秦喜悅，張雷，溫艷斌，李景明，張雅麗*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100089）（2.大同市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山西大同 037000）

黃花菜（Hemerocallis citrinaBaroni）又名金針菜、萱草花、忘憂(yōu)草，為百合科阿?；▉喛戚娌輰俚囊环N多年生草本植物，主要種植于中國(guó)各地以及日本[1]。中醫(yī)認(rèn)為[2]黃花菜具有平肝養(yǎng)血、安神醒腦、消炎止痛、消腫利尿等功能，能治療耳鳴、心悸不穩(wěn)、黃疽、痢疾、水腫等多種病癥。黃花菜營(yíng)養(yǎng)豐富，含有維生素、糖類(lèi)、氨基酸、蛋白質(zhì)以及無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分。有研究[3]表明黃花菜中占比含量最高的營(yíng)養(yǎng)成分分別是碳水化合物、蛋白質(zhì)以及脂肪，它們的占比含量分別為60%、14%和2%，此外還含有60 余種揮發(fā)性物質(zhì)，其中醇類(lèi)6 種（28.06%），醛類(lèi)6 種（11.86%），酮類(lèi)10 種（14.34%），酯類(lèi)3 種（4.85%），烷烴類(lèi)8種（7.12%），烯烴類(lèi)6 種（7.47%），羧酸類(lèi)9 種（16.00%），酚類(lèi)3 種（2.10%），其他9 種（8.19%）。黃花菜的活性功能主要表現(xiàn)在抗抑郁[4-6]、降血脂[7,8]、降血糖[9]、抗腫瘤[10,11]、抗氧化[12,13]、抑菌[14,15]等方面。目前黃花菜活性功能成分的常用提取方法是溶劑萃取法[16]，但該法的提取溶劑會(huì)造成污染，容易對(duì)后期的實(shí)驗(yàn)造成影響，因此常采取一些輔助手段如超聲、微波等[17]，起到破壞植物細(xì)胞壁，促使功能成分盡快、盡量多溶出的作用。

糖脂代謝紊亂疾病是指由于機(jī)體長(zhǎng)期處于高糖、高脂環(huán)境下，體內(nèi)糖、脂代謝發(fā)生異常，并對(duì)機(jī)體健康造成損壞，從而導(dǎo)致一系列慢性疾病的發(fā)生，如高血壓、高血脂、糖尿病、心腦血管疾病等[18-20]。目前，我國(guó)心血管疾病死亡率居于首位[21]，此外，預(yù)計(jì)到2045 年全球糖尿病患者將達(dá)到6.29 億人[22]，糖脂代謝紊亂所帶來(lái)的人體健康問(wèn)題日益嚴(yán)重。近年來(lái)，天然植物由于其生物活性物質(zhì)的高效性和低毒性，在開(kāi)發(fā)新藥等方面取得重要進(jìn)展與認(rèn)可[23]，國(guó)內(nèi)外學(xué)者正在積極尋找干涉和治療糖脂紊亂的天然植物。

本研究利用超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法（Ultra performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry，UPLC-QQQ-MS/ MS）分析了黃花菜甲醇提取物中的成分，并以秀麗線(xiàn)蟲(chóng)為基礎(chǔ)，對(duì)糖脂損傷模型喂食不同濃度的黃花菜甲醇提取物，觀察其產(chǎn)卵量、身長(zhǎng)及壽命表型，深入探討黃花菜甲醇提取物對(duì)秀麗線(xiàn)蟲(chóng)糖脂損傷的干涉作用，對(duì)于綜合開(kāi)發(fā)利用黃花菜資源具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃花菜，山西省大同市；秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)（C.elegans BristolN2），由美國(guó)CGC（Caenorhabditis Genetics Center）提供；線(xiàn)蟲(chóng)的培養(yǎng)采用線(xiàn)蟲(chóng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基（NGM），以Escherichia coli strainOP 50 為食物飼喂，在22 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

