王曉寧，李卓敏#，劉 楊，鄭芳芳，聶秋燕，劉 晴，古 媛，韓 旭，田 野，譚延國(guó)△

1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100038；2.首都醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，北京 100038

呼吸道感染屬常見(jiàn)病及多發(fā)病，病原體構(gòu)成復(fù)雜，且各種病原體感染引起的癥狀相似，臨床難以鑒別。呼吸道感染常見(jiàn)病原體有病毒、細(xì)菌及真菌，通常在病原體感染后1周可檢測(cè)到特異性IgM抗體。呼吸道病原體的流行在不同地區(qū)、不同年齡、不同季節(jié)存在差異。首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院為北京市西城區(qū)區(qū)屬醫(yī)院，就診患者常為醫(yī)院附近社區(qū)居民，本文回顧性分析了2016年12月至2019年11月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院就診的7 382例呼吸道感染患者的8種呼吸道病原體IgM抗體的結(jié)果，從不同年度、季節(jié)及人群分析本地區(qū)病原體的分布情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2016年12月到2019年11月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院就診的7 382例患者作為研究對(duì)象，均符合上呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，排除標(biāo)準(zhǔn)：其他急性傳染病患者，如麻疹、流行性出血熱及流行性腦脊髓膜炎等；3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)免疫抑制劑、抗菌藥物。男女比例為1.106∶1.000，年齡1個(gè)月至107歲，平均年齡(63.41±26.84)歲。

1.2儀器與試劑 顯微鏡采用EUROStar熒光顯微鏡。呼吸道病原體譜檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙公司，可同時(shí)檢測(cè)呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、A型流感病毒(INFA)、B 型流感病毒(INFB)、副流感病毒(PIVSS)、嗜肺軍團(tuán)菌(LP)、肺炎支原體(MP)和肺炎衣原體(CP)8種呼吸道病原體的IgM抗體。

1.3檢測(cè)方法 采用帶分離膠的真空采血管采集靜脈血，自行凝固后離心分離血清。采用間接免疫熒光法檢測(cè)上述8種呼吸道病原體的IgM抗體。試劑盒生物薄片包被有待檢病原體感染的細(xì)胞、病原體涂片、質(zhì)控芯片，加入稀釋血清，使IgM抗體與病原體抗原結(jié)合，最后加入異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的羊抗人IgM二抗，孵育后在熒光顯微鏡下觀察熒光模型。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1呼吸道病原體IgM抗體檢出率 在7 382例患者中，3 021例(40.92%)至少檢出1種病原體的IgM抗體；INFB檢出率最高(1 370例，18.56%)，其次為MP(1 072例，14.52%)、INFA(852例，11.54%)、LP(732例，9.92%)、CP(251例，3.40%)、RSV(177例，2.40%)、PIVSS(118例，1.60%)、ADV(65例，0.88%)，合并感染1 248例，檢出率為16.91%。

2.2不同季節(jié)呼吸道病原體的分布情況 呼吸道病原體總檢出率在4個(gè)季節(jié)間分布情況：各年度間春季、秋季及冬季，總檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即存在著年度流行情況；按年度分析，僅2018年總檢出率在4個(gè)季節(jié)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尤以冬季為甚(48.85%)。見(jiàn)表1。

表1 不同年度及季節(jié)病原體IgM抗體總檢出情況[%(n/n)]

進(jìn)一步分析4種總檢出率最高的病原體INFB、MP、INFA、LP發(fā)現(xiàn)，不同年度不同季節(jié)的檢出率(2017年度的LP除外)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；冬季以INFB、MP、INFA為主，這3種病原體檢出率在各年度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；夏季和秋季INFB、MP、INFA、LP這4種病原體檢出率在各年度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同季節(jié)及不同年度4種檢出率最高的病原體檢出情況分析

季節(jié)INFA201720182019PLP201720182019P冬8.89(40/450)6.22(81/1 302)23.11(242/1 047)<0.0512.22(55/450)11.75(153/1 302)7.83(82/1 047)>0.05春3.70(12/324)9.37(57/608)14.31(84/587)<0.0511.73(38/324)10.03(61/608)7.67(45/587)>0.05夏7.35(28/381)10.85(56/516)18.35(98/534)<0.059.97(38/381)12.21(63/516)7.49(40/534)<0.05秋8.07(33/409)8.09(48/593)11.57(73/631)<0.059.78(40/409)6.07(36/593)12.84(81/631)<0.05P<0.05<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05

2.3不同年齡組病原體IgM抗體檢出情況 把7 382例患者按年齡分為4組，分別為兒童組(0～<18歲)、青年組(18～<40歲)、中年組(40～<65歲)及老年組(>65歲)。不同年齡組間8種病原體IgM抗體的檢出率，除PIVSS外，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。0～<18歲患者INFB及MP檢出率明顯高于其他3個(gè)年齡組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。INFA及LP在18～<40歲年齡組檢出率明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RSV檢出率在>65歲年齡組最高，與其他年齡組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CP的檢出率隨年齡增長(zhǎng)逐年下降。見(jiàn)表3。

表3 8種呼吸道病原體IgM抗體在不同年齡段患者中檢出情況(%)

