蔡 梁，胡長(zhǎng)志，張文梅，李松宴，崔汝強(qiáng)*

不同殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

蔡 梁1，胡長(zhǎng)志2，張文梅2，李松宴1，崔汝強(qiáng)1*

（1. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，江西南昌 330045；2. 撫州市煙草公司廣昌分公司，江西廣昌 344000）

【目的】篩選防治煙草赤星病的有效藥劑。【方法】采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)定7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌（）的毒力作用。【結(jié)果】菌絲生長(zhǎng)速率法中56%啶?！る烤?、50%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%丙硫菌唑、50%氯溴異氰尿酸的EC50值分別為0.152 5，0.160 3，0.242 0，1.813 7，4.566 3，14.845 7，86.976 1 mg/L，孢子萌發(fā)法中50%啶酰菌胺、50%氯溴異氰尿酸、56%啶酰·肟菌酯、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%肟菌·戊唑醇、30%丙硫菌唑的EC50值分別為0.127 2，0.133 3，0.208 8，1.319 1，1.821 8，3.128 2，27.045 8 mg/L。供試的7種殺菌劑中對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果最好的是56%啶?！る烤ィ珽C50值為0.152 5 mg/L；對(duì)孢子萌發(fā)的抑制效果最好的是50%啶酰菌胺，EC50值為0.127 2 mg/L。【結(jié)論】56%啶?！る烤ズ?0%啶酰菌胺可優(yōu)先作為煙草赤星病田間防治實(shí)驗(yàn)用藥，72%霜脲·錳鋅和30%肟菌·戊唑醇可用作交替使用殺菌劑。

煙草赤星病菌；殺菌劑；毒力測(cè)定

【研究意義】煙草赤星病是由(Fr.) Keissler引起的一種葉部真菌性病害[1]，主要發(fā)生在煙葉成熟后期，嚴(yán)重影響煙葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，從而造成不同程度的經(jīng)濟(jì)損失[2-3]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】煙草赤星病是一種典型的流行病，流行速度快，潛育期短，在煙草生長(zhǎng)季節(jié)可多次反復(fù)侵染植株[4-5]。煙草赤星病一般從植株下部葉片向上部逐漸擴(kuò)展，發(fā)病初期呈現(xiàn)黃褐色小斑點(diǎn)，后逐漸擴(kuò)大為圓形或長(zhǎng)圓形的深褐色病斑[6]，病斑呈現(xiàn)多重同心輪紋，同時(shí)輪紋上有絨毛狀褐色霉層，霉層為病原菌的分生孢子和分生孢子梗[7-8]。煙草赤星病發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，常導(dǎo)致多個(gè)病斑相連，使得病斑處穿孔破裂，從而導(dǎo)致整片煙葉破碎而失去經(jīng)濟(jì)價(jià)值[9]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前煙草赤星病的防治主要以化學(xué)防治為主[10]，市面上防治效果較好的藥劑主要為菌核凈和多抗霉素，由于長(zhǎng)期大量使用這2類藥劑，導(dǎo)致了抗藥性和農(nóng)藥殘留的產(chǎn)生，在部分煙區(qū)已經(jīng)表現(xiàn)出防效降低現(xiàn)象，以及菌核凈禁用等現(xiàn)象[11-12]，為此需要篩選更多低毒、高效、降解速度快的殺菌劑，為煙草赤星病的防治提供幫助?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究以56%啶?！る烤?、50%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%丙硫菌唑、50%氯溴異氰尿酸這7種殺菌劑為材料，測(cè)定其室內(nèi)毒力，以期為煙草赤星病的化學(xué)防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

煙草赤星病菌（）由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室-80 ℃下保存，使用前活化。

1.2 供試藥劑

56%啶?！る烤C（京博農(nóng)化科技有限公司）、50%啶酰菌胺WG（巴斯夫中國(guó)有限公司）、30%肟菌·戊唑醇SC（浙江中山化工集團(tuán)股份有限公司）、72%霜脲·錳鋅WP（京博農(nóng)化科技有限公司）、80%戊唑醇WP（陜西先農(nóng)生物科技有限公司）、30%丙硫菌唑SC（安徽久易農(nóng)業(yè)股份有限公司）、50%氯溴異氰尿酸WP（綠亨科技集團(tuán)股份有限公司）。