甲醇、甲酸、正己烷、乙酸銨（色譜級(jí)），德國(guó)Merek Millipore 公司；蔗糖、硬脂酸、膽固醇、瓊脂、酵母浸粉、胰蛋白胨（生物級(jí)），藍(lán)博立德試劑公司。莨菪亭標(biāo)準(zhǔn)品：蘆丁、金絲桃苷、綠原酸、槲皮素、柯伊利素、芹菜素、莨菪亭、槲皮素、異鼠李素、花旗松素、原兒茶素、對(duì)香豆酸、龍膽酸、咖啡酸，所有標(biāo)準(zhǔn)品純度＞97%（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)），麥克林公司。

1.2 儀器與設(shè)備

中藥粉碎機(jī)，江陰萬(wàn)通藥化器械有限公司；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國(guó)IKA 公司；ALPHA 1-4 真空冷凍干燥機(jī)，德國(guó)Christ 公司；SCQ-3201 超聲波清洗機(jī)，上海聲彥超聲波有限公司；TQ-S 超高效液相色譜聯(lián)用儀，美國(guó)Waters 公司；3-30k 高速冷凍離心機(jī)，Sigma-Aldrich（上海）貿(mào)易有限公司；SZ66013ZL 體視鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司；SHP-80 生化培養(yǎng)箱，上海培因?qū)嶒?yàn)儀器有限公司；THZ-C 恒溫振蕩箱，太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠(chǎng)；DL-CJ-FND-∏超凈臺(tái)，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司。

1.3 黃花菜甲醇提取物的制備及成分分析

將黃花菜樣品干燥制成粉末，過(guò)100 目篩。取黃花菜樣品20 g，分散于500 mL 甲醇（80%）溶液中，超聲萃取20 min 后，經(jīng)7000 r/min 離心10 min，收集上清液，重復(fù)上述步驟3 次使上清液基本呈無(wú)色。合并上清液，減壓濃縮后冷凍干燥得到黃花菜甲醇提取物，并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

取黃花菜樣品0.2 g，分散于5 mL 甲醇（80%）溶液中，并加入低中高三個(gè)濃度的莨菪亭標(biāo)準(zhǔn)品，超聲萃取20 min 后，經(jīng)7000 r/min 離心10 min，收集上清液。重復(fù)上述步驟3 次使上清液基本呈無(wú)色，合并上清液，定容至25 mL。取10 mL 定容后的上清液，加入10 mL 正己烷，劇烈震蕩后靜置10 min，棄去上層液體，重復(fù)步驟使上層液體無(wú)色。取稀釋50 倍的黃花菜甲醇提取物樣液0.9 mL 分別與0.1 mL，100 ng/mL 的大豆苷元二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)液混合，過(guò)0.22 μm 濾膜后進(jìn)樣。利用UPLC-QQQ-MS/MS 對(duì)黃花菜甲醇提取物進(jìn)行成分分析。

1.4 秀麗線(xiàn)蟲(chóng)糖脂損傷模型的構(gòu)建

分別挑取同期化后的L1 期秀麗線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)于含有100 μmol/mL 蔗糖和100 μg/mL 硬脂酸的培養(yǎng)基中，每天觀察其壽命、身體長(zhǎng)度和產(chǎn)卵量的情況并準(zhǔn)確記錄。

1.5 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)及糖脂損傷模型的影響

將黃花菜甲醇提取物分別配成質(zhì)量濃度為0、400、800、1200 μg/mL 的稀釋液，做如下秀麗線(xiàn)蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)。

1.5.1 秀麗線(xiàn)蟲(chóng)壽命的測(cè)定

挑取同期化后的L1 期秀麗線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)于添加了相應(yīng)大腸桿菌OP50 的NGM 上，之后每天將培養(yǎng)基中活著的秀麗線(xiàn)蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至新培養(yǎng)基中培養(yǎng)，計(jì)數(shù)每天秀麗線(xiàn)蟲(chóng)存活數(shù)量，直至全部死亡，計(jì)每組線(xiàn)蟲(chóng)存活天數(shù)的平均數(shù)為平均壽命。每組20 條線(xiàn)蟲(chóng)，重復(fù)三次。

