黃 予，王 媛，丁 恒，丁 權(quán)，李志強，陳旭東，楊雪斌

（云南省紅河哈尼族彝族自治州中心血站 血型參比室，云南 蒙自 661000）

Rh 血型系統(tǒng)是所有血型系統(tǒng)中最復雜的血型系統(tǒng)，Rh 抗原是由位于1 號染色體短臂上的2 個同源及緊密連鎖的基因鎖編碼；RHD 基因編碼D抗原，RHCE 編碼Cc 和Ee 抗原[1]。目前常規(guī)篩查僅做RhD，隨著Rh 血型抗體檢出概率的增加及其它地區(qū)先后對Rh 血型分型進行過調(diào)查，了解本地區(qū)Rh 分型特征對輸血工作有極大指導作用。紅河州是全國唯一一個哈尼族彝族自治州，具備哈尼族人口較多的特點，此前未曾見有針對哈尼族無償獻血者人群Rh 血型分型的報道。本研究調(diào)查紅河州哈尼族無償獻血者人群的Rh 血型分型特征，與其它地區(qū)不同民族間對比，分析他們之間的差異，為了解哈尼族血型特征及遺傳起源提供材料。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2019年10月22日-2020年4月21日在本血站獻血的1537 名18～54 歲哈尼族無償獻血者。

1.2 材料與試劑

瑞士生產(chǎn)的TECAN 自動加樣儀RSP10014；日本Kubota 公司生產(chǎn)血型免疫離心機KA- 2200；恒溫水浴箱HH-W21-600；平板離心機ROTINA 35；Heidolph 震蕩儀平板離心機Titramax 101；抗-C（批號：20193001）、抗-c（批號：20193101）、抗-E（批號：20193202，20203201）、抗-e（批號：20193301）IgG 型抗-D（批號：20181111）、抗人球蛋白（IgG、C3d） （批號：20195001） 均為上海血液生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)；IgG 型抗-D（批號：20190601203） 北京金豪生產(chǎn)；IgG/IgM 型抗-D（批號：BMJ170513）為英國Bioscot 公司生產(chǎn)。

1.3 實驗方法

采集EDTA 抗凝血3～5mL，離心后在RSP 全自動加樣儀上采用微板法進行ABO、RhD、C、c、E、e 抗原分型，微板法篩查結(jié)果為RhD 陰性的標本再進行RhD 陰性確認試驗。RhD 陰性確認試驗采用2 個不同廠家不同批號的IgG 型抗-D 試劑及另一個廠家IgG/IgM 型抗-D 試劑同時進行試管法抗球蛋白試驗。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用直接計數(shù)法計算表型的頻率、基因及單倍型頻率，參考趙桐茂的《估計Rh 基因組合體頻率的兩種簡易方法》[2]，紅河哈尼族無償獻血者人群單倍型及其它地區(qū)單倍型，A、B、O、AB 4 種血型Rh 分型比較以及男女Rh 分型比較均采用χ2檢驗，應用SPSS25.0 軟件進行分析。

2 結(jié)果

1537 名哈尼族獻血者Rh 表型分布、單倍型及基因頻率，見表1，利用所得表型觀察值和期望值進行Hardy-weinberg 檢驗，結(jié)果見表1（χ2＝10.7683，P＞0.05），觀察值與期望值差異無統(tǒng)計學意義，符合Hardy-weinberg 定律。采用卡方檢驗比較，得出紅河州哈尼族無償獻血者人群Rh 單倍型與中國漢族人群、中國南方人群、中國人群、洛陽地區(qū)獻血者人群以及元江哈尼族人群Rh 單倍型均無明顯差異，見表2。統(tǒng)計A、B、O、AB 4種血型分別對應的各Rh 表型人數(shù)，采用卡方檢驗進行比較，結(jié)果得出4 種血型Rh 各表型間均無明顯差異，見表3。統(tǒng)計紅河州哈尼族無償獻血者人群男女比例及男女各Rh 分型人數(shù)，1537 名哈尼族無償獻血者中有836 名男性701 名女性，男女之間各Rh 分型無顯著差異，見表4。

