李蔣偉 桂林生 周 力 侯生珍 王志有 楊葆春 馬博妍

(青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，西寧 810016)

藏羊是高海拔地區(qū)特有的肉羊種質(zhì)資源，具有耐粗飼、抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)，主要分布于青海、甘肅以及西藏等地區(qū)。由于高海拔地區(qū)特有的氣候環(huán)境，枯草期長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月之久，長(zhǎng)時(shí)間的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入?yún)T乏導(dǎo)致放牧藏羊生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，嚴(yán)重制約了藏羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展[1-2]。基于此，藏羊養(yǎng)殖逐漸由傳統(tǒng)放牧向舍飼或半舍飼過(guò)度。精料補(bǔ)飼則是舍飼或半舍飼過(guò)程極為重要的環(huán)節(jié)，精料水平過(guò)高會(huì)引起瘤胃內(nèi)環(huán)境紊亂，誘導(dǎo)藏羊代謝疾病的發(fā)生；但精料水平過(guò)低則不利于藏羊的生長(zhǎng)發(fā)育，失去舍飼或半舍飼的意義。

反芻動(dòng)物瘤胃中含有數(shù)量龐大的細(xì)菌、真菌以及原蟲(chóng)，這些微生物群落時(shí)刻處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，通過(guò)厭氧發(fā)酵將瘤胃中的食物降解為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足宿主的生長(zhǎng)發(fā)育需求。瘤胃真菌占瘤胃內(nèi)總生物量的8%～20%，盡管比例不高，但其可通過(guò)產(chǎn)生多種高活性酶對(duì)飼料中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等難降解的高分子化合物進(jìn)行降解利用，進(jìn)而提高瘤胃的消化效率[3-5]。近年來(lái)，關(guān)于反芻動(dòng)物飼糧結(jié)構(gòu)影響瘤胃微生物的研究主要集中于瘤胃細(xì)菌和原蟲(chóng)方面，而對(duì)瘤胃真菌的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。占今舜等[6]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂精粗比為60∶40的飼糧可顯著提高湖羊瘤胃中氨態(tài)氮、丙酸、丁酸和戊酸含量；而飼喂精粗比為70∶30的飼糧可促進(jìn)瘤胃發(fā)酵，提高瘤胃細(xì)菌多樣性，增加瘤胃放線菌門和螺旋體菌門的相對(duì)豐度。張潔等[7]利用內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)rDNA高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)，舍飼降低了灘羊瘤胃真菌的多樣性，但提高了瘤胃真菌物種豐度的均勻度；優(yōu)勢(shì)菌群比例發(fā)生變化，對(duì)纖維素、半纖維素降解菌和葡萄糖降解菌的影響明顯。謝明欣等[8]研究不同精粗比條件下復(fù)合益生菌對(duì)蒙古綿羊瘤胃微生物菌群的影響發(fā)現(xiàn)，飼喂低水平精料可顯著提高綿羊瘤胃中溶纖維丁酸弧菌和黃色瘤胃球菌的數(shù)量，同時(shí)提高瘤胃中反芻獸新月形單胞菌、白色瘤胃球菌和總產(chǎn)甲烷菌的數(shù)量；而飼喂高精料水平則顯著降低綿羊瘤胃中白色瘤胃球菌、反芻獸新月形單胞菌和總產(chǎn)甲烷菌的數(shù)量。

瘤胃中的細(xì)菌通過(guò)發(fā)酵作用，可將高纖維飼糧進(jìn)行有效分解，形成揮發(fā)性脂肪酸(VFA)為宿主吸收，同時(shí)可以將植物性蛋白質(zhì)和非蛋白氮轉(zhuǎn)化為微生物蛋白，滿足宿主必需的營(yíng)養(yǎng)需求，進(jìn)而與宿主的生長(zhǎng)發(fā)育和免疫應(yīng)答密切關(guān)聯(lián)[9]。Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，高精料水平飼糧可通過(guò)促進(jìn)瘤胃中琥珀酸輔酶α合成酶(EC 6.2.1.5)和丙酰輔酶α羧化酶(EC 2.8.3.1)的合成，有效提高瘤胃中的pH、揮發(fā)性脂肪酸含量，同時(shí)有助于瘤胃桿菌、普雷沃菌等細(xì)菌的編碼。通過(guò)開(kāi)展體外發(fā)酵試驗(yàn)，張建勛等[11]發(fā)現(xiàn)高精料水平飼糧對(duì)南江黃羊體外發(fā)酵有顯著影響，隨著精料水平的升高，微生物蛋白合成量增加，瘤胃發(fā)酵的能量利用效率提高。上述研究證實(shí)，適當(dāng)?shù)木纤侥軌蚋纳品雌c動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境，進(jìn)而促進(jìn)生長(zhǎng)性能。