平均壽命的計(jì)算公式如下：

式中：

T：每條線(xiàn)蟲(chóng)的存活天數(shù)，d；

D：線(xiàn)蟲(chóng)總條數(shù)。

式中：

S：實(shí)驗(yàn)組平均壽命，d；

K：空白組平均壽命，d。

1.5.2 秀麗線(xiàn)蟲(chóng)身長(zhǎng)的測(cè)定

挑取同期化后的秀麗線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)于相應(yīng)的NGM中，在體式顯微鏡下，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身體與標(biāo)尺刻度盡可能重合，讀取其身長(zhǎng)度格數(shù)，按照標(biāo)尺與實(shí)際長(zhǎng)度的比例換算得到秀麗線(xiàn)蟲(chóng)實(shí)際身長(zhǎng)。線(xiàn)蟲(chóng)同期化當(dāng)天記為第0 d，記錄線(xiàn)蟲(chóng)身體長(zhǎng)度，直至第6 d。每組10 條線(xiàn)蟲(chóng)，重復(fù)三次。

1.5.3 秀麗線(xiàn)蟲(chóng)產(chǎn)卵量的測(cè)定

線(xiàn)蟲(chóng)同期化當(dāng)天記為第0 d，挑取L1 期幼蟲(chóng)至已添加相應(yīng)大腸桿菌OP50 的NGM 上，當(dāng)秀麗線(xiàn)蟲(chóng)長(zhǎng)至L4 期時(shí)，將每條L4 期線(xiàn)蟲(chóng)置于一個(gè)培養(yǎng)板上單獨(dú)培養(yǎng)。每天將該線(xiàn)蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至新NGM 上，直到其產(chǎn)卵結(jié)束。每次轉(zhuǎn)移后，清點(diǎn)舊培養(yǎng)基上子代的數(shù)量。每組10 條線(xiàn)蟲(chóng)，重復(fù)三次。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用ANOVA 模塊中的LSD 和Duncan’s Test 分析比較組間差異，p＜0.05 為差異顯著。采用Origin Pro 8.5作圖，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 黃花菜甲醇提取物的成分分析

本研究使用80%的甲醇通過(guò)超聲萃取對(duì)黃花菜進(jìn)行提取，并利用UPLC-QQQ-MS/MS 對(duì)黃花菜甲醇提取物進(jìn)行成分分析，分析結(jié)果如表1 所示，黃花菜甲醇提取物中含有蘆丁、綠原酸、槲皮素、咖啡酸、原兒茶素、對(duì)香豆酸、異鼠李素、花旗松素、龍膽酸等成分。其中，蘆丁含量最高，為5721.11 ng/mg。

表1 黃花菜甲醇提取物的成分與含量Table 1 The content in methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni

2.2 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的影響

普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)喂食不同濃度黃花菜甲醇提取物后的壽命情況如圖1a與表2 所示，與空白組相比，喂食400 μg/mL、800 μg/mL 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命無(wú)明顯作用，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組也沒(méi)有明顯提高的作用；而喂食1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命卻有降低作用，其生存率也一直低于空白組，說(shuō)明高濃度的黃花菜甲醇提取物會(huì)對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)造成一定程度的損傷。

表2 不同黃花菜甲醇提取物濃度下的普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)平均壽命Table 2 The mean lifespan of normal C.elegans with different concentrations of methanol extract of Hemerocallis citrina

