于瑞海，李海昆，李春華，鄒多

(中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，山東 青島266003)

由于三倍體牡蠣具有育性差、生長(zhǎng)快、死亡率低的優(yōu)點(diǎn)，三倍體牡蠣的養(yǎng)殖面積逐年增加，成為北方牡蠣養(yǎng)殖的熱點(diǎn)之一。目前養(yǎng)殖的三倍體牡蠣主要是采用二倍體牡蠣卵子與四倍體牡蠣精子雜交產(chǎn)生的。當(dāng)前限制三倍體牡蠣苗種生產(chǎn)的瓶頸主要是四倍體牡蠣的供應(yīng)。四倍體牡蠣是一個(gè)特殊群體，跟普通的二倍體牡蠣不同，自然界沒有野生存活的四倍體存在，都是由三倍體長(zhǎng)牡蠣人工誘導(dǎo)而來的。

四倍體牡蠣是指細(xì)胞中含有四套染色體組的牡蠣，即4n；正常二倍體是含有2套染色體組，即2n。目前牡蠣的多倍體育種主要是三倍體和四倍體育種，生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的是三倍體牡蠣和四倍體牡蠣。國(guó)內(nèi)外對(duì)三倍體牡蠣研究較多，現(xiàn)主要就四倍體長(zhǎng)牡蠣的生物學(xué)特性和未來的發(fā)展方向進(jìn)行介紹和探討。

一、四倍體長(zhǎng)牡蠣的生產(chǎn)方法

四倍體長(zhǎng)牡蠣是由三倍體長(zhǎng)牡蠣成熟的卵子與二倍體長(zhǎng)牡蠣精子雜交，通過多種理化方法抑制雜交受精卵極體排放產(chǎn)生的。郭希明等(1994)首先報(bào)道了一種貝類四倍體生產(chǎn)技術(shù)，王昭萍等(2003)首次培育出存活四倍體長(zhǎng)牡蠣，而誘導(dǎo)四倍體牡蠣的藥物主要是細(xì)胞松弛素B(簡(jiǎn)稱CB)和6-二甲基氨基嘌呤(簡(jiǎn)稱6-DMAP)。

成熟的三倍體牡蠣產(chǎn)卵量較少，成熟度較差。三倍體牡蠣產(chǎn)生的卵子與二倍體精子雜交，利用藥物處理抑制雜交受精卵的極體排放后會(huì)產(chǎn)生大量不同倍性的個(gè)體，而其中的非整倍體幼蟲大部分是不能存活下來的，所以誘導(dǎo)組幼蟲的存活率通常較低。處理時(shí)機(jī)掌握、處理時(shí)間以及藥物誘導(dǎo)毒性作用對(duì)誘導(dǎo)四倍體牡蠣的孵化率、幼蟲成活率都有一定影響，也會(huì)影響四倍體誘導(dǎo)率，因此，最后能夠存活下來的幼蟲較少。這也是目前四倍體長(zhǎng)牡蠣群體緊缺的主要因素之一。

二、四倍體長(zhǎng)牡蠣養(yǎng)殖生物學(xué)特性

與二倍體長(zhǎng)牡蠣比較，四倍體長(zhǎng)牡蠣主要表現(xiàn)如下特征。

1.可以自繁培育下一代，也可在自然或人工促熟條件下產(chǎn)卵、排精，再采用人工授精法繁殖后代。四倍體卵徑為63.68微米，明顯大于二倍體(平均卵徑49.35微米)。精子大小上4n精子比2n精子大30%左右。四倍體長(zhǎng)牡蠣D形幼蟲大小為89微米，明顯大于二倍體長(zhǎng)牡蠣。

2.與二倍體組生長(zhǎng)比較，四倍體自繁組幼蟲具有一定生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，比二倍體組早5～6天出現(xiàn)眼點(diǎn)。但在稚貝、幼貝及成貝階段沒有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，處于生長(zhǎng)劣勢(shì)，同月齡比二倍體組個(gè)體小，差異顯著。

