龐康清，馬洪德，楊汝磊，龐國(guó)宏

0 引言

肝細(xì)胞癌是全球第六大常見(jiàn)癌癥，同時(shí)也是癌癥相關(guān)死亡的第三大原因。數(shù)據(jù)顯示2020年全球新增肝癌病例超過(guò)900000例[1]。目前，甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）是臨床上診治肝細(xì)胞癌最常用的生物標(biāo)志物，但其特異性較差，篩查和診斷價(jià)值并不高[2-4]。因此，尋找新的肝細(xì)胞癌早期診斷標(biāo)志物是臨床實(shí)踐的迫切需要。穿透素-3（pentraxin-3,PTX3）是由8個(gè)亞基組成的同源多聚糖蛋白，屬于正五聚蛋白家族[5]。功能上，PTX3在炎性反應(yīng)、組織修復(fù)及腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用[6-8]。近年來(lái)有研究表明，PTX3也與某些類(lèi)型癌癥的預(yù)后有關(guān)，比如結(jié)直腸癌[9]、肺癌[10]、胃癌[11]等。此外，PTX3已被證明能夠促進(jìn)肝癌的進(jìn)展，且腫瘤組織PTX3高表達(dá)與肝癌患者的不良預(yù)后具有相關(guān)性[12]。但血清中PTX3水平在肝細(xì)胞癌中的作用仍待進(jìn)一步研究，本研究旨在分析血清中PTX3水平在肝細(xì)胞癌中的診斷價(jià)值，以期為此類(lèi)疾病的早期診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月—2020年7月平頂山市第一人民醫(yī)院收治的78例肝癌患者，其中27例病因與非酒精性脂肪肝有關(guān)、30例合并乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染、8例酒精性肝病和13例隱源性肝癌。根據(jù)《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[13]中所述中國(guó)肝癌的分期方案（China liver cancer staging,CNLC）進(jìn)行分期：Ⅰ期20例（Ⅰa期13例、Ⅰb期7例）、Ⅱ期27例（Ⅱa期6例、Ⅱb期21例）、Ⅲ期31例（Ⅲa期4例、Ⅲb期27例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）根據(jù)病史、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)及病理學(xué)檢查確診為原發(fā)性肝癌；（2）采集血液前未接受放化療及免疫抑制劑治療；（3）無(wú)家族遺傳病和精神疾病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有自身免疫性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病及其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；（2）妊娠或哺乳期階段婦女。同時(shí)選取本院健康體檢者78例作為對(duì)照組。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采集患者的清晨空腹靜脈血5 ml，于4℃離心機(jī)中以3 000 r/min的速度離心15 min后將上清液置于-80℃冰箱保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清PTX3水平，試劑盒購(gòu)自上海艾博抗貿(mào)易有限公司，操作步驟根據(jù)試劑盒中提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。計(jì)數(shù)資料的組間比較采用卡方分析。采用MedCalc 20.009軟件構(gòu)建受試者工作特征（receiver operating characteristics,ROC）曲線。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)為0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象的一般資料比較

本研究共納入肝癌患者78例，健康對(duì)照組78例。肝癌組男45例、女33例，平均年齡為（49.44±8.21）歲；健康對(duì)照組男42例、女36例，平均年齡為（48.98±9.34）。兩組研究對(duì)象在年齡和性別資料上差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較Table 1 Comparison of basic characteristics between two groups

2.2 兩組血清中PTX3表達(dá)的比較

肝癌組血清PTX3表達(dá)水平為14.88±2.13，健康對(duì)照組血清PTX3表達(dá)水平為5.24±0.49。兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=25.631,P=0.002）。

2.3 不同分期肝癌患者血清中PTX3表達(dá)的比較

Ⅰ期肝癌組血清PTX3水平高于Ⅱ期組，Ⅱ期肝癌組血清PTX3水平高于Ⅲ期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同分期肝癌患者血清PTX3表達(dá)水平比較 (±s)Table 2 Comparison of serum PTX3 expression levels in patients with different stages of hepatocellular carcinoma (±s)

表2 不同分期肝癌患者血清PTX3表達(dá)水平比較 (±s)Table 2 Comparison of serum PTX3 expression levels in patients with different stages of hepatocellular carcinoma (±s)

Notes:CNLC:China liver cancer staging;CNLC stageⅠincluded ⅠA and ⅠB,stage Ⅱ included ⅡA and ⅡB,stage Ⅲ included ⅢA and ⅢB;*:P＜0.05,compared with stage Ⅰ group;#:P＜0.05,compared with stage Ⅱ group.

2.4 PTX3水平與肝癌患者病理特征的關(guān)系

腫瘤直徑≥5 cm患者血清中PTX3水平明顯低于腫瘤直徑＜5 cm患者（P＜0.05）。合并HBV感染的肝癌患者血清中PTX3水平高于無(wú)HBV感染的患者（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 血清PTX3水平與患者病理特征的關(guān)系 (±s)Table 3 Relation between serum PTX3 level and pathological characteristics of patients with hepatocellular carcinoma (±s)

表3 血清PTX3水平與患者病理特征的關(guān)系 (±s)Table 3 Relation between serum PTX3 level and pathological characteristics of patients with hepatocellular carcinoma (±s)

Notes:HBV:hepatitis B virus;AFP:alpha-fetoprotein.