身長(zhǎng)情況如圖1b 所示，在第1～3 d 快速生長(zhǎng)期時(shí)，不同濃度的黃花菜甲醇提取物對(duì)普通線(xiàn)蟲(chóng)身長(zhǎng)無(wú)明顯作用；在第4 d 時(shí)，與空白組相比，喂食400 μg/mL、800 μg/mL、1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)均有顯著提高作用，分別提高了4.40%、7.73%、10.51%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組提高了11.27%；在第5 d 時(shí)，喂食800 μg/mL、1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)仍有顯著提高作用，與空白組相比分別提高了5.39%、4.99%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組提高了3.14%；但在第6 d 進(jìn)入衰老期后，線(xiàn)蟲(chóng)身長(zhǎng)縮短，各實(shí)驗(yàn)組之間并沒(méi)有顯著差異。由此表明，喂食400 μg/mL～1200 μg/mL 范圍內(nèi)的黃花菜甲醇提取物在一定程度上可以增強(qiáng)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的最大身長(zhǎng)，對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育有一定的影響。

子代情況如圖1c、d 所示，由圖1c 可知，在第2～6 d 產(chǎn)卵期時(shí)，普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)在喂食不同濃度黃花菜甲醇提取物后其子代隨時(shí)間呈現(xiàn)先增高后減少的趨勢(shì)，且產(chǎn)卵高峰期主要集中在第3 d 和第4 d。由圖1d 可知，與空白組對(duì)比，普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)在喂食800 μg/mL、1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物后其總子代數(shù)提高了24.76%、50.82%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組提高了5.70%。由此表明，800 μg/mL～1200 μg/mL 范圍內(nèi)的黃花菜甲醇提取物可以顯著提高普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的生殖能力。

圖1 黃花菜甲醇提取物對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的影響Fig.1 Effect of methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni on common C.elegans

2.3 黃花菜甲醇提取物對(duì)糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)模型的影響

為研究黃花菜甲醇提取物是否對(duì)糖損傷的線(xiàn)蟲(chóng)有干涉作用，給線(xiàn)蟲(chóng)喂食100 μmol/mL 蔗糖造成線(xiàn)蟲(chóng)在高糖飼喂情況下壽命和生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)（身長(zhǎng)、產(chǎn)卵量）的改變，同時(shí)，添加不同濃度的黃花菜甲醇提取物進(jìn)行干涉實(shí)驗(yàn)。糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)喂食不同濃度黃花菜甲醇提取物后的壽命情況如表3與圖2a 所示，與普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)平均壽命9.38 d 相比，糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)平均壽命為8.05 d，降低了14.18%。喂食400 μg/mL、800 μg/mL、1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物可顯著提高糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命，與未添加提取物的糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)相比分別提高了9.69%、24.47%、22.73%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組也提高了25.47%。與普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)相比，黃花菜甲醇提取物干涉的糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命獲得了明顯的提高，甚至超過(guò)普通線(xiàn)蟲(chóng)添加黃花菜甲醇提取物的平均壽命，但由圖2a 可知，平均壽命的增加主要?dú)w因于第5～10 d 線(xiàn)蟲(chóng)生存率的提高，而不是線(xiàn)蟲(chóng)最長(zhǎng)生存天數(shù)的提高。

表3 不同黃花菜甲醇提取物濃度下的糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)平均壽命Table 3 The mean lifespan of sugar-damaged C.elegans with different concentrations of methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni

身長(zhǎng)情況如圖2b 所示，與圖1b 相比，糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)在生長(zhǎng)發(fā)育上受到了抑制，普通線(xiàn)蟲(chóng)第2 d 的身長(zhǎng)約為0.62 mm，100 μmol/mL 蔗糖會(huì)導(dǎo)致線(xiàn)蟲(chóng)生長(zhǎng)緩慢，第2 d 的身長(zhǎng)只有0.56 mm，而添加400 μg/mL、800 μg/mL、1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物則均可顯著改善糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)情況。線(xiàn)蟲(chóng)在第5 d 時(shí)身長(zhǎng)達(dá)到最大，與普通線(xiàn)蟲(chóng)相比，糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)最大身長(zhǎng)沒(méi)有明顯變化（都在1.35 mm 左右），添加不同濃度的黃花菜甲醇提取物在此指標(biāo)上也沒(méi)有明顯作用。