2.4不同性別間病原體IgM抗體檢出情況 將7 382例患者按性別分為兩組，男性總檢出率為39.72%(1 540/3 877)，女性為41.71%(1 462/3 505)。其中男性RSV檢出率為3.40%(132例)，女性為1.28%(45例)；男性MP檢出率為11.32%(439例)，女性為18.06%(633例)，不同性別間RSV及MP的檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 8種呼吸道病原體IgM抗體在不同性別間檢出情況(%)

2.5病原體間合并感染情況分析 合并感染者共1 248例，隨年齡增加，合并感染率逐漸下降(P<0.05)。合并感染常見(jiàn)的組合：INFB+INFA(173例、13.86%),INFB+MP(109例、8.74%),INFB+LP(31例,2.48%)，MP+LP(26例、2.08%),INFA+INFB+MP(102例、8.17%),INFA+INFB+LP(46例、3.69%)，INFB+MP+LP(72例、5.77%)及INFA+INFB+MP+LP(140例、11.22%)。

3 討 論

呼吸道病原體感染后，患者血清中IgM抗體最早出現(xiàn)，為近期感染的指標(biāo)。本研究使用的間接免疫熒光法可聯(lián)合檢測(cè)8種常見(jiàn)呼吸道病原體的IgM抗體，能快速、準(zhǔn)確地明確病原體種類(lèi)，更利于不同病原體合并感染的檢出。

本研究結(jié)果顯示，8種呼吸道病原體總檢出率為40.92%，這與北京市不同地區(qū)總檢出率(27.30%～74.80%)結(jié)果一致[2]。本研究中以INFB檢出率最高，與以往報(bào)道中MP檢出率最高的觀點(diǎn)不一致[3-4]，可能與不同地區(qū)就診人群、經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展程度、氣候條件等的差異有關(guān)。

本研究顯示，INFB、INFA、MP感染于冬季高發(fā)，且INFA于2017年冬季呈急劇增加趨勢(shì)。中國(guó)國(guó)家流感中心在2017年的數(shù)據(jù)顯示，流感病毒以B系為主，其次為甲型H1N1[5]，本研究結(jié)果與之有一定差異。2017年冬季最為兇猛的流感病毒為BY型[5]，國(guó)產(chǎn)三價(jià)流感疫苗未包含此型別，這可能為導(dǎo)致乙型流感爆發(fā)的原因之一。此外，2018年夏季及2019年秋季LP檢出率明顯高于其他季節(jié)，其他季節(jié)并無(wú)明顯差異，由于LP可通過(guò)氣溶膠傳播，是否感染與中央空調(diào)的使用有關(guān)，尚待進(jìn)一步證實(shí)。其余病原體感染呈全年散發(fā)狀態(tài)。

本研究中8種病原體IgM抗體合并感染檢出率為16.91%，與文獻(xiàn)報(bào)道的0.24%～49.90%相符[6-7]。最常見(jiàn)為INFB合并其他病原體的感染，可能由于INFB存在多個(gè)導(dǎo)致病毒變異的分子標(biāo)記，這些變異使得INFB更容易與其他病毒、細(xì)菌、支原體結(jié)合，從而導(dǎo)致合并感染[2]。另外老年、基礎(chǔ)疾病、營(yíng)養(yǎng)不良、免疫抑制、抗菌藥物濫用等多種原因均可引起多種病原體的合并感染。

按年齡分組進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，INFB、MP及CP的易感年齡為0～<18歲，可能與未成年人抵抗力低、學(xué)齡期兒童所處場(chǎng)所人口密集有關(guān)；LP及INFA總檢出率最高的年齡組為18～<40歲成人，可能與該年齡段人群社交活躍、接觸傳染源機(jī)會(huì)多有關(guān)。RSV易感年齡為>65歲，可能與老年人免疫力低下有關(guān)。除PIVSS外，其他病原體在不同年齡組間檢出率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而既往研究未發(fā)現(xiàn)此類(lèi)現(xiàn)象[8]，具體原因不明。本研究還發(fā)現(xiàn)，>65歲年齡組無(wú)論總檢出率還是合并感染檢出率在各年齡組中均為最低，可能與老年人B細(xì)胞功能紊亂，初次免疫反應(yīng)降低、產(chǎn)生抗體活性降低、IgM抗體水平下降或產(chǎn)生時(shí)間較晚有關(guān)[9]。

不同性別患者病原體總檢出率差異并不明顯，僅RSV及MP檢出率有明顯差異，其中男性RSV檢出率高于女性，MP則相反?？赡芘c不同性別間免疫狀態(tài)有關(guān)，其詳細(xì)機(jī)制有待研究。

本研究主要為定性分析，無(wú)法確定病原體的含量，且只檢測(cè)IgM抗體，對(duì)IgM陰性的患者，需要連續(xù)監(jiān)測(cè)其特異性IgG抗體滴度的升高倍數(shù)方可確定是否感染某種病原體。但因本研究為回顧性分析，無(wú)法進(jìn)一步追蹤，因此存在一定的漏診可能。

綜上所述，呼吸道病原體的流行具有明顯的年度性和季節(jié)性特征，而且不同年齡組患者常見(jiàn)的病原體譜也存在較大的差異。