當(dāng)前，借助高通量測(cè)序技術(shù)鑒定反芻動(dòng)物瘤胃微生物菌群結(jié)構(gòu)應(yīng)用廣泛[12]，但不同飼糧組成對(duì)藏羊瘤胃微生物菌群分布影響的相關(guān)研究較少?；诖?，本研究擬探討飼糧不同非纖維性碳水化合物/中性洗滌纖維(NFC/NDF)對(duì)藏羊生長(zhǎng)性能、瘤胃發(fā)酵及微生物多樣性的影響，篩選出適宜藏羊生長(zhǎng)發(fā)育且有利于藏羊瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的飼糧結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)于2019年5月15日至2019年8月25日在青海省海南州共和縣切吉鄉(xiāng)哇玉村青海香咔梅朵牧業(yè)有限公司進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

選擇健康、體況相近且體重[(22.14±0.02) kg]無(wú)顯著差異(P<0.05)的3月齡早期斷奶高原型藏羊母羔共210只，隨機(jī)分成7組，每組30只。7組羔羊分別飼喂NFC/NDF為2.86(Ⅰ組)、2.69(Ⅱ組)、2.42(Ⅲ組)、2.06(Ⅳ組)、1.88(Ⅴ組)、1.63(Ⅵ組)、1.43(Ⅶ組)的全混合日糧，其精粗比分別為80∶20、70∶30、60∶40、50∶50、40∶60、30∶70和20∶80。飼養(yǎng)試驗(yàn)預(yù)試期10 d，正試期90 d。試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) %

試驗(yàn)羔羊全舍飼分欄飼養(yǎng)，每日分別于08:30和18:30各飼喂1次，自由飲水，每天飼喂前清掃殘留飼料并稱重。

1.3 樣品采集和處理

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組中隨機(jī)抽取3只試驗(yàn)羊于清晨空腹屠宰，4層紗布過(guò)濾取瘤胃液于凍存管中，投入液氮保存，并參照Kang等[14]的取樣方法分別于不同位點(diǎn)取瘤胃內(nèi)容物于離心管中(合計(jì)2 g)，加入7.5 mL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)，充分振蕩后室溫靜置2.5 h，350×g離心15 min，取上清液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管中，10 000×g離心15 min，取沉淀溶于2.5 mL TE緩沖液中，進(jìn)而對(duì)固相黏附微生物進(jìn)行洗脫。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 飼糧營(yíng)養(yǎng)水平測(cè)定

飼糧粗蛋白質(zhì)(CP)含量采用凱氏定氮法測(cè)定(K9840型自動(dòng)凱氏定氮儀，上海海能公司)，具體方法參考GB/T 6435—2006；酸性洗滌纖維(ADF)、中性洗滌纖維(NDF)含量采用范氏(Van Soest)洗滌纖維分析法測(cè)定，具體方法參照袁翠林等[15]；鈣(Ca)含量采用高錳酸鉀檢測(cè)法測(cè)定，磷(P)含量采用鉬黃比色法測(cè)定(UV-1780紫外分光光度計(jì)，日本島津公司)，分別參照GB/T 6436—2002、GB/T 6437—2002。

1.4.2 生長(zhǎng)性能測(cè)定

分別于試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)對(duì)每組試驗(yàn)羊稱重并記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算平均日采食量和平均日增重。

