徐 科，吳赟杰，李金洋，趙君晰，張澤瀚，梁曉霞

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院天然藥物研究中心，成都 611130）

皮膚[1-2]作為人體與外界的主要物理屏障，經(jīng)常受到不同程度的傷害，因而皮膚創(chuàng)傷是對(duì)我們醫(yī)療系統(tǒng)的巨大挑戰(zhàn)，大至手術(shù)創(chuàng)傷，小至口腔潰瘍，無(wú)一不給患者造成了長(zhǎng)期的醫(yī)學(xué)（如疼痛、瘙癢、活動(dòng)范圍縮?。┖托睦砩鐣?huì)損害，也給社會(huì)帶來(lái)極大的負(fù)擔(dān)。更有甚者如糖尿病引發(fā)的難治性潰瘍還可能導(dǎo)致患者的截肢[3]。因此，開發(fā)一款高效、穩(wěn)定、持久且既能保護(hù)創(chuàng)面又能促進(jìn)皮膚修復(fù)的創(chuàng)傷愈合藥物在醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域具有重要意義。

紫草[4]，又名新疆紫草，藥用歷史悠久。同時(shí)紫草在各類創(chuàng)傷愈合和修復(fù)中也有大量應(yīng)用實(shí)例：“紫草潤(rùn)肌膏”使用紫草、當(dāng)歸等藥材進(jìn)行組方治療火燙，發(fā)泡腐爛；“紫草膏”中使用紫草、當(dāng)歸白芷等藥材進(jìn)行組方，治療熱瘡；“紫云膏”中使用紫草、當(dāng)歸和冰片等藥材進(jìn)行組方治療水火燙傷，潰爛化膿；《新疆中草藥手冊(cè)》中使用紫草、當(dāng)歸和黃柏等藥材進(jìn)行組方達(dá)到化腐生肌。綜上所述，用于皮膚創(chuàng)傷治療的處方中使用頻率較高的藥材包括紫草、當(dāng)歸、黃柏、白芷和冰片等。因此本研究結(jié)合多個(gè)經(jīng)典方劑，并在古方劑的基礎(chǔ)上加減配伍與用量，擬定了紫草復(fù)方（紫草∶當(dāng)歸∶黃柏∶白芷∶冰片=5∶4∶2∶2∶0.5）。方中紫草[5]涼血熱、生新血，解毒生肌，對(duì)燒傷創(chuàng)面有積極作用，為君藥；當(dāng)歸[6]為“血中圣藥”，長(zhǎng)期用于滋補(bǔ)氣血，同時(shí)能促進(jìn)新鮮肉芽組織生長(zhǎng)，為臣藥；黃柏[7]、白芷[8]抗菌燥濕、消腫止痛，為佐藥，冰片[9]清熱止痛，同時(shí)增加皮膚滲透作用，為使藥。該組方能參與創(chuàng)傷修復(fù)的全過(guò)程，既可緩解早期臨床癥狀體征，又可促進(jìn)創(chuàng)面早日愈合。

溫敏凝膠[10-12]（hermosensitive gels）是一類在室溫下的為聚合低黏度水溶液狀態(tài)，但隨著環(huán)境溫度的升高（如達(dá)到生理溫度）可發(fā)生溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變的一種新型給藥劑型，目前溫敏凝膠在人類多種疾病治療方面已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。泊洛沙姆[13-14]（Poloxamer）是聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷-聚環(huán)氧乙烷（PEO-PPO-PEO）形式的三嵌段共聚物。中心PPO嵌段是疏水的，而側(cè)PEO嵌段是親水的，從而產(chǎn)生表面活性性質(zhì)，因具有精細(xì)可調(diào)的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度而表現(xiàn)出良好的熱凝膠性?；诓绰迳衬返亩喾N產(chǎn)品已經(jīng)進(jìn)入藥物市場(chǎng)，但仍是進(jìn)一步研究和商業(yè)開發(fā)的潛在領(lǐng)域，目前P407和P188是兩種最常用的溫敏材料[15]，多將其配合進(jìn)行使用。

