李辰鈺 李佳琪 顏瑞辰 李晨光

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院，吉林 吉林 132101）

百合作為一種藥食兩用植物，應(yīng)用歷史超過2 000年，其主要來源為百合科植物卷丹（Lilium lancifoliumThumb.）、百合（Lilium browniiF.E.Brown var.viridulumBaker）或細葉百合（Lilium pumilumDC.）的干燥肉質(zhì)鱗葉［1］。卷丹是百合科百合屬多年生草本球根植物，其因火紅的花色反卷的花瓣而享有卷丹的美名，被稱為“百合之冠”。細葉百合為百合科百合屬多年生草本植物，花色美麗嬌艷具有觀賞價值，是抗旱性優(yōu)良的育種品種。百合中含有薯蕷皂苷、多糖類、生物堿等多種生物活性成分，具有寧心安神，促進血液循環(huán)，美容養(yǎng)顏等功效［2］。百合皂苷類型多為甾體皂苷［3］，具有抗抑郁，鎮(zhèn)靜催眠，抑制人前列腺癌細胞增殖和侵襲、抗炎抑菌等作用［4］。

百合炮制方法有炙制、熬制、蜜制、炒制和蒸制。百合主要分布于湖南、四川、河南、江蘇和浙江等省，野生資源較少。周秀玲等運用分光光度法，用濃硫酸作為顯色劑測定不同品種百合中多糖和皂苷的含量，結(jié)果表明，卷丹中皂苷含量最高［5］。傅春燕等人采用香草醛-高氯酸顯色測定10個批次龍牙百合中總皂苷含量，結(jié)果表明，該方法準確、可靠、穩(wěn)定性好，可作為龍牙百合皂苷定量分析的有效方法［6］。高彥寧等以高氯酸作為顯色劑在408 nm處測定皂苷含量，來源不同的百合總皂苷含量有所差異，但江蘇南通卷丹中總皂苷含量最高［7］。賀曉龍等對藥用植物百合傳統(tǒng)與現(xiàn)代的提取方法進行概述并進行細致的比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)提取方法研究得更加透徹，提取率更高，其中是會浪費許多化學(xué)試劑而污染空氣環(huán)境，而新方法污染更少、省時省力，但提取率低一些［8］。張璐等運用超聲波法與酶解法相結(jié)合提取百合總皂苷并確定了最佳提取工藝，果膠酶的合理使用對百合中不溶解物質(zhì)淀粉和蛋白質(zhì)有一定水解作用，提高了提取物得率，超聲波的強烈振蕩有助于百合有效成分溶出，酶解法對溫度有一定的要求，在低溫度下進行操作節(jié)省溶劑的同時節(jié)省能源［9］。何郁菲等對比水浴回流法和超聲波輔助回流法提取百合總皂苷，結(jié)果表明，超聲波輔助回流提取法明顯優(yōu)于水浴回流提取法，超聲波輔助回流提取法用時較短，避免藥材因過長時間加熱對有效藥用成分的不良影響，同時雜質(zhì)的溶解量降低，更有益于人體健康［10］。羅林明等對3種藥用植物百合進行化學(xué)成分及藥理作用方面的概括總結(jié)，百合主要含有甾體皂苷、甾醇、酚酸甘油酯、黃酮、苯丙素、生物堿和多糖等化學(xué)成分［11］。目前，對百合不同炮制品總皂苷含量的研究罕有報道。鑒于此，筆者使用香草醛-高氯酸法測定薯蕷皂苷含量，超聲波輔助提取不同品種百合炮制品中的總皂苷，通過統(tǒng)計分析百合不同品種及其各炮制品中總皂苷的含量差異，為百合的栽培、育種及開發(fā)利用提供相應(yīng)的理論指導(dǎo)［12］。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

龍牙百合（Lilium browniivar.viridulum）購于湖南邵陽，蘭州百合（Lilium davidiivar.willmottiaeE.H.Wilson Raffil）購于甘肅蘭州，卷丹（Lilium lancifoliumThumb.）和細葉百合（Lilium pumilumDC.）采自吉林省吉林市左家鎮(zhèn)，經(jīng)中藥學(xué)院馬堯教授鑒定確認（樣品見圖1）。

圖1 百合樣品

薯蕷皂苷標準品購置于成都瑞芬思生物科技有限公司，其余試劑乙醇、香草醛、醋酸、高氯酸均為分析純。

1.2 試驗儀器

試驗所需儀器有上海精科可見分光光度計721G-100、日本島津電子天平AUW120D、寧波新藝SB-5200DT超聲波清洗機。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液制備。精密稱定薯蕷皂苷標準品5.2 mg，置于25 mL容量瓶中，加80%乙醇定容，搖勻，既得0.208 mg/mL標準品溶液。

1.3.2 標準曲線測定。分別精密吸取標準品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL置于25 mL具塞試管中，揮干溶劑，加入2.5%香草醛-冰乙酸2 mL、高氯酸5 mL，搖勻，在80℃恒溫水浴中顯色25 min后取出，放入常溫水浴中停止反應(yīng)，再加入5 mL冰乙酸混勻。將2.5%香草醛-冰乙酸7 mL和高氯酸5 mL作為空白對照，使用分光光度計在460 nm波長處測定吸光度值，進行線性回歸，得到回歸方程［13］。