1.4.3 瘤胃發(fā)酵參數(shù)測(cè)定

瘤胃液氨態(tài)氮(NH3-N)含量使用721型分光光度計(jì)在700 nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定[16]；pH采用便攜性pH酸度計(jì)(CY-PH-60，北京恒奧德儀器儀表有限公司)測(cè)定；揮發(fā)性脂肪酸含量采用氣相色譜儀(GC-2014，日本島津公司)測(cè)定，測(cè)定方法參照王加啟[17]關(guān)于氣相色譜測(cè)定羊瘤胃液中揮發(fā)性脂肪酸的研究方法。

1.4.4 瘤胃微生物多樣性測(cè)定

本試驗(yàn)微生物檢測(cè)中，細(xì)菌采用16S rDNA測(cè)序，擴(kuò)增區(qū)域?yàn)閂3+V4；真菌采用ITS測(cè)序，擴(kuò)增區(qū)域?yàn)镮TS1。測(cè)序均由百邁客生物科技有限公司完成，對(duì)采集到的21個(gè)瘤胃液及內(nèi)容物樣品使用DNA提取試劑盒(InvitrogenTM，美國(guó))提取瘤胃微生物基因組DNA，根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)得到引物，其中真菌上游引物：5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′，下游引物：5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′；細(xì)菌上游引物：5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′，下游引物：3′-GGACTACHVGGGTATCTAAT-5′。測(cè)序基于Illumina HiSeq測(cè)序平臺(tái)，采用雙末端測(cè)序(paired-end)的方法，構(gòu)建小片段文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，進(jìn)一步對(duì)Reads拼接過(guò)濾，使用RDP Classifier 2.2軟件進(jìn)行操作分類單元(OTU)物種注釋；使用SILVA 128軟件進(jìn)行16S物種注釋，使用UNITE 7.0軟件進(jìn)行真菌ITS物種注釋；使用Metastats 20090414軟件分析組間差異分析。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2019整理初始數(shù)據(jù)，用SPSS 20.0中的one-way ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，差異顯著的評(píng)斷標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05。Alpha多樣性指數(shù)分析軟件為Mothur 1.30，在主坐標(biāo)分析(principal coordinates analysis，PCoA)中，計(jì)算距離矩陣的方法是利用各樣品序列間的進(jìn)化信息來(lái)計(jì)算樣品間距離。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，各組之間初始體重差異不顯著(P>0.05)。經(jīng)過(guò)90 d的正試期后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組終末體重顯著高于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P<0.05)；Ⅰ、Ⅱ組平均日增重顯著高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P<0.05)；各組之間平均日采食量差異不顯著(P>0.05)。

表2 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary different NFC/NDF on growth performance of fattening Tibetan sheep

2.2 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表3可知，瘤胃內(nèi)NH3-N含量有隨飼糧NFC/NDF的降低而降低的趨勢(shì)，且Ⅰ、Ⅱ組瘤胃內(nèi)NH3-N含量顯著高于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P<0.05)。瘤胃內(nèi)乙酸含量有隨飼糧NFC/NDF的降低而升高的趨勢(shì)，且Ⅰ組瘤胃內(nèi)乙酸含量顯著低于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ組瘤胃內(nèi)丙酸含量顯著高于Ⅶ組(P<0.05)，Ⅲ組瘤胃內(nèi)丁酸含量顯著高于Ⅶ組(P<0.05)；Ⅱ組瘤胃內(nèi)總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)含量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。各組之間瘤胃內(nèi)異丁酸、異戊酸和戊酸含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。瘤胃內(nèi)乙酸/丙酸有隨飼糧NFC/NDF的降低而升高的趨勢(shì)，且Ⅰ組瘤胃內(nèi)乙酸/丙酸顯著低于Ⅵ、Ⅶ組(P<0.05)。

表3 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響Table 3 Effects of dietary different NFC/NDF on rumen fermentation parameters of fattening Tibetan sheep