2.5 PTX3對(duì)肝癌的診斷價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示：血清PTX3水平輔助診斷肝癌ROC曲線的AUC為0.938，95%CI為0.888～0.970，敏感度為88.5%，特異性為84.6%，約登指數(shù)為0.731，可見(jiàn)其對(duì)肝癌診斷的預(yù)測(cè)能力具有較高的準(zhǔn)確性，見(jiàn)圖1。

圖1 ROC曲線分析血清PTX3水平對(duì)肝癌的診斷價(jià)值Figure 1 Prognostic value of serum PTX3 for hepatocellular carcinoma analyzed by ROC curve

3 討論

肝癌是一種發(fā)生于肝臟的常見(jiàn)惡性腫瘤[14]，分為原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌，以原發(fā)性更多見(jiàn)。肝癌發(fā)病隱匿，患者早期無(wú)特異性癥狀，多數(shù)患者在中晚期尋求診斷和治療，往往錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)間[15]。因此，尋求一種操作簡(jiǎn)便、非介入性且重復(fù)性好的早期肝癌篩查診斷方法一直受到關(guān)注。近年來(lái)，研究表明多種血液標(biāo)志物對(duì)肝癌的診斷具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值[16-18]。

PTX3又稱(chēng)腫瘤壞死因子刺激基因14（tumor necrosis factor-stimulated gene 14,TSG-14），與C反應(yīng)蛋白（C reactive protei,CRP）同屬于一種在進(jìn)化中高度保守的正五聚蛋白家族[19-20]。結(jié)構(gòu)上，PTX3有一個(gè)與其他已知蛋白無(wú)序列相似性的N端結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C端結(jié)構(gòu)域，由8個(gè)亞基組成，含有381個(gè)氨基酸[19]。PTX3已在某些腫瘤中被證實(shí)是一種外在抑癌因子，通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)腫瘤進(jìn)展[7]。然而，PTX3在癌癥中是否起到保護(hù)或促進(jìn)作用仍未完全明確。但有研究發(fā)現(xiàn)在肝細(xì)胞癌中PTX3高表達(dá)并通過(guò)驅(qū)動(dòng)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化加速腫瘤轉(zhuǎn)移，提示其與預(yù)后不良相關(guān)[12]。這提示血清中PTX3水平可能與肝癌的發(fā)展相關(guān)。

肝癌的診斷主要依靠影像學(xué)，但由于影像學(xué)檢查的放射性，降低了用于肝癌篩查的可能性；又由于影像學(xué)檢查的敏感度，降低了早期診斷的可能性。相反，血清標(biāo)志物由于簡(jiǎn)便快速且成本低廉的特點(diǎn)，普遍被患者所接受。目前，血清AFP水平的檢測(cè)是最常用的診斷方法。有研究顯示，血清AFP水平在部分良性肝病患者中也會(huì)處于高水平，但其并未出現(xiàn)肝癌的跡象，而在少數(shù)HCC患者AFP呈陰性或水平較低，這導(dǎo)致AFP對(duì)肝癌的誤診率較高[2,21]。因此，臨床實(shí)踐迫切需要發(fā)現(xiàn)一種新的肝癌診斷生物標(biāo)志物。

本研究將肝癌患者及健康體檢者作為研究對(duì)象，分析血清中PTX3表達(dá)水平，并采用ROC曲線分析血清PTX3對(duì)肝癌的輔助診斷價(jià)值。結(jié)果顯示，肝癌患者血清中PTX3水平顯著升高，提示通過(guò)測(cè)定機(jī)體血清中PTX3水平可能有助于診斷肝細(xì)胞癌。Deng等[20]研究表明慢性HBV感染患者血清PTX3水平高于健康對(duì)照者，而HCC患者血清PTX3水平高于慢性HBV感染患者，與本研究結(jié)果相類(lèi)似。通過(guò)構(gòu)建裸鼠肝癌模型[12]發(fā)現(xiàn)PTX3與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相關(guān)，可能通過(guò)激活EMT加速肝癌細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)，這提示PTX3可能通過(guò)EMT參與調(diào)控肝癌進(jìn)展。有研究結(jié)果顯示，隨著腫瘤分期的增加，肝癌患者血清PTX3水平相應(yīng)降低，F(xiàn)eder等[22]研究發(fā)現(xiàn)肝癌患者中血清PTX3水平并不隨著TNM分期而相應(yīng)增加，而Song等[12]應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)210例HCC患者腫瘤組織及癌旁組織中的PTX3水平，發(fā)現(xiàn)其在腫瘤組織中的表達(dá)異常升高，且與肝癌TNM分期顯著相關(guān)。此外，現(xiàn)有研究證明在癌癥中PTX3與補(bǔ)體C1q和H因子相互作用，激活并調(diào)節(jié)補(bǔ)體級(jí)聯(lián)，從而在人體內(nèi)作為外源性抑癌因子抑制腫瘤相關(guān)炎性反應(yīng)[23]。不同研究相悖的結(jié)果提示PTX3控制腫瘤發(fā)展過(guò)程中可能有多種因素參與，或許存在一種還未闡明的復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

本研究進(jìn)一步采用ROC曲線分析血清PTX3對(duì)肝癌（包括HBV感染者和非HBV感染者）的輔助診斷價(jià)值，AUC為0.938，說(shuō)明血清PTX3表達(dá)水平對(duì)肝癌的診斷具有較高的準(zhǔn)確性，但樣本量較少，可能存在一定的偏移，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究。