本研究采用現(xiàn)代制藥技術(shù)，將療效確切的紫草復(fù)方與溫敏凝膠相結(jié)合，制成一種溫度敏感型外用凝膠制劑，在篩選出最佳處方后對(duì)所制得凝膠的各種體外參數(shù)進(jìn)行了表征，例如：紫草素含量、性狀、pH值、黏度、膠凝溫度、膠凝時(shí)間、穩(wěn)定性試驗(yàn)、保濕率和微生物限度等，旨在為各種創(chuàng)傷的愈合提供更好的新選擇。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

ESJ200-4A分析天平（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；B-220恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠）；pH酸度計(jì)（重慶塞恩斯儀器有限公司）；NDJ-5S黏度計(jì)（上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司）；UV-1102紫外可見分光光度計(jì)（中國(guó)天美科學(xué)儀器有限公司）；GTOP-1588恒溫培養(yǎng)箱（浙江拓普儀器有限公司）；DT-131電子溫度計(jì)。新疆紫草（Arnebiaeuchroma（Royle）Johnst）、當(dāng)歸（Angelicasinensis（Oliv.）Diels）、黃柏（Phellodendri Chinensis Cortex）、白芷（Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.）、冰片（成都市藥材公司）。泊洛沙姆407（P407，德國(guó)BASF公司）、泊洛沙姆 188（P188，德國(guó) BASF公司）；甘油（成都市科龍化工試劑廠）；紫草素對(duì)照品（成都曼斯特生物科技有限公司）；水為蒸餾水；其余試劑均為分析純。

1.2 藥液的制備

采用水煎法[16-17]，根據(jù)組方量（紫草∶當(dāng)歸∶黃柏∶白芷=5∶4∶2∶2）稱取藥材，總量為195 g，第一次加8倍水煎煮1 h，倒出水提液，再加6倍水煎煮1 h，合并兩次水提液，混合均勻，濃縮至195 mL，再往水提液中加入7.5 g冰片，備用。

1.3 溫敏凝膠制劑工藝研究

1.3.1 溫敏凝膠的制備

采用“冷法”[18-19]來(lái)制備基于泊洛沙姆的溫敏凝膠，準(zhǔn)確稱取處方量的P407和P188，加入適量蒸餾水，攪拌均勻，置于4℃冰箱內(nèi)24 h以上，直到P407和P188完全溶解，使其充分溶脹后得到澄清溶液，若凝膠中含有其他輔料，可根據(jù)其用量的多少在溫敏凝膠基質(zhì)加入前溶于蒸餾水中，再按上述步驟制備。

1.3.2 膠凝溫度的測(cè)定

采用傾斜法[20]，取5 mL左右凝膠于小西林瓶中，開啟水浴鍋使水浴持續(xù)緩慢升溫，每升高1℃恒溫10 min，每15 s傾斜一次西林瓶，傾斜角度約90℃，待凝膠不再流動(dòng)時(shí)插入電子溫度計(jì)（精確到0.1℃）記錄溫度計(jì)的讀數(shù)，即為膠凝溫度。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)量3次，取平均值。

本研究的復(fù)方紫草溫敏凝膠設(shè)計(jì)為皮膚創(chuàng)傷外用制劑，因此膠凝溫度應(yīng)高于環(huán)境溫度（室溫），低于皮膚溫度（33.5±0.5）℃，故將溫敏凝膠的最佳膠凝溫度設(shè)置為33℃[21]。

1.3.3 單因素實(shí)驗(yàn)

（1）P407含量對(duì)膠凝溫度的影響

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[22]P407濃度低于15%時(shí)失去膠凝能力。因此，本試驗(yàn)中，以P407的質(zhì)量與蒸餾水的質(zhì)量比（W/W）為考察因素，精密稱取P407，按1.3.1的方法配制5組質(zhì)量百分濃度分別為16%、18%、20%、22%和24%的P407溶液，按1.3.2的方法測(cè)定膠凝溫度。

（2）P188含量對(duì)膠凝溫度的影響

以P188的質(zhì)量與蒸餾水的質(zhì)量比（W/W）為考察因素，在1.3.3.1確定的P407含量（18%）的基礎(chǔ)上，精密稱取P188，按1.3.1的方法配制5組質(zhì)量百分濃度分別為2%、4%、6%、8%和10%的P188溶液，按1.3.2的方法測(cè)定膠凝溫度。