2.3 飼糧不同NFC/NDF水平對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌多樣性的影響

2.3.1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估

21個(gè)樣品測(cè)序共獲得1 673 531對(duì)Reads，雙端Reads拼接、過(guò)濾后共產(chǎn)生1 532 284條Clean tags，每個(gè)樣品至少產(chǎn)生64 397條Clean tags，平均產(chǎn)生72 966條Clean tags，被分配至295個(gè)OTU，有210個(gè)為共有OTU。本試驗(yàn)覆蓋率大于99%，表明測(cè)序深度能夠準(zhǔn)確反映羔羊瘤胃真菌微生物組成。

2.3.2 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌Alpha多樣性的影響

由表4可知，各組之間Shannon、Simpson指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組Ace指數(shù)顯著高于Ⅳ、Ⅵ和Ⅶ組(P<0.05)；Ⅲ組Chao1指數(shù)最高，且Ⅲ、Ⅵ組Chao1指數(shù)顯著高于其他各組(P<0.05)。

表4 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌Alpha多樣性指數(shù)的影響Table 4 Effects of dietary different NFC/NDF on rumen fungi Alpha diversity indexes of fattening Tibetan sheep

2.3.3 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌Beta多樣性的影響

通過(guò)PCoA可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的分類，進(jìn)一步展示樣品間物種多樣性差異。由圖1可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在主成分1(貢獻(xiàn)率為25.94%)上與Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組之間分布距離較遠(yuǎn)。這說(shuō)明各組之間的真菌Beta多樣性差異較大，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組瘤胃真菌群落差異要小于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組。

圖1 飼糧不同NFC/NDF下育肥藏羊瘤胃真菌區(qū)系PCoA圖Fig.1 PCoA diagram of rumen fungal flora in fattening Tibetan sheep with dietary different NFC/NDF

2.3.4 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌科水平下菌群分布的影響

由表5可知，育肥藏羊瘤胃內(nèi)被孢霉科(Mortierellaceae)和叢赤殼科(Nectriaceae)為優(yōu)勢(shì)菌科，相對(duì)豐度分別大于3.17%和2.01%。Ⅵ組瘤胃內(nèi)被孢霉科相對(duì)豐度最高，但因組內(nèi)差異較大而表現(xiàn)為各組之間差異不顯著(P>0.05)。Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組瘤胃內(nèi)叢赤殼科、隔孢伏革菌科(Peniophoraceae)和毛球殼科(Lasiosphaeriaceae)相對(duì)豐度顯著低于Ⅱ組(P<0.05)。Ⅴ組瘤胃內(nèi)曲霉科(Aspergillaceae)和黏毛菌科(Myxotrichaceae)相對(duì)豐度顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)。Ⅲ組瘤胃內(nèi)蠟殼耳科(Sebacinaceae)相對(duì)豐度顯著高于其余各組(P<0.05)。

表5 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌科水平下相對(duì)豐度的影響Table 5 Effects of dietary different NFC/NDF on relative abundance of rumen fungi at family level of fattening Tibetan sheep %

2.4 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

2.4.1 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃細(xì)菌Beta多樣性的影響

由圖2可知，各組在主成分2(貢獻(xiàn)率為9.18%)和主成分3(貢獻(xiàn)率為4.88%)上的細(xì)菌多樣性無(wú)明顯差異，各組樣本未存在明顯分區(qū)。

圖2 飼糧不同NFC/NDF下育肥藏羊瘤胃細(xì)菌區(qū)系PCoA圖Fig.2 PCoA diagram of rumen bacteria flora in fattening Tibetan sheep with dietary different NFC/NDF

2.4.2 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃細(xì)菌屬水平下菌群分布的影響

由表6可知，Ⅴ、Ⅶ組瘤胃內(nèi)奎因菌屬(Quinella)相對(duì)豐度顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

表6 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃細(xì)菌屬水平下相對(duì)豐度的影響Table 6 Effects of dietary different NFC/NDF on relative abundance of rumen bacterial at genus level of fattening Tibetan sheep %

