劉璇,王海軍,張黎,劉高峰,曹玉霞,司佳弘,李帥帥,孫瑞英

（1.山西中醫(yī)藥大學,太原 030619;2.天津中醫(yī)藥大學,天津 301617;3.山西中醫(yī)學院第三中醫(yī)院,太原 030024;4.臺州市第一人民醫(yī)院,臺州 318082）

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis, EMS）指正常脫落的子宮內(nèi)膜上皮細胞因攜帶活性,而種植在腹壁、卵巢等位置[1],育齡婦女易患,主要臨床表現(xiàn)為下腹痛、不孕、性交痛。該病發(fā)病率逐年上升,達10%～20%[2],不孕婦女中發(fā)病率更高,嚴重危害了患者的正常生活和日常工作,但目前西醫(yī)主要通過激素和外科手術(shù)治療,機體副作用大且患者復發(fā)率高[3]。

針灸作為一種安全、有效、快速的純綠色療法,被越來越多的患者認可,吸引了社會關(guān)注。山西中醫(yī)藥大學冀來喜教授制定了“秩邊透水道”針法的臨床操作規(guī)范,系統(tǒng)、客觀地評價了此針法臨床使用的安全性和有效性,并總結(jié)了此針法的適應證、禁忌證,由最初的治療前列腺相關(guān)疾病拓展至泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)[4]的各類疾病,諸如原發(fā)性痛經(jīng)[5]、外陰瘙癢等婦科及產(chǎn)后尿潴溜[6]等產(chǎn)科疾患,通過解除局部肌肉痙攣來緩解痛經(jīng),而且該針法取穴少而精,臨床使用價值高。

有研究證實EMS的發(fā)生發(fā)展中存在自噬的介入[7],而臨床實踐中發(fā)現(xiàn)針刺治療 EMS有著較好的療效,但其作用機制有待進一步研究。為進一步探明其治療EMS的作用機理,本研究擬采用EMS大鼠模型,透射電鏡觀察超微自噬結(jié)構(gòu),并通過檢測大鼠子宮內(nèi)膜組織中LC3、Beclin-1基因和蛋白表達水平,以探明“秩邊透水道”針法治療EMS的作用機理?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

SPF級雌性SD大鼠,50只,8周齡性成熟未交配,體質(zhì)量（180±20） g,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,動物許可證編號為 SCXK（京）2016-0006,在山西中醫(yī)藥大學科研大樓針灸推拿實驗室動物房飼養(yǎng),房間濕度40%～50%,溫度（24～26） ℃。本實驗已得到山西中醫(yī)藥大學倫理委員會的批準。根據(jù)隨機數(shù)表法,大鼠被分為模型組、假手術(shù)組、針刺組、激動劑組和針刺加抑制劑組,每組10只。

1.2 主要儀器和試劑

一次性針灸針 0.25 mm×15 mm,雷帕霉素（美國MCE, HY-10219）,3-甲基腺嘌呤（美國 MCE,HY-19312）,苯甲酸雌二醇,青霉素粉針劑（華北制藥股份有限公司,規(guī)格 0.96 g,160萬單位）,高級熒光顯微鏡 Eclipse Ci-L（日本 Nikon）;全景切片掃描儀 PANNORAMIC DESK/MIDI/250/1000（3DHISTECH, Hungary）,透射電鏡HITACHI HT 7700 120 kv;LeicaRM 2135自動切片機（德國 Leica）;熒光定量PCR儀Stepone plus（ABI）;酶標檢測儀Rt 2100 c（Rayto）;ACTIN抗體（Servicebio, GB12001）;Beclin 1 抗體（Servicebio,GB13228-2）;LC3 抗體,（武漢三鷹,14600-1-ap）。