表1 哈尼族無償獻血者Rh表型分布及基因、單倍型頻率

表2 紅河州哈尼族無償獻血者人群與不同地區(qū)人群Rh單倍型比較

表3 紅河州哈尼族無償獻血者人群A、B、O、AB 4種血型Rh分型比較

表4 紅河州哈尼族無償獻血者人群男女Rh分型比較

3 討論

紅河哈尼族彝族自治州11 個世居民族中哈尼族人口數(shù)列居第三，占全州總?cè)丝诘?8.7%，占全國哈尼族總?cè)丝诘?0%。主要分布于元陽、紅河、綠春、金平等縣[5]。本研究樣本采集包含州內(nèi)各地團體及街頭所有無償獻血者中哈尼族無償獻血者人群樣本?！东I血法》規(guī)定獻全血間隔期限最短為6 個月，樣本采集時間跨度6 個月，避免研究樣本重復。

Rh 血型系統(tǒng)中與臨床關系最為密切的抗原是D、C、c、E、e，這5 種抗原免疫原性從大到小為DP＞EP＞cP＞CP＞e。研究表明，臨床上檢出的不規(guī)則抗體主要集中于Rh 血型系統(tǒng)，Rh 血型抗體被認為具有導致溶血性輸血反應的能力[6,7]。IgG 型Rh血型抗體被認為具有導致新生兒溶血病的能力。文獻研究結(jié)果顯示，除實現(xiàn)ABO 血型、Rh（D）完全相合外，對Rh（C、c、E、e）抗原進行匹配性輸注，可大幅提高血液輸注有效率，減少不良反應的發(fā)生[8,9]。對育齡期女性進行Rh（C、c、E、e）抗原同型輸注，可以避免由于輸血免疫造成的新生兒溶血病發(fā)生。

Rh 血型的8 種單倍型，可以兩兩配對產(chǎn)生36種基因型，但用抗-D、-C、-c、-E、和-e 只能區(qū)分18 種表型。本研究共檢出10 種表型，其中檢出少有的表型CCDEe 15 例，CcDEE 3 例，CCdee 3 例，并未檢出極其罕見的CCDEE、ccdEE、CCdEE、CCdEe、CcdEE、CcdEe 幾種表型。抗原基因頻率分布特點為：C、e 抗原頻率在80%左右，c、E 抗原頻率在20%左右。本地區(qū)哈尼族無償獻血者人群D-率為0.5%，稍高于我國漢族人群和大部分少數(shù)民族人群。在不同人群中，單倍型的頻率有較大差異，CDe 是中國人群中最常見的Rh 單倍型，連鎖率最高的等位基因是Ce[4]，本研究人群等位基因連鎖率高低順序為：CeP＞cEP＞ceP＞CE。北方人群中各個種類的單倍型都有較高頻率，而南方人群則以主流單倍型最為突出，其他均為稀有型，相應地造成雜合度降低[4]。本研究中單倍型CDe 頻率最高（0.7497），其次為cDE（0.1658），其它單倍型頻率都不超過0.1，符合南方人群單倍型分布特征。經(jīng)過比較得出紅河州哈尼族無償獻血者人群單倍型頻率與中國漢族人群、中國南方人群、中國人群、洛陽地區(qū)無償獻血者人群及元江哈尼族人群之間的差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

由表3得出紅河州哈尼族無償獻血人群A、B、O、AB 4 種血型的Rh 分型特征呈一致性，ABO 血型系統(tǒng)并不會影響Rh 分型特征。進一步分析本研究人群男女之間Rh 分型特征，可以得出不同性別之間不存在Rh 分型的差異，這與徐樸等[10]報道的湖北漢族RhD 陽性健康人群Rh 分型特征結(jié)果不一致，后者研究中Rh 分型在不同性別間存在區(qū)別，這可能與樣本量差異以及研究對象不一致有關，有待進一步研究。

總之，本研究得出紅河州哈尼族無償獻血者人群Rh 表型分布特征：表現(xiàn)型CCDee 最常見，單倍型CDe 頻率最高。Rh 單倍型頻率與中國漢族人群沒有差異，總體分布特征與中國大部分人群相符。ABO 血型系統(tǒng)不會影響Rh 分型特征，不同性別之間不存在Rh 分型的差異。