Ⅵ組瘤胃內(nèi)克里斯滕菌科_R-7_群(Christensenellaceae_R-7_group)相對(duì)豐度最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組瘤胃內(nèi)瘤胃球菌科_NK4A214_群(Ruminococcaceae_NK4A214_group)相對(duì)豐度較高，顯著高于其他各組(P<0.05)。Ⅲ組瘤胃內(nèi)普雷沃菌_1(Prevotella_1)相對(duì)豐度最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。Ⅶ組瘤胃內(nèi)毛螺菌科_NK3A20_群(Lachnospiraceae_NK3A20_group)相對(duì)豐度最高，顯著高于其他各組(P<0.05)，Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組瘤胃內(nèi)鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)相對(duì)豐度顯著低于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

3 討 論

3.1 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊生長(zhǎng)性能的影響

相對(duì)于粗飼料，精料中的營(yíng)養(yǎng)成分，諸如粗蛋白質(zhì)、碳水化合物、粗脂肪等含量更為豐富[18]。本試驗(yàn)采用同種精飼料和粗飼料，通過(guò)改變其比例而實(shí)現(xiàn)試驗(yàn)飼糧不同精粗比及NFC/NDF。高NFC/NDF的飼糧中主要營(yíng)養(yǎng)成分含量較高，從而能夠提高藏羊的生長(zhǎng)發(fā)育速度，并在NFC/NDF為2.69時(shí)達(dá)到最佳，說(shuō)明添加70%精飼料能夠充分滿足機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)需求，但當(dāng)飼糧NFC/NDF達(dá)到2.86時(shí)，生長(zhǎng)速度卻有降低的趨勢(shì)，可能是過(guò)高的精料水平影響了飼糧的適口性，導(dǎo)致采食量降低，從而影響了其生長(zhǎng)性能。

3.2 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

NH3-N是瘤胃微生物生長(zhǎng)代謝的重要氮源，其含量主要受飼糧粗蛋白質(zhì)水平和蛋白質(zhì)降解速率的影響[19]。本試驗(yàn)中，瘤胃內(nèi)NH3-N含量隨飼糧NFC/NDF增加有升高的趨勢(shì)，說(shuō)明飼糧NFC/NDF直接影響了飼糧中粗蛋白質(zhì)水平，從而對(duì)藏羊瘤胃氮代謝過(guò)程中外源蛋白質(zhì)和內(nèi)源含氮物質(zhì)降解產(chǎn)生的NH3-N含量造成影響。鮑宏云等[20]、娜仁花等[21]、Ma等[22]的研究結(jié)果均表明隨隨著飼糧中精料水平的升高，瘤胃內(nèi)NH3-N含量顯著上升，與本研究結(jié)果一致。TVFA是由飼糧中碳水化合物發(fā)酵所產(chǎn)生的，飼糧精料中的非結(jié)構(gòu)性碳水化合物相較于粗飼料中的結(jié)構(gòu)型糖類能夠在瘤胃中迅速發(fā)酵[23]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧NFC/NDF達(dá)到2.69時(shí)，TVFA含量最高，而飼糧NFC/NDF達(dá)到2.86時(shí)，TVFA含量反而下降，可能是由于非結(jié)構(gòu)性碳水化合物含量過(guò)多影響了瘤胃微生物生長(zhǎng)和定植，從而影響了瘤胃發(fā)酵。楊艷[24]等研究也發(fā)現(xiàn)，隨精料水平的升高，牛瘤胃內(nèi)TVFA含量呈現(xiàn)升后降的趨勢(shì)，與本研究結(jié)果相似。乙酸、丙酸和丁酸是TVFA的主要組成成分，瘤胃內(nèi)乙酸含量有隨飼糧NFC/NDF的降低而升高的趨勢(shì)，而丙酸含量呈相反趨勢(shì)，說(shuō)明采食纖維性碳水化合物有利于瘤胃發(fā)酵生成乙酸，而非結(jié)構(gòu)性碳水化合物在瘤胃中發(fā)酵易形成丙酸[25]；瘤胃內(nèi)乙酸/丙酸是瘤胃發(fā)酵類型的標(biāo)志，一般認(rèn)為乙酸/丙酸高于3為乙酸型發(fā)酵[26]。本試驗(yàn)中，瘤胃內(nèi)乙酸/丙酸有隨飼糧NFC/NDF的降低而升高的趨勢(shì)，說(shuō)明飼糧NFC/NDF的降低使瘤胃發(fā)酵模式由丙酸發(fā)酵逐漸過(guò)渡為乙酸發(fā)酵。

