李淑敏 張業(yè)霞

山東省菏澤市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東菏澤 274031

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，每年新發(fā)患者呈現(xiàn)上升趨勢[1-3]，隨著癌細(xì)胞的不斷擴(kuò)散，細(xì)胞間黏性減小，游離的癌細(xì)胞通過血液及淋巴結(jié)擴(kuò)散到全身，給患者生命安全帶來威脅。 乳腺癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，多認(rèn)為與遺傳、乳腺良性疾病、飲酒過度等有關(guān)[4-6]。 有研究[7]指出人體細(xì)胞免疫水平與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，且隨著腫瘤的發(fā)展，免疫水平遭到抑制。另有研究[8]指出，CA153 常用于乳腺癌的輔助診斷。但目前關(guān)于乳腺癌患者免疫功能與其臨床病理間的關(guān)系尚不清楚，相關(guān)研究暫無，故本研究通過對乳腺癌患者臨床資料進(jìn)行分析比較，旨在探尋不同病理特征下乳腺癌患者細(xì)胞免疫水平的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取 2019 年1 月至 2020 年 5 月菏澤市立醫(yī)院收治的104 例乳腺癌患者作為研究對象，設(shè)為乳腺癌組； 選取同期菏澤市立醫(yī)院收治的70 例乳腺良性疾病患者作為良性組，選取同期于菏澤市立醫(yī)院進(jìn)行體檢的70 例健康體檢者作為健康對照組。 乳腺癌組中，患者均為女性；年齡 28～80 歲，平均（49.53±6.77）歲；均進(jìn)行外科手術(shù)。 良性組中，患者均為女性；年齡 27～75 歲，平均（50.12±6.52）歲。 健康對照組中，患者均為女性；年齡 29～76 歲，平均（49.78±6.30）歲。三組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過[審批件（2019）倫審第（10）號]，患者均知情且簽署同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌；②無其他重要臟器合并癥； ③術(shù)前均未進(jìn)行相關(guān)腫瘤治療；④臨床資料均完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并高血壓、糖尿病及其他器質(zhì)性疾??；②合并其他惡性腫瘤；③合并免疫系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

①對所有患者入院時(shí)免疫水平、血清CA153 水平進(jìn)行檢測。免疫細(xì)胞檢測：采集患者空腹靜脈血4 ml，1000×g 離心 5 min，直徑為 13.5 cm，分離血清。 免疫細(xì)胞檢測：采用美國BD 公司生產(chǎn)的Facs Calibur 流式細(xì)胞儀檢測 CD4、CD8 水平（圖 1）；采用乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）釋放法檢測 NK 水平，試劑盒購自上海哈靈生物科技有限公司（產(chǎn)品貨號：HL10073）， 所有檢測過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。 采用羅氏Cobas e801，使用化學(xué)發(fā)光法檢測血清CA153 水平，試劑盒來自廈門海菲生物技術(shù)股份有限公司，產(chǎn)品注冊號：國械注準(zhǔn) 20163400975，CA153＞25 U/ml 為陽性。

圖1 流式細(xì)胞儀檢測CD4、CD8 水平

②對乳腺癌患者的組織病理進(jìn)行檢測。 使用4%的甲醛將患者術(shù)中切除的腫瘤組織標(biāo)本固定，采用免疫組織化學(xué)方法檢測E 雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor2，HER-2）的表達(dá)（圖 2，封三）。

圖2 免疫組織化學(xué)方法檢測HER-2 表達(dá)

③比較乳腺癌患者不同臨床病理特征下免疫指標(biāo)水平（CD4、CD8、CD4/CD8、NK、CA153）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素ANOVA 方差分析；計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者免疫指標(biāo)及CA153 水平的比較

三組免疫指標(biāo)（CD4、CD8、CD4/CD8、NK）及CA153水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 乳腺癌組CD4、CD4/CD8、NK 水平低于良性組和健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳腺癌組 CD8、CA153 水平高于良性組和健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；良性組 CD4、CD4/CD8、NK 水平低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；良性組 CD8、CA153 水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表 1）。

表1 三組患者免疫指標(biāo)及CA153 水平的比較（）

表1 三組患者免疫指標(biāo)及CA153 水平的比較（）

與健康對照比較，aP＜0.05；與良性組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) CD4（%） CD8（%） CD4/CD8 NK（%） CA153（U/ml）乳腺癌組良性組健康對照組F 值P 值104 70 70 37.46±5.21ab 49.21±3.38a 54.61±3.59 363.118＜0.001 26.45±7.01ab 23.10±5.20a 20.13±4.61 24.459＜0.001 1.41±0.40ab 1.81±0.50a 2.08±0.51 45.776＜0.001 15.31±7.01ab 19.20±4.31a 21.30±4.69 24.688＜0.001 45.39±12.50ab 15.38±7.01a 9.90±3.11 388.993＜0.001

2.2 乳腺癌患者不同臨床病理特征下免疫指標(biāo)水平的比較

不同年齡、 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CD4、CD4/CD8 及NK 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同病理類型、TNM 分期、 腫瘤直徑、PR、ER、HER-2 表達(dá)的CD4、CD8、CD4/CD8、NK 及 CA153 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表 2）。