1.3 大鼠EMS模型的建立

造模方法參考文獻[8],術(shù)前 1 d對大鼠禁食,不禁飲,選用苯甲酸雌二醇（0.1 mg/kg）,給50只SD大鼠皮下注射,人為干預使大鼠在同一動情周期進行手術(shù),腹腔注射10%水合氯醛,按0.3 mL/100 g的劑量麻醉。固定大鼠四肢,備皮,棉球蘸 75%的乙醇,對施術(shù)部位消毒,在尿道口上方1.5 cm處,沿腹中白線,依次剪開腹壁肌層、腹膜肌層（切口控制在2 cm以內(nèi)）,找到左側(cè)子宮,在上下兩端結(jié)扎,剪取長2 cm子宮,清洗子宮體,縱向切開子宮腔,剝?nèi)プ訉m肌層后,將內(nèi)膜剪成大概5 mm×5 mm,縫于大鼠右側(cè)腹部。造模結(jié)束后,腹部注射青霉素鈉液[9]。腹部切口用絲線縫合。密切關(guān)注各組大鼠術(shù)后的精神狀態(tài)以及手術(shù)切口的愈合情況,醒后照常喂養(yǎng)。假手術(shù)組大鼠不造模。在建模 15 d后,開腹探查造模是否成功。

1.4 干預方法

針刺組將大鼠的四肢固定于自制鼠板上,根據(jù)《實驗針灸學》[10]并參照大鼠骨骼與體型取兩側(cè)“秩邊”穴（臀外下部,股骨大轉(zhuǎn)子與薦椎尾椎結(jié)合部連線外1/3與中 1/3交點處[11]）,穴位處消毒,選 0.25 mm×15 mm的不銹鋼毫針針刺,從秩邊穴進針,順著同側(cè)的水道穴逐漸深入,進針深度 13 mm左右,針下落空后,普通提插捻轉(zhuǎn),不行補瀉,手法輕微,留針20 min;激動劑組予以大鼠自噬激動劑雷帕霉素（50 μmoL/L）,2 mg/（kg·d）,腹腔注射;針刺加抑制劑組大鼠在針刺治療的基礎(chǔ)上予以自噬抑制劑 3-MA（3-甲基腺嘌呤400 nmoL/μL）,1.5 mg/（kg·d）,腹腔注射。模型組及假手術(shù)組只進行固定。各組 1周干預 6次,共干預 3周。

1.5 指標檢測

1.5.1 異位病灶觀察及測量

造模15 d后開腹,肉眼觀察異位種植膜生長情況,卡尺測量其長（A）、寬（B）、高（C）,根據(jù)橢球體積公式V（mm3）＝0.52×A×B×C 計算體積,以 V＞25 mm3為建模成功。

1.5.2 子宮內(nèi)膜組織病理學觀察

取大鼠子宮內(nèi)膜組織固定切片,脫蠟,染色后光鏡觀察其病理變化。根據(jù)文獻中病理診斷標準[12],造模成功的標準為子宮內(nèi)膜上皮細胞可在種植膜囊壁內(nèi)層結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn),呈整齊柱狀排列,局部還有豐富的新鮮微血管形成。

1.5.3 大鼠超微結(jié)構(gòu)電鏡觀察

確定大鼠子宮內(nèi)膜新鮮組織的取材部位,體積不超過1 mm×1 mm×1 mm,置于電鏡固定液中,磷酸緩沖液漂洗后鋨酸磷酸緩沖液室溫固定,磷酸緩沖液再次漂洗后組織依次脫水;滲透過夜;烤箱聚合;超薄切片機切片60～80 nm;鈾鉛雙染色;電鏡下觀察切片,采集圖像,進行分析。

1.5.4 RT-qPCR法檢測大鼠Beclin 1 mRNA、LC3 mRNA表達

從﹣80 ℃冰箱中取出大鼠子宮內(nèi)膜組織。采用Trizol法提取RNA,Nanodrop 2000酶標儀測定RNA的純度及質(zhì)量濃度,進行逆轉(zhuǎn)錄,按照試劑盒操作步驟,利用 RocheqPCR儀檢測,該基因相對表達量的計算方法是2﹣△△Ct法（p）。引物由武漢塞維爾生物科技有限公司提供合成,片段長度為 138 bp,退火溫度 60 ℃,用qPCR法檢測提取大鼠子宮在位、異位內(nèi)膜的總 RNA,用RT-qPCR法檢測LC3、Beclin-1。引物序列見表1。