1.3.3 不同百合炮制品制備。①凈百合：新鮮百合掰瓣洗凈，篩去雜質(zhì)，放入烤箱中60℃烘至脆硬狀態(tài)。②蜜百合：取凈百合置于熱鍋中，文火翻炒至表面微微泛黃，噴淋用熱水化開的煉蜜，繼續(xù)翻炒至干燥不黏手即可出鍋。每100 kg百合使用煉蜜20 kg［14］。③蒸百合：生百合洗凈分瓣置于籠屜中，大火燒水燒開后將籠屜架于水上，轉(zhuǎn)小火，保持水微沸狀態(tài)，蒸至百合內(nèi)里熟透［15］，掰開后呈磨砂質(zhì)感，冷卻后放入烘箱，烘干至脆硬狀態(tài)。

1.3.4 百合總皂苷提取。①浸提法：稱取蘭州百合凈制品粉末（過0.28 mm篩，60℃烘干）5 g，在25 mL的80%乙醇中浸泡12 h，濾過粉末定容至25 mL容量瓶中（見圖2）。

圖2 浸提操作示意圖

②超聲法：稱取蘭州百合凈制品粉末（過0.28 mm篩，60℃烘干）5 g，使用80%乙醇25 mL在55℃條件下超聲提取30 min，取出后過濾到25 mL容量瓶中并定容。

1.3.5 總皂苷含量測定。向具塞試管加入3 mL待測液，揮干溶劑，再加入2.5%香草醛-冰乙酸2 mL、高氯酸5 mL，搖勻，在80℃恒溫水中顯色25 min后取出放入常溫水浴中停止反應(yīng)，再加入冰乙酸5 mL混勻。以2.5%香草醛-冰乙酸7 mL、高氯酸5 mL作為空白對照，使用分光光度計在460 nm波長處測定吸光度值，以回歸方程計算待測液濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線繪制

以吸光度為橫坐標、百合總皂苷濃度為縱坐標，回歸處理后得到回歸方程Y=1.431X-0.017 1，R2=0.999 2（見圖3），表明線性關(guān)系良好。

圖3 百合總皂苷標準曲線

2.2 不同提取方法對百合總皂苷含量的影響

取蘭州百合凈制品粉末（60℃烘干，過0.28 mm篩）5 g，根據(jù)1.3.4試驗方法分別檢測各個樣品，按照回歸方程計算結(jié)果，如表1所示。結(jié)果表明，采用浸提法提取蘭州百合平均總皂苷含量為0.20 mg/g，超聲輔助提取蘭州百合平均總皂苷含量為1.10 mg/g，后者明顯高于前者，表明超聲法提取效果明顯優(yōu)于浸提法，后續(xù)試驗采用超聲輔助法提取不同炮制品百合總皂苷。

2.3 不同品種百合炮制品的總皂苷含量差異

采用超聲法對百合樣品進行處理，并使用1.3.2中的顯色條件分別對樣品進行顯色處理。按照回歸方程進行計算，得到樣品總皂苷含量，測定結(jié)果見表2。就凈制品而言，不同品種百合中卷丹的總皂苷含量為3.19 mg/g，明顯高于其他品種，龍牙百合為2.96 mg/g，細葉百合為1.69 mg/g，蘭州百合為1.48 mg/g。生產(chǎn)上卷丹種植面積較廣，臨床入藥較為普遍。蘭州百合的皂苷含量較低，日常生活中多制作藥膳食用或作為保健品使用，不適宜入藥。同種百合不同種炮制品的總皂苷含量存在差異，蜜制品總皂苷含量最高，平均值為2.40 mg/g，其次是凈制品，平均值為2.33 mg/g，蒸制百合的總皂苷含量最低，平均值為1.90 mg/g。蜜制百合總皂苷含量明顯高于其他2種，蒸制品總皂苷含量相較于凈制品略有流失，原因可能是由于蒸制品加工過程中總皂苷部分溶解于水蒸氣而損失，而蜜制加工能有效減少百合中總皂苷的流失，煉蜜中糖與皂苷元結(jié)合，從而使總皂苷含量上升。

表2 百合不同炮制方法的總皂苷含量比較 mg/g

3 討論

不同品種百合的不同炮制方法之間的總皂苷含量存在差異，以蜜制卷丹的總皂苷含量最高，蒸制蘭州百合的總皂苷含量最低；蜜制品的總皂苷含量明顯高于蒸制品和凈制品，卷丹的總皂苷含量明顯高于細葉百合、龍牙百合和蘭州百合。

試驗結(jié)果表明，傳統(tǒng)方法蜜制百合對于增加總皂苷含量有著明顯的效果；在日常應(yīng)用中，卷丹適合作為中藥材使用，細葉百合和龍牙百合適合作為藥食同源或者保健品等對藥用成分要求較低的原材料，而蘭州百合口感鮮甜，不似其他品種藥材味道苦澀，更適用于制作藥膳、保健品或者單純作為蔬菜使用。

目前市場上以卷丹和蘭州百合的銷售量最高，其中卷丹藥用效果最佳，蘭州百合口感最佳，而細葉百合和龍牙百合由于藥效和口感都較次而沒有太大的市場，且在未來的市場中這一現(xiàn)象還會持續(xù)出現(xiàn)。