YMS負(fù)載DOX是否成功。

取少量干燥好的YMS和YMS?DOX研磨成粉末，借助理學(xué)Rigaku Ultima Ⅳ型X射線衍射儀(XRD，日本)測(cè)定樣品結(jié)構(gòu)，采用Cu靶Kα射線(λ=0.154 18 nm)，管電壓40 kV，管電流40 mA，掃描步長(zhǎng)0.02°，掃描范圍10°～80°。

1.5 YMS?DOX納米藥物體外釋藥

稱取4份1.0 mg YMS?DOX納米藥物，分別加入1.0 mL pH為4.5、5.5、6.5和7.4的PBS，超聲分散0.5 h后，移入透析袋中，兩端封口，隨后將透析袋置于分別裝有9.0 mL相對(duì)應(yīng)的PBS的50.0 mL離心管中，避光置于恒溫振蕩儀中孵育(溫度37.0℃，轉(zhuǎn)速150.0 r·min-1)。按照設(shè)定的不同時(shí)間間隔從離心管中取出2.0 mL透析液，按照文獻(xiàn)方法[33]測(cè)定DOX負(fù)載量，待測(cè)定結(jié)束后，再將2.0 mL透析液轉(zhuǎn)移回離心管中，重復(fù)上述操作，待48.0 h后，計(jì)算并繪制藥物釋放累積曲線。

1.6 YMS?DOX細(xì)胞毒性和凋亡測(cè)試

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MM?231和DC細(xì)胞按每孔5.0×103個(gè)細(xì)胞分別接種于96孔板中，待細(xì)胞完全貼壁后，分別加入含不同質(zhì)量濃度的YMS、YMS?DOX和DOX的培養(yǎng)液繼續(xù)孵育培養(yǎng)，每組以未處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照，分別培養(yǎng)24、48、72、96 h后，采用MTT法，測(cè)試細(xì)胞存活率[35]。

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MM?231細(xì)胞以每盤(pán)2.0×105個(gè)細(xì)胞分別接種于35.0 mm培養(yǎng)皿中，孵育過(guò)夜。待細(xì)胞貼壁后，分別加入含YMS(25.1 μg·mL-1)、YMS?DOX(25.1 μg·mL-1，等量于 5.0 μg·mL-1DOX)和 DOX(5.0 μg·mL-1)的培養(yǎng)液繼續(xù)孵育 72 h。待孵育結(jié)束，用0.25%胰酶消化，離心(1 000 r·min-1)5.0 min，收集細(xì)胞，加入凋亡檢測(cè)試劑，隨后借助流式細(xì)胞儀測(cè)定[36]。

2 結(jié)果與討論

2.1 YMS?DOX的制備及DOX負(fù)載量測(cè)定

為設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)出高負(fù)載、低毒副作用、高療效以及低成本的分子篩藥物輸送體系，我們以pH=9.0的緩沖溶液作為反應(yīng)介質(zhì)，將YMS與DOX混合，通過(guò)物理吸附作用制備得到高負(fù)載納米藥物體系(圖2)。由于DOX的pKa=8.3，反應(yīng)介質(zhì)的pH=9.0，DOX的氨基在反應(yīng)介質(zhì)中以—NH2形式存在，而YMS表面有—OH，DOX分子中的—NH2與YMS分子表面的—OH可通過(guò)范德華力和氫鍵相結(jié)合[34]，即得到Y(jié)MS?DOX納米藥物。

圖2 YMS?DOX用于腫瘤藥物輸送示意圖Fig.2 Scheme of YMS?DOX nanomedicine for drug delivery

DOX負(fù)載量的測(cè)定通過(guò)UV?Vis吸收光譜法進(jìn)行。首先通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到DOX的吸光度(A)與其濃度(c)的關(guān)系。圖3A為DOX的UV?Vis譜圖，圖3B為DOX標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖可知，DOX在0～60 μg·mL-1范圍內(nèi)的吸光度與濃度有很好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.013 08c+0.027 61，R2=0.994 1。利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算得到在pH=9.0時(shí)YMS對(duì)DOX的負(fù)載量。

圖3 DOX在緩沖液中的UV?Vis譜圖(A)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(B)Fig.3 UV?Vis spectra(A)and standard curve(B)of DOX in buffer solution