3.四倍體長(zhǎng)牡蠣精子可與二倍體長(zhǎng)牡蠣卵子受精雜交生產(chǎn)100%的三倍體長(zhǎng)牡蠣，為三倍體長(zhǎng)牡蠣規(guī)?；a(chǎn)提供保證，這是四倍體長(zhǎng)牡蠣最大的價(jià)值之一。

4.四倍體長(zhǎng)牡蠣自繁后代會(huì)出現(xiàn)染色體丟失的問題，因此，后代倍性極不穩(wěn)定，隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，染色體不斷缺失，大部分衰退變成三倍體、二倍體及非整倍體，只有小部分四倍體存在，這是其最大缺點(diǎn)之一。

因此，四倍體長(zhǎng)牡蠣需要不斷進(jìn)行誘導(dǎo)培育，由于誘導(dǎo)難度較大，造成四倍體長(zhǎng)牡蠣不能滿足生產(chǎn)需求，而沒有足量的四倍體長(zhǎng)牡蠣直接導(dǎo)致三倍體長(zhǎng)牡蠣苗種供應(yīng)緊張。

三、四倍體長(zhǎng)牡蠣發(fā)展趨勢(shì)

根據(jù)四倍體長(zhǎng)牡蠣生長(zhǎng)性狀和發(fā)展特點(diǎn)，可進(jìn)行如下工作，以保證四倍體長(zhǎng)牡蠣種群穩(wěn)定發(fā)展，從而保證三倍體長(zhǎng)牡蠣產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。

1.完善四倍體長(zhǎng)牡蠣誘導(dǎo)技術(shù)工藝，包括三倍體親貝促熟培養(yǎng)、誘導(dǎo)時(shí)機(jī)、誘導(dǎo)時(shí)間、藥物濃度和誘導(dǎo)幼蟲的培育等。四倍體長(zhǎng)牡蠣誘導(dǎo)組幼蟲培育技術(shù)要進(jìn)行優(yōu)化和完善，提高四倍體長(zhǎng)牡蠣的誘導(dǎo)率以及四倍體長(zhǎng)牡蠣幼蟲成活率，從而保證能培育出一定量的四倍體群體。

2.研究培育染色體穩(wěn)定四倍體群體技術(shù)，培育性狀穩(wěn)定的四倍體家系，通過四倍體長(zhǎng)牡蠣群體選育和家系選育，經(jīng)過多年連續(xù)篩選，獲得四倍體倍性相對(duì)穩(wěn)定家系，以減少四倍體長(zhǎng)牡蠣誘導(dǎo)過程。

3.加強(qiáng)四倍體倍性檢測(cè)力度，保證四倍體長(zhǎng)牡蠣真實(shí)性。四倍體長(zhǎng)牡蠣的生產(chǎn)應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)前都要進(jìn)行倍性檢測(cè)，保證使用的四倍體長(zhǎng)牡蠣都是真正的四倍體。對(duì)于養(yǎng)殖的四倍體群體也要定期進(jìn)行倍性檢測(cè)，以便及時(shí)掌握四倍體長(zhǎng)牡蠣群體的倍性變化情況，比較準(zhǔn)確了解四倍體長(zhǎng)牡蠣具體數(shù)量。

4.要完善利用四倍體長(zhǎng)牡蠣生產(chǎn)全三倍體牡蠣生產(chǎn)工藝。三倍體長(zhǎng)牡蠣育苗生產(chǎn)時(shí)，首先要保證使用的四倍體長(zhǎng)牡蠣為真正的四倍體；其次是要有嚴(yán)格的二倍體解剖技術(shù)及雌雄挑選技術(shù)，確保挑出百分百的雌貝，之后取卵、浸泡促熟，鏡檢有無(wú)二倍體精子污染，發(fā)現(xiàn)污染立即舍棄，重新解剖取卵。人工授精時(shí)，把握好四倍體精子和二倍體卵子的配比，在最大限度利用四倍體精子的同時(shí)盡可能提高受精率。孵化過程中要降低孵化密度，最大限度提高孵化率。三倍體幼蟲培育期間也要嚴(yán)格管理和操作，定期進(jìn)行倍性檢測(cè)，以保證三倍體長(zhǎng)牡蠣苗培育成功，為養(yǎng)殖戶提供優(yōu)質(zhì)三倍體苗種。