表1 實時熒光定量PCR引物序列

1.5.5 Western blot法檢測大鼠Beclin 1、LC3蛋白表達

從﹣80 ℃冰箱中取出大鼠子宮內(nèi)膜組織。檢測時取出內(nèi)膜組織加入RIPA裂解緩沖液,研磨均勻,靜置,取上層清液,離心 10 min,提取內(nèi)膜組織總蛋白溶液,測定蛋白濃度,充分變性蛋白,電泳,轉(zhuǎn)膜,漂洗,溫封閉處理,加入抗體,一抗稀釋比均為1:1 000,孵育。洗膜后,加入二抗,二抗稀釋比為 1:3 000,室溫孵育,洗模,采集凝膠圖像,采用Alpha軟件分析目標帶的光密度值,目的蛋白與內(nèi)參灰度值比值即為各目的蛋白的相對表達量。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS25.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。若為正態(tài)分布的計量資料,用均數(shù)±標準差表示,符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間比較采用單因素方差分析,進一步采用LSD法進行兩兩比較。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 EMS大鼠異位病灶體積變化

與治療前比較,模型組治療后異位病灶體積增大但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）,其余各組大鼠的異位病灶體積均不同程度縮小（P＜0.01）;與模型組比較,針刺組、激動劑組、針刺加抑制劑組大鼠治療后的異位病灶體積均明顯縮小（P＜0.01）,囊性生長物變扁平,囊內(nèi)清亮液體也有所減少;與針刺加抑制劑組比較,針刺組病灶體積明顯降低（P＜0.05）,詳見表2。

表2 各組EMS大鼠異位病灶體積的改變 （±s，mm3）

表2 各組EMS大鼠異位病灶體積的改變 （±s，mm3）

注:與同組治療前比較 1）P＜0.01;與模型組比較 2）P＜0.01;與針刺組比較 3）P＜0.05

組別 n 劑量/mg（kg·d） 治療前 治療后假手術(shù)組 10 - - -模型組 10 - 90.22±19.15 117.33±38.68針刺組 10 - 91.35±18.97 31.77±15.251）2）激動劑組 10 2 91.66±20.11 33.16±10.621）2）針刺加抑制劑組 10 1.5 90.68±19.92 72.58±18.201）2）3）

2.2 EMS大鼠子宮內(nèi)膜病理學變化

造模15 d后,開腹觀察大鼠異位灶種植情況,發(fā)現(xiàn)移植在腹壁的子宮內(nèi)膜生長非常良好,種植物呈囊狀,體積已超出原種植范圍,有豐富的新鮮毛細血管流通,囊泡內(nèi)有清亮液體。假手術(shù)組的大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞呈高柱狀,排列緊湊,結(jié)構(gòu)完整,未見明顯異常;模型組大鼠子宮內(nèi)膜中有囊腫,血供豐富,肌纖維排列順序不規(guī)則;針刺組的大鼠子宮內(nèi)膜上皮有萎縮、脫落的矮立方狀細胞,周圍毛細血管較少,出現(xiàn)纖維化。激動劑組的大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞較完整,少量壞死,血供減少。針刺加抑制劑組的大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞大量壞死,肌纖維排列不規(guī)則,詳見圖2。

圖2 各組大鼠內(nèi)膜組織病理學的變化（HE染色，×100）

2.3 各組大鼠子宮內(nèi)膜自噬小體及其超微結(jié)構(gòu)分析

假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜細胞中線粒體豐富,存在一定數(shù)量的自噬小體,核膜完整、胞核規(guī)則、核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻,雙層結(jié)構(gòu)清晰;模型組大鼠子宮內(nèi)膜細胞內(nèi)自噬泡極少,核膜短缺,核不規(guī)則,染色質(zhì)不均勻,雙層結(jié)構(gòu)不清晰,上皮細胞呈重度水腫,線粒體數(shù)量少;針刺組大鼠子宮內(nèi)膜細胞含有較多自噬小體,有豐富的細胞器,完整的核膜;激動劑組大鼠子宮內(nèi)膜細胞中自噬泡較多,核膜較完整,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量較多;針刺加抑制劑組大鼠子宮內(nèi)膜細胞中有少量自噬泡,胞質(zhì)內(nèi)有不少細胞器發(fā)生變形、萎縮,核膜欠缺,核不規(guī)則。詳見圖3。

圖3 各組大鼠子宮內(nèi)膜細胞的自噬體超微結(jié)構(gòu)