之后，我們探究了pH對(duì)DOX負(fù)載量(根據(jù)εDOX計(jì)算)的影響(圖4A和4B)。由圖可知，在pH=3～12范圍內(nèi)，DOX的負(fù)載量隨pH增大呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，當(dāng)pH=9.0時(shí)，DOX負(fù)載量達(dá)到最大。由于DOX的摩爾吸光系數(shù)在不同介質(zhì)中有細(xì)微的差別，當(dāng)確定了最佳pH后，為了排除此細(xì)微影響，使pH=9.0的最佳條件下DOX的負(fù)載量數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確，我們利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算pH=9.0條件下，不同時(shí)間和加入量對(duì)負(fù)載量的影響。如圖4C和4D所示，DOX負(fù)載量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，20.0 h后負(fù)載量達(dá)到最大，該吸附動(dòng)力學(xué)可較好地?cái)M合為假一級(jí)動(dòng)力學(xué)，速率常數(shù)為0.122 h-1。圖4E和4F顯示了DOX加入量對(duì)DOX負(fù)載量的影響。由圖可知，pH=9.0時(shí)，DOX負(fù)載量隨DOX加入量增加而增加，且呈現(xiàn)出很好的線性關(guān)系(Y=0.993 5c+0.436 9，R2=0.999 9)。當(dāng) DOX 加入量為 200 μg時(shí)，YMS負(fù)載DOX量為(199.22±1.98)μg·mg-1，DOX負(fù)載率可高達(dá)99.61%。

圖4 pH對(duì)YMS負(fù)載DOX的影響(A、B);pH=9時(shí),時(shí)間(C、D)及DOX加入量(E、F)對(duì)YMS負(fù)載DOX的影響Fig.4 Effect of pH on YMS loading DOX(A,B);Time(C,D)and the amount of added DOX(E,F)on YMS loading DOX when pH=9

2.2 YMS?DOX的表征

利用XRD對(duì)YMS和YMS?DOX進(jìn)行表征，結(jié)果如圖 5A 所示。圖中位于 10.35°、15.81°、20.43°、23.85°、27.21°、31.39°、32.47°的衍射峰與文獻(xiàn)報(bào)道一致[31]，表明所制備的YMS純度較好。在負(fù)載DOX后(圖5B)，上述位置的衍射峰依然存在，說(shuō)明YMS的立方結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生大的改變；然而，衍射峰的銳度略有下降，表明與純YMS相比，負(fù)載DOX后YMS的結(jié)晶度有所降低。

圖5 YMS(A)和YMS?DOX(B)的XRD圖Fig.5 XRD patterns of YMS(A)and YMS?DOX(B)

此外利用TEM對(duì)YMS和YMS?DOX的形貌進(jìn)行了觀察(圖6)，由圖可看到，YMS在吸附DOX之前，呈現(xiàn)出清晰的孔道，在吸附DOX之后，孔道模糊，表面出現(xiàn)黑點(diǎn)，表明YMS?DOX納米藥物成功制備。

圖6 YMS和YMS?DOX的TEM圖Fig.6 TEM images of YMS and YMS?DOX

此外，通過(guò)馬爾文粒度儀分別測(cè)定了YMS和YMS?DOX的粒徑大小和ζ電位，結(jié)果見(jiàn)圖7。我們發(fā)現(xiàn)與YMS粒徑相比，YMS?DOX粒徑增大到了約500.0 nm，這可能是由于DOX在堿性條件下會(huì)發(fā)生自聚集形成DOX納米顆粒，附著于YMS表面，使其粒徑發(fā)生一個(gè)大的改變。YMS負(fù)載DOX前后的ζ電位分別為(-33.2±0.23)mV和(-29.5±0.12)mV，這可能是由于DOX與YMS發(fā)生靜電引力作用，消耗了YMS表面羥基，所以表面電位增大，上述結(jié)論表明DOX成功負(fù)載在YMS表面。

圖7 YMS(A)和YMS?DOX(B)的粒徑;YMS和YMS?DOX的ζ電位 (C)Fig.7 Particle sizes of YMS(A)and YMS?DOX(B);ζ potentials of YMS and YMS?DOX(C)

YMS、DOX和YMS?DOX的UV?Vis譜圖如圖8A所示。YMS?DOX在480 nm處有一個(gè)小的DOX特征峰，證實(shí)了YMS?DOX成功制備。圖8B是YMS?DOX的紅外光譜圖，其中3 456 cm-1處為—OH的伸縮振動(dòng)峰，1 487 cm-1處為—NH2的伸縮振動(dòng)峰，1 471 cm-1處出現(xiàn)了DOX的特征伸縮振動(dòng)峰，由此說(shuō)明DOX已經(jīng)成功負(fù)載在YMS上。三者的熒光光譜如圖8C所示，游離的DOX熒光強(qiáng)度很大，但是負(fù)載到Y(jié)MS上之后，YMS?DOX的熒光強(qiáng)度減弱，這是熒光共振能量轉(zhuǎn)移造成的，這也證實(shí)了YMS?DOX的成功制備。

圖8 YMS、DOX和YMS?DOX的UV?Vis(A)、紅外 (B)和熒光 (C)譜圖Fig.8 UV?Vis(A),FT?IR(B),and fluorescence(C)spectra of YMS,DOX,and YMS?DOX