（3）甘油含量對(duì)膠凝溫度的影響

以甘油的質(zhì)量與蒸餾水的質(zhì)量比（W/W）為考察因素，在1.3.3.2確定的P188含量（2%）的基礎(chǔ)上，精密稱取甘油，按1.3.1的方法配制5組質(zhì)量百分濃度分別為4%、6%、8%、10%和12%的甘油溶液，按1.3.2節(jié)方法測(cè)定膠凝溫度。

1.3.4 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，綜合分析，選擇P407、P188和甘油作為3個(gè)考察因素，以膠凝溫度作為考察指標(biāo)，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，按L9（3）3設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，優(yōu)化制備工藝。

1.3.5 復(fù)方紫草藥液含量的篩選

以復(fù)方紫草藥液的質(zhì)量與蒸餾水的質(zhì)量比（W/W）為考察因素，根據(jù)1.3.4的結(jié)果，確定泊洛沙姆P407的含量（16%）、泊洛沙姆 P188的含量（2%）、甘油的含量（4%），精密稱取復(fù)方紫草藥液，按1.3.1的方法配制5組質(zhì)量百分濃度分別為4%、6%、8%、10%和12%的含藥凝膠溶液，按1.3.2節(jié)方法測(cè)定膠凝溫度。

1.3.6 復(fù)方紫草溫敏凝膠的優(yōu)化制備工藝

取蒸餾水60 g，加入精密稱取的P407計(jì)16 g，P188計(jì)2 g，溶散均勻后，加入甘油4 g，復(fù)方紫草藥液8 g，并補(bǔ)足蒸餾水至100 g，混合均勻，充分潤(rùn)濕，置于4℃冰箱過(guò)夜，充分溶脹，即得復(fù)方紫草溫敏凝膠。

1.4 復(fù)方紫草溫敏凝膠劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

1.4.1 紫草素含量

由于本研究制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠中，紫草為君藥，且紫草的有效成分為其萘醌類成分（羥基萘醌總色素），故參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020版一部[23]藥材與飲片中紫草的含量測(cè)定，照紫外-可見分光光度法（通則0401），以左旋紫草素（C16H16O5）計(jì)本研究制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠中萘醌類成分（羥基萘醌總色素）并對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。

（1）確定測(cè)定波長(zhǎng)

準(zhǔn)確稱取5 mg紫草素對(duì)照品，用乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，搖勻得濃度為50 mg/L的對(duì)照品溶液。在200～800 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)紫草對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取1.0 mL紫草素對(duì)照品溶液，置于10 mL容量瓶中，加入乙醇溶液定容并搖勻配制成濃度為5 mg/L的紫草素溶液，同法依次配制出濃度分別為10、15、20、25、30、35、40、45 和 50 mg/L 的紫草素溶液，置于1 cm石英吸收池中，以相同的乙醇溶液做空白，在波長(zhǎng)為513 nm處測(cè)定吸光度后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

（3）紫草素的含量的確定

精密稱定1.0 g復(fù)方紫草溫敏凝膠，加入精密稱量的乙醇10 mL，超聲溶解離心后制備供試品溶液[24]，在波長(zhǎng)為513 nm處測(cè)定其吸光度，將其吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中，即得復(fù)方紫草溫敏凝膠中紫草素含量。

1.4.2 性狀

取“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠適量分別在室溫條件下與33℃左右的皮膚表面觀察凝膠的性狀。

1.4.3 pH值

《中華人民共和國(guó)藥典》2020版四部[25]通則中規(guī)定，凝膠劑一般應(yīng)檢查其pH值，故按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020版四部附錄0631中的方法，取“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠20 mL置于燒杯中，使用4和7的酸堿度緩沖液校準(zhǔn)數(shù)字酸度計(jì)后將玻璃電極充分浸入制劑樣品中，然后用數(shù)字酸度計(jì)直接測(cè)定復(fù)方紫草溫敏凝膠的pH值，平行重復(fù)3次。

1.4.4 黏度

黏度是反映凝膠流變學(xué)性能的重要參數(shù)，因此采用NDJ-5S型旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)，按《中華人民共和國(guó)藥典》2020版四部附錄0633，參照旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)測(cè)定法[26-28]，利用與黏度計(jì)接觸的恒溫水浴調(diào)節(jié)樣品的溫度，測(cè)定不同溫度下“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠黏度（η），平行重復(fù)3次。