1.3 供試藥劑對(duì)病原菌的毒力測(cè)定

1.3.1 菌絲生長(zhǎng)速率法 將供試菌株接種于PDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，制備直徑為1 cm的菌餅備用。各供試藥劑先用無(wú)菌水配置成母液，再用無(wú)菌水稀釋，配置成6個(gè)不同濃度梯度的藥液。各藥劑的試驗(yàn)濃度梯度為：0.1，0.5，1，5，10，50 mg/L。分別取1 mL稀釋液加入裝有9 mL滅菌PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，搖勻后倒入直徑10 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，凝固后制成含藥平板培養(yǎng)基。將直徑為1 cm的菌餅接種于含藥PDA培養(yǎng)基上。對(duì)照組為加無(wú)菌水的PDA培養(yǎng)基，每個(gè)處理3次重復(fù)。將接種后的培養(yǎng)基置于25 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，7 d后用“十字交叉法”測(cè)量菌落直徑。計(jì)算各處理組菌落增長(zhǎng)直徑及菌絲生長(zhǎng)抑制率[13]。菌絲生長(zhǎng)抑制率按下式計(jì)算。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=（對(duì)照組菌落增長(zhǎng)直徑-處理組菌落增長(zhǎng)直徑）/對(duì)照組菌落增長(zhǎng)直徑×100% （1）

1.3.2 孢子萌發(fā)法 用無(wú)菌水配置孢子懸浮液（105～106孢子/mL）。各待測(cè)藥劑濃度梯度與菌絲生長(zhǎng)速率法中的濃度梯度相同。用移液槍吸取20 μL孢子懸浮液于凹玻片內(nèi)，再分別加入20 μL各濃度梯度的藥液，配成含藥劑的孢子懸浮液。對(duì)照組為加入等量無(wú)菌水，每個(gè)處理3次重復(fù)。將凹玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)25 ℃黑暗保濕培養(yǎng)，24 h后鏡檢孢子萌發(fā)情況，每個(gè)處理隨機(jī)觀察3個(gè)視野，共100個(gè)孢子。計(jì)算孢子萌發(fā)率及藥劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率[13]。孢子萌發(fā)率和萌發(fā)抑制率分別按以下公式計(jì)算。

孢子萌發(fā)率=孢子萌發(fā)數(shù)/檢查孢子總數(shù)×100% （2）

孢子萌發(fā)抑制率=（對(duì)照組孢子萌發(fā)率-處理組孢子萌發(fā)率）/對(duì)照組孢子萌發(fā)率×100% （3）

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以各藥劑濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（x），抑制率的幾率值為縱坐標(biāo)（y），求出各藥劑對(duì)供試菌株的毒力回歸方程及有效抑制中濃度（EC50值）和相關(guān)系數(shù)（R2）。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，不同濃度下56%啶酰·肟菌酯對(duì)煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果見(jiàn)圖1。由表1可知7種殺菌劑抑制菌絲生長(zhǎng)的EC50值介于0.152 5～86.976 1 mg/L，其中56%啶?！る烤?、50%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇這5種殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制活性較強(qiáng)，其EC50值分別為0.152 5，0.160 3，0.242 0，1.813 7，4.566 3 mg/L，而30%丙硫菌唑和50%氯溴異氰尿酸對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制活性弱，其EC50值分別為14.845 7，86.976 1 mg/L，均顯著大于10 mg/L。

圖1 不同濃度下56%啶?！る烤?duì)煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果

表1 7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定結(jié)果

圖2 各藥劑濃度為1 mg/L時(shí)對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果

2.2 7種殺菌劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用

7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，各藥劑濃度為1 mg/L時(shí)對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果見(jiàn)圖2。由表2可知7種殺菌劑抑制孢子萌發(fā)的EC50值介于0.127 2～27.045 8 mg/L，其中50%啶酰菌胺、50%氯溴異氰尿酸、56%啶?！る烤ァ?2%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%肟菌·戊唑醇這6種殺菌劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制活性較強(qiáng)，其EC50值分別為0.127 2，0.133 3，0.208 8，1.319 1，1.821 8，3.128 2 mg/L。但30%丙硫菌唑?qū)︽咦用劝l(fā)的抑制活性較低，其EC50值為27.045 8 mg/L，顯著大于10 mg/L。