2.4 各組大鼠子宮在位、異位內(nèi)膜中 LC3、Beclin-1 mRNA表達水平的觀察

與假手術(shù)組比較,模型組在位、異位內(nèi)膜的LC3、Beclin-1 mRNA表達水平顯著降低（P＜0.05）;與模型組比較,各干預組異位內(nèi)膜的LC3 mRNA表達水平均顯著升高（P＜0.05）;針刺組與激動劑組大鼠異位內(nèi)膜的LC3、Beclin-1 mRNA 表達無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;針刺組、激動劑組大鼠異位內(nèi)膜的LC3、Beclin-1 mRNA表達均明顯高于針刺加抑制劑組（P＜0.05）。表明EMS大鼠在位、異位內(nèi)膜中LC3及Beclin-1 mRNA表達水平下降,“秩邊透水道”針法、雷帕霉素激動劑均可提高EMS模型大鼠異位內(nèi)膜中LC3及Beclin-1的表達水平,詳見表3。

表3 各組大鼠LC3、Beclin-1mRNA表達水平比較 （±s）

表3 各組大鼠LC3、Beclin-1mRNA表達水平比較 （±s）

注:與假手術(shù)組比較 1）P＜0.05;與模型組比較 2）P＜0.05;與針刺組比較 3）P＜0.05;與激動劑組比較 4）P＜0.05

組別 n LC3 Beclin-1在位內(nèi)膜 異位內(nèi)膜 在位內(nèi)膜 異位內(nèi)膜假手術(shù)組 10 16.81±3.72 - 14.03±2.12 -模型組 10 5.33±0.881） 2.34±0.621） 4.12±1.041） 2.13±0.711）針刺組 10 12.09±2.172） 10.33±2.012） 11.58±3.412） 9.25±2.012）激動劑組 10 10.13±2.192） 8.66±1.822） 10.06±2.932） 7.87±1.592）針刺加抑制劑組 10 7.17±2.462）3）4） 5.69±1.742）3）4） 6.44±1.532）3）4） 3.98±1.132）3）4）

2.5 各組大鼠子宮在位、異位內(nèi)膜中LC3、Beclin-1蛋白表達水平的觀察

與假手術(shù)組比較,模型組在位、異位內(nèi)膜 LC 3、Beclin-1蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05）;與模型組比較,各干預組異位內(nèi)膜 LC3蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.05）;針刺組與激動劑組大鼠 LC3、Beclin-1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;針刺組、激動劑組大鼠LC3、Beclin-1蛋白表達均明顯高于針刺加抑制劑組（均P＜0.05）。表明EMS大鼠異位內(nèi)膜中LC3及Beclin-1蛋白表達水平下降,“秩邊透水道”針法、雷帕霉素激動劑均可提高EMS模型大鼠異位內(nèi)膜中LC3及Beclin-1的表達水平,詳見表4、圖4。

圖4 各組大鼠Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表達條帶圖

表4 各組大鼠Beclin-1、LC 3的灰度值分析 （±s）

表4 各組大鼠Beclin-1、LC 3的灰度值分析 （±s）

注:與假手術(shù)組比較 1）P＜0.05;與模型組比較 2）P＜0.05;與針刺組比較 3）P＜0.05;與激動劑組比較 4）P＜0.05

組別 n LC-3Ⅰ LC-3Ⅱ Beclin-1在位內(nèi)膜 異位內(nèi)膜 在位內(nèi)膜 異位內(nèi)膜 在位內(nèi)膜 異位內(nèi)膜假手術(shù)組 10 3.54±0.23 - 3.54±0.17 - 3.46±0.19 -模型組 10 1.21±0.111） 0.13±0.041） 0.59±0.411） 0.17±0.021） 0.99±0.021） 0.13±0.051）針刺組 10 2.78±0.172） 0.35±0.082） 3.10±0.372） 0.37±0.032） 2.78±0.242） 0.35±0.122）激動劑組 10 2.02±0.112） 0.32±0.102） 2.55±0.322） 0.28±0.122） 2.16±0.072） 0.33±0.012）針刺加抑制劑組 10 1.24±0.122）3）4） 0.16±0.022）3）4） 1.88±0.042）3）4） 0.18±0.112）3）4） 1.49±0.052）3）4） 0.19±0.012）3）4）