1.4.5 膠凝溫度

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠于西林瓶中，置于恒溫水浴鍋中緩慢升溫，升溫速度為1℃/min，每15 s傾斜一次西林瓶，傾斜角度約90°，待凝膠不再流動(dòng)時(shí)用電子溫度計(jì)測(cè)定凝膠的溫度，溫度計(jì)的讀數(shù)即為膠凝溫度。平行重復(fù)3次。

1.4.6 膠凝時(shí)間

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠于西林瓶中，放置在33℃下的恒溫水浴鍋中內(nèi)，每15 s傾斜一次西林瓶，傾斜角度約90℃，記錄西林瓶中的液體不再流動(dòng)時(shí)的時(shí)間即為凝膠化時(shí)間。平行重復(fù)3次。

1.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

（1）離心試驗(yàn)

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠于離心管中，觀察2 000 r/min離心20 min后凝膠的外觀形態(tài)變化。平行重復(fù)3次。

（2）低溫試驗(yàn)

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠于帶塞西林瓶中，放入4℃冰箱內(nèi)，分別在0、15和30 d取樣。分別從凝膠的外觀性狀、pH值和膠凝溫度等方面考察其制劑的穩(wěn)定性。

（3）高溫試驗(yàn)

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠于帶塞西林瓶中，放入60℃恒溫干燥箱內(nèi)，分別在0、15和30 d取樣。分別從凝膠的外觀性狀、pH值和膠凝溫度等方面考察其制劑的穩(wěn)定性。

1.4.8 保濕率

取適量“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠，均勻涂布于載玻片上，精密稱量復(fù)方紫草溫敏凝膠在干燥前的質(zhì)量(m1）后，將該玻片置于33°C的恒溫密封干燥器中，放置24 h后取出，精密稱定復(fù)方紫草溫敏凝膠干燥至恒定的質(zhì)量(m2），根據(jù)公式：保濕率=m1/m2，計(jì)算其保濕率。平行重復(fù)3次。

1.4.9 微生物限度

《中華人民共和國(guó)藥典》2020版四部通則中規(guī)定，凝膠劑一般應(yīng)照非無(wú)菌產(chǎn)品檢查其微生物限度，依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》中的微生物計(jì)數(shù)法(通則1105）、控制菌檢查法(通則 1106）和非無(wú)菌藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107）對(duì)“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠進(jìn)行檢查。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用IBM SPSS Statistics 23.0和Graph Pad Prism8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和圖形繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 P407含量對(duì)膠凝溫度的影響

P407含量對(duì)膠凝溫度的影響結(jié)果見圖1a。根據(jù)圖1a可知，膠凝溫度隨P407含量的增加而降低。這可能是與P407在水中的膠凝機(jī)制有關(guān)[29]。P407的水溶液顯示出熱可逆性質(zhì)，其特征是存在溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度，當(dāng)?shù)陀诖藴囟葧r(shí)，P407呈現(xiàn)液體狀態(tài)，但當(dāng)高于此溫度時(shí)，P407由溶液狀態(tài)變?yōu)榘牍腆w的凝膠狀態(tài)。這種熱凝膠化是共聚物不同鏈段之間相互作用的結(jié)果，隨著溫度的升高，由于疏水PPO嵌段的脫水，P407共聚物分子聚集成膠束，這些膠束是球形的，有脫水的聚氧乙烯核與水合膨脹的聚氧乙烯鏈外殼，對(duì)于足夠濃縮的樣品，這種膠束化之后便是凝膠化，這種凝膠化歸因于膠束的有序堆積。

圖1 P407(a)、P188(b)、甘油(c)以及復(fù)方紫草藥液(d)含量對(duì)膠凝溫度的影響Figure 1 P407(a)，P188(b)，glycerin(c)，compound purple grass solution(d)on gelation temperature

根據(jù)P407含量對(duì)膠凝溫度影響的試驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際需要，選擇更接近人體皮膚溫度的3個(gè)P407含量（16%、18%和20%）作為正交試驗(yàn)因素水平，同時(shí)選擇目前最優(yōu)的P407含量（18%）作為P188含量對(duì)膠凝溫度影響試驗(yàn)的研究基礎(chǔ)。

