周 芬,計(jì) 徐,吳義景,吳 東

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所//畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031)

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2019-07發(fā)布第194號(hào)公告，明確規(guī)定自2020-07-01起，飼料中禁止添加抗生素，旨在徹底解決飼料中抗生素濫用問題。隨著飼料中抗生素的退出，尋找抗生素替代品成為了廣大養(yǎng)殖工作者亟待解決的的問題。止痢草又名牛至，是一種潛在的天然抗生素和藥物生長(zhǎng)促進(jìn)劑[1]，其提取物中的主要活性物質(zhì)香芹酚和百里香酚具有抗菌、抗氧化、促消化、調(diào)節(jié)免疫等特性[2]。本試驗(yàn)旨在比較添加不同比例的止痢草提取物對(duì)育雛、育成期蛋雞生長(zhǎng)性能、血清免疫生化指標(biāo)及腸道菌群的影響，為止痢草提取物替代抗生素提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

15%金霉素預(yù)混劑由安徽某飼料有限公司提供;止痢草提取物(好力高501)由廣州某生物工程技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)選用0日齡蛋雛雞360只，公母各半，隨機(jī)分為3組：抗生素對(duì)照組、止痢草提取物低劑量組、止痢草提取物高劑量組；每個(gè)組120只，設(shè)3個(gè)重復(fù)(圈)，每個(gè)重復(fù)40只(公母各半)；試驗(yàn)期110 d。試驗(yàn)分三個(gè)階段：育雛期(0～42 d)階段、育成前期(43～70 d)階段和育成后期(71～110 d)階段。試驗(yàn)添加量詳見表1。

表1 試驗(yàn)分組情況

1.3 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。試驗(yàn)每個(gè)重復(fù)單圈飼養(yǎng)，按常規(guī)飼養(yǎng)管理及免疫程序進(jìn)行。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)雞在0、42、70日齡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行空腹稱量各重復(fù)雞體重和各重復(fù)飼料消耗量，統(tǒng)計(jì)各組平均日增重、日采食量和料重比。

1.4.2血清免疫、生化指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選取1只體重相近的雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?；進(jìn)行血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量，總抗氧化能力(T-AOC)、總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)含量的測(cè)定。

1.4.3腸道菌群的測(cè)定

每重復(fù)選取1只雞，于無菌操作臺(tái)中取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 ml的滅菌離心管中，加入無菌生理鹽水4.5 ml，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，乳酸桿菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件ANOVA模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞生長(zhǎng)性能的影響

由表3和表4可以看出，在育成期，止痢草提取物組平均日增重比抗生素組有升高趨勢(shì)，但是差異不顯著(P>0.05)?？股亟M與試驗(yàn)組之間平均日采食量差異也不顯著(P>0.05)。

表3 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞平均日增重的影響 g

表4 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞平均日采食量的影響 g

由表5可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期，試驗(yàn)組相對(duì)于抗生素組料重比均有所下降，但差異不顯著(P>0.05)，僅育成前期止痢草提取物低劑量組料重比顯著低于抗生素組(P<0.05)。

表5 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞料重比的影響

2.2 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表6可以看出，在育雛期，各試驗(yàn)組IgA含量均顯著高于抗生素組(P<0.05)，低劑量組和高劑量組IgA含量相比抗生素組分別提高了24.14%、58.05%；IgG含量分別提高了4.52%、8.44%，但差異不顯著(P>0.05)；各組IgM、T-AOC含量與抗生素組相比差異不顯著(P>0.05)；抗生素組總蛋白含量顯著低于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各試驗(yàn)組相比分別低了11.53%、10.08%；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各試驗(yàn)組相比分別高了9.77%、16.32%。

表6 不同比例止痢草提取物對(duì)育雛期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

由表7可以看出，在育成前期，各試驗(yàn)組IgA含量和抗生素組相比分別提高了13.98%、66.13%,高劑量組與抗生素組差異顯著(P<0.05)；各試驗(yàn)組IgG含量比抗生素組顯著提高了18.67%、26.44%(P<0.05)；各試驗(yàn)組IgM含量比抗生素組下降了20.98%、13.49%，且低劑量組與抗生素組差異顯著(P<0.05)；低劑量組T-AOC含量顯著高于抗生素組(P<0.05)；各試驗(yàn)組總蛋白含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了10.59%、9.59%；抗生素組尿素氮含量比試驗(yàn)組高了7.73%、19.08%，且高劑量組與抗生素組差異顯著(P<0.05)。