3.3 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃真菌多樣性的影響

付子琳等[27]研究表明，放牧組灘羊瘤胃真菌的相對(duì)豐度顯著高于舍飼組。王彩蝶等[28]在綿羊上的研究證實(shí)，高濃度醋酸棉酚能促進(jìn)瘤胃真菌的生長(zhǎng)，隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)瘤胃真菌對(duì)高濃度的棉酚會(huì)產(chǎn)生一定的耐受性，使得瘤胃真菌重新達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。本試驗(yàn)中，飼糧NFC/NDF水平為2.69時(shí)，Ace指數(shù)較高，表明此時(shí)瘤胃真菌群落的相對(duì)豐度最高。

科水平上，被孢霉科和叢赤殼科為優(yōu)勢(shì)菌科，且高NFC/NDF飼糧組的叢赤殼科、隔孢伏革菌科和毛球殼科相對(duì)豐度低于低NFC/NDF飼糧組。前期研究發(fā)現(xiàn)，被孢霉科能夠產(chǎn)生多不飽和脂肪酸，進(jìn)而顯著影響瘤胃發(fā)酵參數(shù)[29]。于伽等[30]在飼糧中添加多不飽和脂肪酸后發(fā)現(xiàn)，飼糧中精粗比為20∶80時(shí)適合瘤胃微生物的發(fā)酵。叢赤殼科在自然界通常以寄生或腐生的方式生存，一般寄生于衰退或即將死亡的動(dòng)植物上，對(duì)維持微生物生態(tài)平衡發(fā)揮一定作用[31]。目前，瘤胃中曲霉科的功能尚無(wú)報(bào)道，但子囊菌門占比最高，結(jié)合子囊菌門的功能以及曲霉科的在其比例，我們推測(cè)曲霉科也有促進(jìn)降解植物細(xì)胞壁、分解纖維素等難以降解的結(jié)構(gòu)性碳水化合物的作用。

3.4 飼糧不同NFC/NDF對(duì)育肥藏羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

研究表明，瘤胃球菌屬與纖維降解直接相關(guān)，其降解產(chǎn)生的短鏈脂肪酸可供宿主使用，因而其相對(duì)豐度理論上與飼糧精粗比有關(guān)[32]。在本試驗(yàn)中，瘤胃球菌科_NK4A214_群廣泛存在于低NFC/NDF(1.88、1.63和1.43)組中，與上述研究結(jié)果一致。普雷沃菌屬_1被證實(shí)為多糖降解菌屬，盡管無(wú)法直接降解纖維素，卻可以通過(guò)與纖維降解菌結(jié)合，進(jìn)而高效降解木聚糖和果膠[33]。韓旭峰[34]以不同精粗比飼糧飼喂陜北絨山羊發(fā)現(xiàn)，高精料水平組瘤胃中普雷沃菌屬_1的相對(duì)豐度顯著高于低精料水平組。本試驗(yàn)證實(shí)，適宜的精料水平可促進(jìn)普雷沃菌屬_1生長(zhǎng)，當(dāng)NFC/NDF水平在2.42時(shí)普雷沃菌屬_1相對(duì)豐度達(dá)到峰值，可能是由于含大量的低聚果糖以及淀粉物質(zhì)的飼糧能夠誘導(dǎo)普雷沃菌屬_1的快速增長(zhǎng)。

4 結(jié) 論

飼糧NFC/NDF對(duì)高原型育肥期藏羊生長(zhǎng)發(fā)育、瘤胃揮發(fā)性脂肪酸含量以及微生物多樣性有一定影響，當(dāng)飼糧NFC/NDF為2.69時(shí)，不僅能夠促進(jìn)高原型藏羊生長(zhǎng)發(fā)育，而且也能夠促進(jìn)瘤胃發(fā)酵并提高微生物多樣性。