2.1.2 P188含量對(duì)膠凝溫度的影響

P188含量對(duì)膠凝溫度的影響結(jié)果見圖1b。根據(jù)圖1b可知，在確定含量的P407（18%）條件下，膠凝溫度隨P188含量的增加而升高。在P407中加入適量的P188后，其膠凝溫度發(fā)生改變，其原因可能是P188的親水性PEO嵌段/疏水性PPO嵌段的比為8∶2，親水基團(tuán)比例相對(duì)增加，疏水基團(tuán)比例相對(duì)減少，從而提高了整個(gè)凝膠體系的膠凝溫度[30]。

根據(jù)P188含量對(duì)膠凝溫度影響的試驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際需要，選擇更接近人體皮膚溫度的3個(gè)P188含量（2%、4%、6%）作為正交試驗(yàn)因素水平，同時(shí)選擇目前最優(yōu)的P188含量（2%）作為甘油含量對(duì)膠凝溫度影響試驗(yàn)的研究基礎(chǔ)。

2.1.3 甘油含量對(duì)膠凝溫度的影響

甘油含量對(duì)膠凝溫度的影響結(jié)果見圖1c。根據(jù)圖1c可知，在確定含量的P407（18%）和P188（2%）條件下，膠凝溫度隨甘油含量的增加而略微降低。

根據(jù)甘油含量對(duì)膠凝溫度影響的試驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際需要，選擇更接近人體皮膚溫度的3個(gè)甘油含量（4%、6%、8%）作為正交試驗(yàn)因素水平。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)的因素水平見表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 Level of factors for orthogonal test

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±SD，n=3）Table 2 Orthogonal test results（±SD，n=3）

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±SD，n=3）Table 2 Orthogonal test results（±SD，n=3）

試驗(yàn)號(hào)Test number Gelation temperature/℃P407/% P188/% 甘油/%因素Factor 膠凝溫度1 16 2 4 32.07±0.12 2 16 4 6 33.50±0.10 3 16 6 8 34.23±0.12 4 18 2 6 30.33±0.15 5 18 4 8 31.67±0.15 6 18 6 4 33.30±0.10 7 20 2 8 29.87±0.06 8 20 4 4 30.47±0.06 9 20 6 6 31.73±0.15

表3 方差分析Table 3 Analysis of variance

本試驗(yàn)期望該制劑能在高于環(huán)境溫度（室溫），且低于皮膚溫度（33.5±0.5）℃時(shí)由原來(lái)的可流動(dòng)的溶液變成半固體凝膠，因此該凝膠的最適膠凝溫度應(yīng)不大于（33.5±0.5）℃（即≤33℃），且越接近33℃越適宜，因此根據(jù)表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果直觀分析可知，凝膠最佳配比的組合為A1B1C1，即：16%P407+2%P188+4%甘油。根據(jù)表3方差分析可知，3個(gè)因素對(duì)膠凝溫度的影響大小為：P407含量>P188含量>甘油含量，P407含量對(duì)膠凝溫度的影響最大，P188和甘油對(duì)膠凝溫度起調(diào)節(jié)作用。

2.3 復(fù)方紫草藥液含量的篩選結(jié)果

復(fù)方紫草藥液含量的篩選結(jié)果見圖1d。根據(jù)圖1d可知，隨著復(fù)方紫草藥液含量的增加，膠凝溫度不斷上升，綜合考慮藥物用量對(duì)膠凝溫度的影響及成品外觀，選擇加藥量為8%。

2.4 復(fù)方紫草溫敏凝膠劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4.1 紫草素含量

在200～800 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)紫草對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，最終結(jié)果顯示，紫草素在（513±1）nm的波長(zhǎng)處有最大吸收峰。以乙醇溶液做空白，在波長(zhǎng)為513 nm處測(cè)定不同濃度紫草素對(duì)照品溶液的吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=0.107 2C+0.008 1（r2=0.999 4，n=10），結(jié)果表明紫草素濃度（C）與吸光度（A）的線性關(guān)系良好（圖2）。將復(fù)方紫草溫敏凝膠的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中，即得復(fù)方紫草溫敏凝膠中紫草素濃度為116.595 mg/L。