表7 不同比例止痢草提取物對(duì)育成前期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表8可以看出，在育成后期，各試驗(yàn)組IgA含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了56.54%、39.27%；各試驗(yàn)組IgG含量比抗生素組分別提高了7.77%、25.70%，且高劑量組和抗生素組差異顯著(P<0.05)；試驗(yàn)組IgM含量比抗生素組顯著提高了18.02%、17.65%(P<0.05)；低劑量組T-AOC含量顯著高于抗生素組(P<0.05)；各試驗(yàn)組總蛋白質(zhì)含量分別比抗生素組顯著上升了4.88%、4.88%(P<0.05)；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別高了21.04%、24.84%。

表8 不同比例止痢草提取物對(duì)育成后期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

2.3 不同比例止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞腸道微生物菌群的影響

由表9可以看出和抗生素組相比，試驗(yàn)組腸道大腸桿菌數(shù)有下降趨勢(shì)，分別下降了10.47%和6.89%，其中低劑量組和抗生素組相比差異顯著(P<0.05)；各組間腸道乳酸桿菌數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表9 不同比例止痢草提取物對(duì)蛋雞腸道菌群的影響

3 討論

3.1 不同比例止痢草提取物對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

史東輝等發(fā)現(xiàn)，止痢草提取物能提高肉雞增重并改善飼料轉(zhuǎn)化率[3]，任景樂等[4]在蛋雛雞日糧中添加止痢草提取物，平均日增重有顯著提高，而料蛋比有一定的降低，史東輝等研究發(fā)現(xiàn)止痢草提取物改善了肉仔雞的料重比，但對(duì)日增重?zé)o顯著影響[5]。本試驗(yàn)中與抗生素相比，添加止痢草提取物育成期蛋雞日增重有一定程度的提高，料重比有下降趨勢(shì)，且在育成前期低劑量組顯著低于抗生素組，表明止痢草提取物替代抗生素對(duì)蛋雞生長(zhǎng)性能無不良影響，并有一定的促進(jìn)作用。

3.2 不同比例止痢草提取物對(duì)蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

免疫球蛋白能幫助機(jī)體抵抗細(xì)菌、病毒等外來侵害，是動(dòng)物體內(nèi)具有抗體活性的物質(zhì)[6],吳東等[7]報(bào)道在肉雞日糧中添加止痢草提取物替代抗生素IgA和IgM含量均有一定程度的提高；胡曉飛等[8]發(fā)現(xiàn)在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加100 mg/kg牛至油，在生長(zhǎng)前期能刺激機(jī)體迅速產(chǎn)生抗體，提高免疫力；朱曉磊等[9]研究表明，止痢草中提取的百里香精油能顯著提高肉雞血清中IgM、IgA、IgG的水平。本試驗(yàn)中添加了止痢草提取物替代抗生素在蛋雞整個(gè)生長(zhǎng)過程中IgA含量均有顯著提高，IgG含量也有一定程度的提高，IgM含量在生長(zhǎng)前期不明顯，在71～110 d階段也有顯著提高，與之前的報(bào)道基本一致，表明止痢草提取物替代抗生素對(duì)提高蛋雞免疫力有良好的促進(jìn)作用。

止痢草提取物中的百里香酚和香芹酚能為脂肪氧化中第一步產(chǎn)生的自由基提供氫離子，延緩過氧化過程，所以具有很強(qiáng)的抗氧化能力[10]。本試驗(yàn)中，相對(duì)于抗生素組，止痢草提取物組血清中總抗氧化能力都有一定程度的提高，表明止痢草提取物在抗氧化能力方面優(yōu)于抗生素。血清中總蛋白是機(jī)體蛋白質(zhì)的主要來源，也是機(jī)體各類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的載體[11],和尿素氮的水平能反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收利用和對(duì)氨基酸代謝情況[12],本試驗(yàn)結(jié)果止痢草提取物替代抗生素血清中總蛋白水平顯著上升，尿素氮水平有不同程度的下降，表明止痢草提取物可以促進(jìn)機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收利用，增強(qiáng)氨基酸代謝。

3.3 不同比例止痢草提取物對(duì)蛋雞腸道菌群的影響

有研究發(fā)現(xiàn)，止痢草提取物可以有效抑制雞腸道大腸桿菌等有害菌，對(duì)乳酸桿菌沒有影響[13-15]，本試驗(yàn)中添加止痢草提取物替代抗生素蛋雞腸道大腸桿菌數(shù)有下降趨勢(shì)，且低劑量組與抗生素組相比差異顯著，乳酸桿菌雖有上升趨勢(shì)但無明顯差異，和上述報(bào)道基本一致。表明止痢草提取物替代抗生素能有效維護(hù)腸道中有益菌數(shù)量，降低腸道有害菌，維護(hù)腸道菌群平衡。

4 結(jié)論

在蛋雞日糧中添加止痢草提取物替代抗生素，可以在一定程度上改善蛋雞的生長(zhǎng)性能，提高其機(jī)體免疫和抗氧化水平，對(duì)蛋雞腸道微生物菌群的平衡也有一定的促進(jìn)作用。