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）是近現(xiàn)代出現(xiàn)的病名,但因其痛經(jīng)、不孕等臨床表現(xiàn)及病程進展,當將此病歸屬于中醫(yī)學“癥瘕”“不孕”范疇[13]。導致EMS最重要的原因就是瘀血的產(chǎn)生,瘀血內(nèi)停,氣機受阻,不通則痛,即為痛經(jīng);積血瘀滯日久,由小到大,逐漸形成有形之物,故見癥瘕;瘀血內(nèi)停,阻滯胞宮胞脈,使得兩精不得相合成孕,故發(fā)為不孕。目前,EMS發(fā)病機制研究不明,存在多種學說[14],其中“種植學說”是目前廣泛受到認可的理論[15],認為異常脫落的子宮內(nèi)膜組織具有一定的活性,可隨經(jīng)血逆流,進入其他組織,種植在腹膜、膀胱、卵巢等位置,浸潤生長,而形成此病。另外婦產(chǎn)科手術(shù)及相關(guān)診查操作,也可導致子宮內(nèi)膜細胞異位種植。

近年來EMS與細胞自噬之間的潛在關(guān)聯(lián)越來越得到科研人員的重視。在對自噬機制不斷深入的研究中發(fā)現(xiàn),自噬在子宮內(nèi)膜異位癥的疾病發(fā)生、病程發(fā)展中扮演著不可或缺的重要角色,因此深度挖掘剖析自噬相關(guān)基因,或許能成為臨床治療 EMS的一個新的創(chuàng)新點。有研究表明在機體應對刺激時,自噬可為細胞提供能量,維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[16],避免了細胞的凋亡、壞死;另一方面,自噬又可為異位內(nèi)膜細胞提供幫助,以適應新的異位病灶環(huán)境,提供細胞存活所必須的能量,在異位組織開始新的種植、浸潤生長,而此功能的過度興奮又會促進細胞凋亡、壞死,加重 EMS,因此適度地激活子宮內(nèi)膜細胞自噬是治療EMS的關(guān)鍵[17]。

各組大鼠子宮內(nèi)膜的超微結(jié)構(gòu)顯示,假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜可見完整、光滑的核膜,線粒體等細胞器數(shù)量很多,自噬小體和溶酶體分布較多;模型組大鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)可見變形、破裂的細胞器,自噬小體分布少,提示自噬途徑存在異常;針刺組及激動劑組大鼠子宮內(nèi)膜中均可以觀察到較多的自噬小體,提示針刺與自噬激動劑雷帕霉素同樣具有誘導自噬的作用;針刺加抑制劑組大鼠子宮內(nèi)膜僅可觀察到少量的自噬小體,說明針刺增強自噬的作用被自噬抑制劑3-MA所抑制,提示針刺發(fā)揮作用的機制可能與激活自噬途徑相關(guān)。