表2 7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法分析了7種殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌的毒力，結(jié)果表明，50%啶酰菌胺、56%啶?！る烤?、72%霜脲·錳鋅、30%肟菌·戊唑醇對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均有較好的抑制效果，其中50%啶酰菌胺和56%啶?！る烤サ囊种菩Ч顬轱@著。本結(jié)果與沈宏等[14]、陳杰等[15]對(duì)煙草赤星病菌藥劑篩選的研究結(jié)果類似。啶酰菌胺通過(guò)葉面滲透在植物中轉(zhuǎn)移，抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶，阻礙三羧酸循環(huán)，干擾細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)，對(duì)病害有神經(jīng)活性[16]。啶?！る烤ネㄟ^(guò)細(xì)胞色素b與c1之間的電子傳遞而阻止細(xì)胞ATP合成，從而抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用[15]。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)50%氯溴異氰尿酸對(duì)于菌絲生長(zhǎng)的抑制活性不強(qiáng)，但對(duì)于孢子萌發(fā)的抑制活性較強(qiáng)，因此該藥物適合在發(fā)病前期孢子萌發(fā)階段進(jìn)行預(yù)防應(yīng)用。30%丙硫菌唑?qū)z生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制活性均不強(qiáng)，因此不建議使用該藥劑對(duì)赤星病菌進(jìn)行防治。

基于本試驗(yàn)結(jié)果，建議在進(jìn)行煙草赤星病田間防治時(shí)可優(yōu)先選用50%啶酰菌胺和56%啶?！る烤ィ?2%霜脲·錳鋅和30%肟菌·戊唑醇可以用作交替使用殺菌劑。本試驗(yàn)只在室內(nèi)測(cè)定了藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制活性，對(duì)煙草實(shí)際生產(chǎn)中的藥劑防治效果有待進(jìn)一步研究。

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Determination of Laboratory Toxicities of Different Fungicides on Tobacco Brown Spot

CAI Liang1, HU Changzhi2, ZHANG Wenmei2, LI Songyan1, CUI Ruqiang1*

(1. School of Agronomy Science, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China; 2. Guangchang Branch of Fuzhou Tobacco Company, Guangchang, Jiangxi 344000, China)

This study was conducted to screen effective fungicides for the prevention and control of tobacco brown spot.The virulence of seven fungicides againstwere determined by mycelial growth rate method and spore germination method.The EC50values of 56% boscalid-oxime, 50% boscalid, 30% oxime tebuconazole, 72% fenoxycarb-manganese zinc, 80% tebuconazole, 30% prothioconazole and 50% chlorobromoisocyanuric acid in the mycelial growth rate method were 0.152 5, 0.160 3, 0.242 0, 1.813 7, 4.566 3, 14.845 7, 86.976 1 mg/L. While, the EC50values of 50% boscalid, 50% chlorobromoisocyanuric acid, 56% boscalid-oxime, 72% thiram-manganese zinc, 80% tebuconazole, 30% oxime tebuconazole, and 30% prothioconazole in the spore germination method were 0.127 2, 0.133 3, 0.208 8, 1.319 1, 1.821 8, 3.128 2, 27.045 8 mg/L. The control effect of 56% boscalid-oxime onin tobacco was the best inhibitor of mycelial growth among the seven fungicides, with EC50of 0.152 5 mg/L; and, the best inhibitor of spore germination was 50% boscalid, with EC50of 0.127 2 mg/L.56% boscalid-oxime and 50% boscalid could be preferred for experimental field prevention and control of tobacco brown spot, and 72% fenoxycarb-manganese zinc and 30% oxime tebuconazole could be used as alternate fungicides.

; fungicide; toxicity test

S435.72

A

2095-3704（2021）04-0465-04

蔡梁, 胡長(zhǎng)志, 張文梅, 等. 不同殺菌劑對(duì)煙草赤星病菌室內(nèi)毒力測(cè)定[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2021, 44(4): 465-468.

2021-11-24

2021-12-08

撫州煙草公司項(xiàng)目（撫煙科[2018]8號(hào)）

蔡梁（1996—），男，碩士生，主要從事植物病理研究，liangcai996@163.com；

通信作者：崔汝強(qiáng)，教授，博士，cuiruqiang@qq.com。