子代情況如圖2c、d 所示，由圖2c 可知，喂食不同濃度黃花菜甲醇提取物后，糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)在第2 d幾乎不產(chǎn)卵，與圖1c 比較可知其產(chǎn)卵期推遲了1 d，產(chǎn)卵總量降低了40.13%。在第3～6 d 產(chǎn)卵期時(shí)，糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵高峰期也延長(zhǎng)到第4 d 至第5 d，而添加不同濃度黃花菜甲醇提取物后產(chǎn)卵高峰主要集中在第4 d。由圖2d 可知，喂食400 μg/mL、800 μg/mL、1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物后，對(duì)糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的生殖能力具有一定的修復(fù)作用，其產(chǎn)卵總量分別提高了2.74%、3.40%、3.88%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組提高了2.91%。

圖2 黃花菜甲醇提取物對(duì)糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)模型的影響Fig.2 Effect of methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni on sugar-damaged C.elegans

2.4 黃花菜甲醇提取物對(duì)脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)模 型的影響

脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)喂食不同濃度黃花菜甲醇提取物后其壽命情況如表4 和圖3a 所示，空白組為未喂食黃花菜甲醇提取物的脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)，其平均壽命為9.02 d，與普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)壽命相比縮短了3.94%。添加不同濃度的黃花菜甲醇提取物后，不同程度地延長(zhǎng)了線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命。其中，添加1200 μg/mL 黃花菜甲醇提取物的脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)的平均壽命天數(shù)為11.73 d，與脂損傷空白組線(xiàn)蟲(chóng)相比提高了30.04%，Vc 陽(yáng)性對(duì)照組提高了8.43%。由圖3a 可知，黃花菜甲醇提取物的添加，不但顯著提高了產(chǎn)卵后線(xiàn)蟲(chóng)的生存率，而且使線(xiàn)蟲(chóng)的最大壽命也提高至27 d。另外，高脂飼喂還引發(fā)了線(xiàn)蟲(chóng)在發(fā)育階段（0～3 d）生存率的降低，而添加低濃度 黃花菜甲醇提取物對(duì)此指標(biāo)影響不明顯，但中高濃度黃花菜甲醇提取物能夠很好地回復(fù)線(xiàn)蟲(chóng)在發(fā)育階段的生存率，Vc 效果介于二者之間。

表4 不同黃花菜甲醇提取物濃度下的脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)平均壽命Table 4 The mean lifespan of stearic acid-damaged C.elegans with different concentrations of methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni

身長(zhǎng)情況如圖3b 所示，與圖1b 相比，脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)在各階段無(wú)明顯差別。但在添加黃花菜甲醇提取物后，脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)發(fā)生了一定程度的增加，在第2 d 時(shí)，喂食1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物的脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)比未添加組提高了10.36%，第4 d 時(shí)提高了7.81%；但第5 d 時(shí)1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物卻加劇了脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的身長(zhǎng)的縮短，推測(cè)可能脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)產(chǎn)卵后身體機(jī)能變得脆弱，不能耐受高濃度的黃花菜甲醇提取物。Vc 陽(yáng)性對(duì)照組能夠轉(zhuǎn)變高脂飼喂對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)身長(zhǎng)的影響，較大程度地提高了線(xiàn)蟲(chóng)發(fā)育期身長(zhǎng)（第2 d 提高了17.08%）以及最大身長(zhǎng)（第4 d 提高了13.39%）。