2.3 YMS?DOX的體外釋藥

為了驗(yàn)證YMS?DOX藥物釋放是否也受pH調(diào)控，采用體外透析法研究了其藥物釋放行為，結(jié)果如圖9所示。由圖可知，經(jīng)過(guò)48.0 h后，YMS?DOX在pH=7.4(模擬生理環(huán)境)時(shí)藥物釋放率約為12.0%，而隨著酸性逐漸增強(qiáng)，DOX釋放量逐漸增加，且先呈現(xiàn)出一個(gè)藥物快速釋放過(guò)程，隨后進(jìn)入緩釋狀態(tài)，擬合得出釋放速率常數(shù)kd為0.134 h-1，半衰期t1/2為5.2 h，而游離DOX的t1/2為0.37 h，前者約為后者的14倍，表明YMS?DOX具有較好的藥物緩釋特性。此外在pH=4.5的酸性環(huán)境中(模擬腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)境)，藥物釋放率達(dá)到約46.0%，是pH=7.4條件下的3.8倍，這是由于在腫瘤酸性環(huán)境中，范德華力作用和氫鍵可被H+破壞，從而使YMS高效大量釋放DOX。上述結(jié)果表明，與游離DOX相比，YMS?DOX可顯著降低對(duì)正常組織的毒副作用。

圖9 YMS?DOX納米藥物的體外藥物釋放曲線Fig.9 In vitro drug release curves of YMS?DOX nanomedicine

2.4 YMS?DOX的細(xì)胞毒性及凋亡測(cè)試

通過(guò)MTT法測(cè)試細(xì)胞毒性，探究不同時(shí)間、不同濃度下YMS?DOX作用于MM?231和DC細(xì)胞，對(duì)各自細(xì)胞殺傷率的影響，如圖10所示。可以看出，隨著作用時(shí)間和濃度的增加，YMS?DOX對(duì)MM?231的殺傷率逐漸上升。當(dāng)濃度為2.8 μg·mL-1時(shí)，殺傷率最強(qiáng)。如圖11所示，相比于DOX，YMS?DOX對(duì)DC細(xì)胞的細(xì)胞殺傷率有所下降，說(shuō)明YMS?DOX可降低DOX對(duì)正常細(xì)胞的殺傷力。

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)，如圖12所示。圖12A為納米載體YMS對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)并未引起細(xì)胞顯著凋亡，與空白細(xì)胞組(圖12D)大致相同，表明YMS具有高生物兼容性；反觀YMS?DOX(圖 12B)和 DOX(圖 12C)均引起大量細(xì)胞凋亡，且主要誘導(dǎo)細(xì)胞晚期凋亡。圖12E為細(xì)胞凋亡柱狀圖，當(dāng)孵育處理細(xì)胞時(shí)間為72.0 h時(shí)，YMS?DOX引起75.6%的細(xì)胞凋亡，DOX為66.3%，這一現(xiàn)象表明YMS?DOX能有效提高DOX對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，且具有緩釋功效，從而提高腫瘤治療功效。這一結(jié)論與細(xì)胞毒性測(cè)試相一致。

圖10 YMS(A)、YMS?DOX(B)和DOX(C)對(duì)MM?231細(xì)胞的MTT毒性測(cè)試Fig.10 Effects of YMS(A),YMS?DOX(B),and DOX(C)on MM?231 cells viability by MTT assay

圖11 YMS(A)、YMS?DOX(B)和DOX(C)對(duì)DC細(xì)胞的MTT毒性測(cè)試Fig.11 Effects of YMS(A),YMS?DOX(B),and DOX(C)on DC cells viability by MTT assay

圖12 (A)YMS、(B)YMS?DOX和(C)DOX對(duì)MM?231細(xì)胞的凋亡測(cè)試及(D)作為對(duì)照組的未處理細(xì)胞;(E)根據(jù)(A～D)的數(shù)據(jù)所作細(xì)胞凋亡柱狀圖Fig.12 Cell apoptosis of MM?231 cells treated with(A)YMS,(B)YMS?DOX,and(C)DOX for 72.0 h,and(D)MM?231 cells untreated as control;(E)Cell apoptosis histogram for(A?D)

3 結(jié)論

借助氫鍵和范德華力等作用力，通過(guò)綠色簡(jiǎn)單的方法制備出pH調(diào)控的滿足EPR效應(yīng)的Y型分子篩高負(fù)載納米藥物。探究了pH、時(shí)間和DOX加入量對(duì)YMS負(fù)載DOX的影響，發(fā)現(xiàn)在pH=9.0，DOX加入量為0.2 mg且負(fù)載時(shí)間為20.0 h的最佳條件下，負(fù)載率可高達(dá)99.61%。體外藥物釋放研究發(fā)現(xiàn)，YMS?DOX可將DOX大量釋放于腫瘤組織，而在正常組織中釋藥率低，暗示其可有效殺死腫瘤細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)研究了YMS?DOX對(duì)MM?231細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)YMS?DOX可將藥物緩慢釋放于細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表明其具有良好的細(xì)胞殺傷力。綜上，我們介紹了一種基于分子篩的腫瘤可激活藥物傳輸體系，為高負(fù)載納米藥物體系的合成提供了新的設(shè)計(jì)思路和理論支持。