表2 乳腺癌患者不同臨床病理特征下免疫指標(biāo)水平的比較（）

表2 乳腺癌患者不同臨床病理特征下免疫指標(biāo)水平的比較（）

臨床病理特征 例數(shù) CD4（%） CD8（%） CD4/CD8 NK（%） CA153（U/ml）年齡（歲）＜55≥55 t 值P 值病理類型浸潤性導(dǎo)管癌浸潤性小葉癌t 值P 值TNM 分期（期）Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳt 值P 值有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無有t 值P 值腫瘤直徑（cm）＜5≥5 t 值P 值PR 表達(dá)陽性陰性t 值P 值ER 表達(dá)陽性陰性t 值P 值HER-2 表達(dá)陽性陰性t 值P 值63 41 44 60 55 49 66 38 37 67 65 39 57 47 45 59 38.51±5.23 30.33±4.85 8.018＜0.001 37.6±7.56 28.74±8.04 5.693＜0.001 37.56±7.46 28.64±8.02 5.875＜0.001 38.44±5.15 30.25±4.77 8.019＜0.001 38.55±3.46 31.31±4.12 9.064＜0.001 29.32±4.21 38.67±3.54 11.617＜0.001 30.43±4.28 38.71±3.66 10.474＜0.001 30.42±4.27 38.61±3.63 10.559＜0.001 25.34±8.44 27.73±5.50 1.604 0.112 25.21±9.35 28.66±5.41 2.370 0.020 25.15±9.27 28.63±5.38 2.304 0.023 25.33±8.41 27.67±5.44 1.538 0.127 23.18±2.37 27.36±8.44 2.943 0.004 27.42±8.47 24.18±2.45 2.327 0.022 27.54±8.54 24.36±2.63 2.457 0.016 27.51±8.50 23.27±2.54 3.63＜0.001 1.49±0.42 1.02±0.33 6.049＜0.001 1.39±0.33 1.07±0.40 4.333＜0.001 1.35±0.32 0.98±0.31 5.973＜0.001 1.44±0.38 0.99±0.30 6.259＜0.001 1.97±0.35 1.45±0.37 6.993＜0.001 1.45±0.37 1.95±0.41 6.405＜0.001 1.59±0.46 1.91±0.45 3.565 0.001 1.55±0.45 1.96±0.42 4.782＜0.001 18.34±7.22 15.28±4.54 2.418 0.017 18.82±8.38 14.31±3.33 3.786＜0.001 18.74±8.33 14.21±3.27 3.568 0.001 18.33±7.14 15.26±4.51 2.388 0.019 18.25±7.74 15.64±4.39 2.198 0.030 14.66±4.46 18.31±7.78 3.045 0.003 15.69±4.51 19.35±7.87 2.971 0.004 15.68±4.50 18.32±7.81 2.024 0.046 43.48±11.19 44.69±12.47 0.515 0.608 46.97±11.15 42.01±13.20 2.019 0.046 42.13±12.47 46.99±11.37 2.068 0.041 43.58±11.29 44.77±12.38 0.050 0.618 42.20±11.54 46.94±11.66 1.992 0.049 46.91±11.47 42.01±12.71 2.025 0.045 46.94±11.33 42.14±12.77 2.030 0.045 46.89±11.44 42.03±11.67 2.122 0.036

3 討論

人體抵抗腫瘤免疫以細(xì)胞免疫為主，T 淋巴細(xì)胞作為機(jī)體中最重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞[9-11]，尤其是CD4、CD8 細(xì)胞水平對免疫功能發(fā)揮巨大作用[12-13]。 本研究中，乳腺癌組 CD4、CD4/CD8、NK 水平低于良性組、健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CD4、CD4/CD8 及 NK 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同病理類型、TNM 分期、腫 瘤 直 徑 、PR、ER、HER-2 表 達(dá) 的 CD4、CD8、CD4/CD8、NK 及 CA153 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， 這可能是因?yàn)镃D4 具有促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生抗體功能， 當(dāng)其水平較低預(yù)示著巨噬細(xì)胞的殺傷作用下降，抵抗能力降低；CD8 通常在殺死腫瘤細(xì)胞中起重要作用，當(dāng)其水平較低意味著其殺死靶細(xì)胞和產(chǎn)生抗腫瘤細(xì)胞的活性降低。 NK 細(xì)胞能夠在不需要特異性致敏源的情況下直接殺傷腫瘤細(xì)胞[14-15]，本研究證實(shí)其細(xì)胞活性降低可能預(yù)示患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損，T細(xì)胞亞群間的穩(wěn)定平衡狀態(tài)混亂，使得腫瘤擴(kuò)散和進(jìn)展，進(jìn)一步證實(shí)外周血T 細(xì)胞亞群對判斷乳腺癌患者免疫功能具有指導(dǎo)意義，CA153 產(chǎn)生于乳腺癌細(xì)胞中，且陽性率較高，本研究中，乳腺癌患者CA153 水平高于良性組、健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示其能很好運(yùn)用于乳腺癌診斷中。

綜上所述， 乳腺癌患者的細(xì)胞免疫水平、CA153與臨床病理類型、TNM 分期、腫瘤直徑大小、ER、PR、HER-2 表達(dá)有關(guān)， 且能夠作為區(qū)分乳腺癌疾病的有效依據(jù)，因此，監(jiān)測患者細(xì)胞免疫水平對于正確評估患者的免疫狀態(tài)和預(yù)后狀況具有重要意義。