子代情況如圖3c、d 所示，與圖1c、d 普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)空白組的產(chǎn)卵總量相比可知，脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵總量下降了73.88%，且第2 d 基本不產(chǎn)卵。添加不同濃度的黃花菜甲醇提取物后，脂損傷線(xiàn)蟲(chóng)第2 d恢復(fù)了少量的產(chǎn)卵，且400 μg/mL、800 μg/mL、1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物都對(duì)脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵總量有顯著的干涉作用，分別提高了83.32%、84.94%、97.32%。Vc 陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)論在恢復(fù)線(xiàn)蟲(chóng)早期產(chǎn)卵還是總產(chǎn)卵量方面，都比黃花菜甲醇提取物有更好的效果。

圖3 黃花菜甲醇提取物對(duì)脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)模型的影響Fig.3 Effect of methanol extract of Hemerocallis citrina Baroni on stearic acid-damaged C.elegans

秀麗線(xiàn)蟲(chóng)從卵孵化后第0～3 d 是生長(zhǎng)發(fā)育最快的時(shí)期，也是身長(zhǎng)變化最大的時(shí)間段，其在第3 d 左右進(jìn)入產(chǎn)卵期，一般產(chǎn)卵高峰期在第4 d，基本結(jié)束于第6 d[24-27]。普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵總量在150～180 個(gè)/條，最長(zhǎng)壽命約為15～22 d[28-31]。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)飼喂不同濃度的黃花菜甲醇提取物后，能夠顯著提高線(xiàn)蟲(chóng)的生殖（產(chǎn)卵數(shù)量）和發(fā)育（身長(zhǎng)）指標(biāo)，尤其高濃度的黃花菜甲醇提取物能夠使得線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵量達(dá)到230 個(gè)/條，說(shuō)明黃花菜甲醇提取物可能在生殖功能上發(fā)揮作用，李云霞[32]研究發(fā)現(xiàn)黃花菜中的黃酮類(lèi)化合物能夠顯著增加性未成熟的小鼠子宮的濕重和子宮系數(shù)，迅速提升小鼠血清中的雌激素水平，表明黃花菜中的黃酮類(lèi)化合物對(duì)于機(jī)體內(nèi)雌激素的調(diào)節(jié)具有一定作用。秀麗線(xiàn)蟲(chóng)在產(chǎn)卵后會(huì)發(fā)生身長(zhǎng)的縮短和死亡率的提升，而且總產(chǎn)卵量與壽命呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性[33,34]，本實(shí)驗(yàn)中，高濃度的黃花菜甲醇提取物極顯著地提高了線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵量，但其生存率在產(chǎn)卵后急速下降，同時(shí)平均壽命也出現(xiàn)了縮減。