自噬一般發(fā)生在真核細胞當中,細胞通過溶酶體,用吞噬的方式清除并降解自身受損的細胞器,是細胞在面對各種壓力時的自我保護機制,通過包裹和降解受損的細胞器和生物分子,分解更多的蛋白質(zhì),為在惡劣條件下存活的細胞提供所需的氨基酸、游離性脂肪酸等能量物質(zhì),同時清除受損、衰老的細胞結(jié)構(gòu),從而調(diào)節(jié)細胞的穩(wěn)態(tài)平衡[18]。自噬過程與多種自噬基因有關(guān),其中,自噬過程中最重要的正向調(diào)控因子是Beclin-1[19],與 Atg8是同源基因,定位于染色體17q21[20],它可直接調(diào)控自噬活性。研究發(fā)現(xiàn)[5]Beclin-l mRNA和蛋白在正常婦女中子宮內(nèi)膜細胞中的表達明顯不同于EMS患者子宮內(nèi)膜細胞中的表達,EMS患者的蛋白和基因表達則明顯更低。還有研究表明,Beclinl-1參與了自噬小體雙層膜的形成,對自噬的激活具有關(guān)鍵的調(diào)控作用,其上調(diào)可誘導自噬的發(fā)生[21]。自噬相關(guān)基因LC3是一種可溶性蛋白質(zhì),其表達高低可反映自噬活性的水平,是觀察自噬是否發(fā)生的一個特異性標志性蛋白[22]。有研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜周期不同,則LC3表達水平不同,分泌期早、中、晚三期的LC3表達明顯高于早增殖期,而晚增殖期的LC3蛋白表達明顯高于早增殖期,這表明在不同的子宮內(nèi)膜周期,子宮內(nèi)膜細胞表達不同的自噬水平[23]。Choi J等[24]發(fā)現(xiàn),在正常子宮內(nèi)膜中,分泌期 LC3Ⅱ的水平高于增生期LC3Ⅱ水平,但EMS異位內(nèi)膜中,LC3Ⅱ沒有觀察到周期性變化,而且自噬和mTOR活性在整個月經(jīng)周期中也是恒定的,且 EMS異位內(nèi)膜表達沒有在位內(nèi)膜高,EMS臨床分期越高,表達越低。Zhan L等[25]發(fā)現(xiàn)EMS患者若處在子宮內(nèi)膜分泌期,則他們的在位及異位子宮內(nèi)膜中Beclin1和LC3水平明顯低于健康女士,且異位子宮內(nèi)膜的這兩個因子水平低于在位內(nèi)膜。但Allavena G等[26]發(fā)現(xiàn),和正常健康女性的在位子宮內(nèi)膜相比,EMS患者異位內(nèi)膜的LC3Ⅱ、Beclin1的表達水平明顯升高,提示EMS患者的異位病灶中自噬增加。通過上述文獻分析,預測可能因不同的臨床分期,得出的數(shù)據(jù)不同,Allavena G等[26]的研究中取得的內(nèi)膜組織多為增生期,而Zhan L等[25]的研究中取得的內(nèi)膜組織多為分泌期。本實驗在造模前通過注射苯甲酸雌二醇,是為了在造模時盡可能排除大鼠因自身動情周期不同而對造模產(chǎn)生影響,但在最后取材時,并未明確大鼠處于動情期還是動情間期,是本實驗的不足之處,希望在后續(xù)實驗中考慮到這一因素,并做出改善。

在鎮(zhèn)痛[27]、改善局部血液循環(huán)、調(diào)節(jié)機體內(nèi)分泌及免疫機能方面,針刺扮演著重要角色。秩邊透水道針法經(jīng)過了長期的臨床探索積累,形成了較成熟且完整的針法系統(tǒng),其治療關(guān)鍵在于活血化瘀通絡,此針法通過刺激盆叢內(nèi)臟神經(jīng)纖維[3],改善子宮及卵巢供血,調(diào)節(jié)血液流變學狀態(tài),治療 EMS。通過實驗發(fā)現(xiàn),模型組大鼠子宮內(nèi)膜組織中Beclin-1、LC3基因和蛋白表達水平明顯低于假手術(shù)組,這說明Beclin-1、LC3可能參與了 EMS疾病發(fā)生過程,可能是由于低水平自噬使細胞逃脫免疫系統(tǒng)的追捕,從而內(nèi)膜細胞進行黏附、侵襲、血管形成,導致EMS發(fā)生。而EMS大鼠行針刺治療后,EMS模型大鼠的子宮內(nèi)膜異位病灶縮小,Beclin-1、LC3的基因和蛋白表達水平明顯增加,這說明“秩邊透水道”針法可能是以Beclin-1、LC3等因子為治療靶點,通過激活大鼠子宮異位內(nèi)膜中Beclin-1、LC3的表達,改變EMS大鼠子宮異位內(nèi)膜的生物化學特性,進而增加大鼠子宮異位內(nèi)膜細胞的自噬,促進異位病灶的萎縮,從而達到改善EMS子宮內(nèi)膜組織的目的。本研究還發(fā)現(xiàn)針刺組與激動劑組效果相近,自噬基因及蛋白的表達趨勢一樣,但在針刺干預的基礎(chǔ)上增加抑制劑3-MA后,Beclin-1、LC3表達則明顯降低,可能是因為“秩邊透水道”針法激活自噬相關(guān)基因的作用被自噬抑制劑所抵消,這表明了“秩邊透水道”針法有類似雷帕霉素激活自噬的作用。本實驗僅觀察了EMS大鼠Beclin-1、LC3基因和蛋白表達的變化,尚需進一步研究其上游通路的調(diào)控機制。深入研究“秩邊透水道”針法對EMS相關(guān)自噬因子的調(diào)控機制,對臨床治療EMS及降低復發(fā)率有顯著的作用。