高濃度蔗糖處理秀麗線(xiàn)蟲(chóng)會(huì)引起幼蟲(chóng)生長(zhǎng)阻滯，發(fā)育遲緩；同時(shí)，高濃度蔗糖也會(huì)改變線(xiàn)蟲(chóng)培養(yǎng)基的滲透壓，加劇線(xiàn)蟲(chóng)應(yīng)對(duì)外界氧化應(yīng)激的壓力[24]。本實(shí)驗(yàn)中，100 μmol/mL 蔗糖導(dǎo)致線(xiàn)蟲(chóng)發(fā)育阻滯、產(chǎn)卵量下降、平均壽命和最長(zhǎng)壽命都顯著縮短。在給予不同濃度的黃花菜甲醇提取物后，雖然對(duì)糖損傷線(xiàn)蟲(chóng)的生殖和發(fā)育指標(biāo)只有較小的干涉回復(fù)作用，但在平均壽命方面表現(xiàn)出了非常顯著的正向回復(fù)作用，尤其對(duì)產(chǎn)卵后線(xiàn)蟲(chóng)（5～10 d）的生存率明顯提升，且此提升效果隨黃花菜甲醇提取物添加濃度的提高而增加。在添加100 μg/mL 硬脂酸后，線(xiàn)蟲(chóng)出現(xiàn)了產(chǎn)卵量和平均壽命下降的現(xiàn)象，這與之前的報(bào)道類(lèi)似[24]。給予黃花菜甲醇提取物進(jìn)行干涉后，極顯著地回復(fù)了線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵能力及生存率，且效果都隨黃花菜甲醇提取物添加濃度的提高而增加。糖脂代謝紊亂會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生大量自由基，主要以氧自由基為主，這些自由基會(huì)導(dǎo)致機(jī)體激烈的氧化應(yīng)激反應(yīng)，而過(guò)多的活性氧會(huì)破壞大多數(shù)生物分子的結(jié)構(gòu)，如構(gòu)成細(xì)胞膜的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)以及細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)DNA 等，甚至還會(huì)干擾人體的正常生命代謝活動(dòng)，降低機(jī)體免疫功能，引起疾病，加速人體衰老進(jìn)程[26,27]。Suresh 的研究表明[35,36]，黃花菜中提取的多酚類(lèi)物質(zhì)，具有很強(qiáng)的抗氧化活性（清除DPPH 自由基、ABTS 自由基、H2O2、磷鉬檢測(cè)和還原能力），以及抗革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌，可作為抗菌類(lèi)、抗氧化與糖尿病生物藥物的天然來(lái)源。Wang 等[12]利用UPLC-PDA/MS 分析鑒定了黃花菜中17 種黃酮類(lèi)化合物，并發(fā)現(xiàn)其能通過(guò)抗氧化和抗凋亡途徑有效保護(hù)BRL-3A 細(xì)胞免受t-BHP 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，并顯著降低活性氧積累。潘炘[37]研究發(fā)現(xiàn)黃花菜中含有槲皮素、蘆丁、阿魏酸等多酚，其提取物的金屬離子螯合能力、清除自由基與超氧陰離子能力、還原能力都較為顯著，還可以有效減低小鼠體內(nèi)丙二醛的含量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶的表達(dá)。由此推測(cè)，黃花菜甲醇提取物對(duì)糖脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)生殖能力、生長(zhǎng)發(fā)育以及壽命的干涉作用可能與降低其體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

3 結(jié)論

本研究利用UPLC-QQQ-MS/MS 對(duì)黃花菜甲醇提取物中的成分進(jìn)行了定性、定量分析，測(cè)得黃花菜甲醇提取物含有槲皮素、異鼠李素、花旗松素、原兒茶素、蘆丁、對(duì)香豆酸、龍膽酸、綠原酸、咖啡酸等9種物質(zhì)，其中，蘆丁含量最高。通過(guò)對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)、糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)、脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)三種模型的秀麗線(xiàn)蟲(chóng)喂食不同濃度的黃花菜甲醇提取物，并與空白組和Vc 陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比，評(píng)價(jià)黃花菜甲醇提取物對(duì)三種不同模型的秀麗線(xiàn)蟲(chóng)的干涉作用。結(jié)果表明，對(duì)普通秀麗線(xiàn)蟲(chóng)，800 μg/mL～1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物對(duì)其最大身長(zhǎng)有一定的增強(qiáng)作用，且可以明顯增強(qiáng)其生殖能力；對(duì)糖損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)，400 μg/mL～1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物對(duì)其生殖能力有一定的干涉作用，可以顯著延長(zhǎng)其平均壽命，且隨濃度增高呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)；對(duì)于脂損傷秀麗線(xiàn)蟲(chóng)，400 μg/mL～1200 μg/mL 濃度的黃花菜甲醇提取物對(duì)其生殖能力、身長(zhǎng)和壽命都有顯著的干涉作用，且對(duì)生殖能力與平均壽命的干涉作用都隨濃度升高而增強(qiáng)。未來(lái)可繼續(xù)深入探究黃花菜甲醇提取物的對(duì)糖脂損傷的干涉作用機(jī)理和抗氧化功能，為黃花菜甲醇提取物功能性食品的開(kāi)發(fā)提供理論支撐。