圖2 紫草素標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2 The standard curve of shikonin

2.4.2 性狀

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠在室溫條件下為棕綠色均勻的凝膠溶液，涂抹于33℃左右的皮膚表面，結(jié)果轉(zhuǎn)變?yōu)樽鼐G色半固體凝膠。

2.4.3 pH值

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠的pH值為4.80±0.5，適合涂抹于皮膚表面。

2.4.4 黏度

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠黏度測(cè)量結(jié)果見表4。結(jié)果表明復(fù)方紫草溫敏凝膠在室溫下黏度較低，具有良好的流動(dòng)性，經(jīng)過(guò)升溫，在模擬皮膚表面溫度33℃下發(fā)生變，形成黏度較大的半固體凝膠狀態(tài)。

表4 不同溫度下凝膠的黏度Table 4 Viscosity of gels at different temperatures

2.4.5 膠凝溫度

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠的膠凝溫度為（32.8±0.3）℃，當(dāng)涂抹于皮膚表面能較好黏附于皮膚表面，膠凝溫度良好。

2.4.6 膠凝時(shí)間

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠的膠凝時(shí)間為（45±4）s，當(dāng)涂抹于皮膚表面能較好黏附于皮膚表面，膠凝時(shí)間良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

（1）離心試驗(yàn)

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠經(jīng)離心試驗(yàn)后結(jié)果顯示凝膠仍保持均勻澄清，均未出現(xiàn)分層現(xiàn)象。

（2）低溫試驗(yàn)

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠低溫試驗(yàn)結(jié)果見表5。結(jié)果表明，復(fù)方紫草溫敏凝膠在低溫條件下較為穩(wěn)定，可長(zhǎng)期貯存。

表5 低溫試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Low temperature test results

（3）高溫試驗(yàn)

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠高溫試驗(yàn)結(jié)果見表6。結(jié)果表明，復(fù)方紫草溫敏凝膠在高溫條件下各方面均出現(xiàn)一定的變化，不可長(zhǎng)期貯存。

表6 高溫試驗(yàn)結(jié)果Table 6 High temperature test results

2.4.8 保濕率

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠的保濕率為（96.74±0.71）%，表明其保濕性良好，有利于在皮膚上涂展。

2.4.9 微生物限度

“1.3.6”項(xiàng)制備的復(fù)方紫草溫敏凝膠的微生物限度結(jié)果見表7，結(jié)果符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

表7 微生物限度的檢測(cè)結(jié)果Table 7 Detection of microbial limits

3 討論

近年來(lái)，在國(guó)內(nèi)外學(xué)者的共同努力下，創(chuàng)傷修復(fù)的研究已經(jīng)取得了重大進(jìn)展，但目前的創(chuàng)傷治療劑型仍以噴劑、膏劑、酊劑和粉劑為主。其中，噴劑給藥量小，故需多次使用，十分麻煩，同時(shí)生產(chǎn)容器時(shí)成本較高；膏劑的吸收效果不好，經(jīng)常要使用透皮吸收促進(jìn)劑，且常因透氣性不好加速感染；酊劑很容易揮發(fā)，必須反復(fù)涂抹，且其含有大量酒精易刺激新生皮膚，增加患者痛苦并易留下瘢痕，治療效果不甚理想。而溫敏凝膠可以很好解決上述問(wèn)題，該制劑在常溫狀態(tài)下為自由流動(dòng)的液體狀態(tài)，當(dāng)接觸到溫度的升高時(shí)，會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍腆w狀態(tài)凝膠，對(duì)創(chuàng)面具有保護(hù)作用，使用方便，不對(duì)創(chuàng)面產(chǎn)生刺激，同時(shí)具有延緩藥物釋放，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，提高生物利用度。因此本研究利用復(fù)方紫草的改善局部創(chuàng)面組織的血液循環(huán)、抗炎、抗菌、加快肉芽組織生成和細(xì)胞趨化因子表達(dá)等功效，促進(jìn)創(chuàng)口愈合，同時(shí)結(jié)合溫敏進(jìn)行質(zhì)量凝膠的緩釋及傷口保護(hù)作用，“強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合”制成一種治療創(chuàng)傷的外用制劑。

在大多數(shù)報(bào)道的基于泊洛沙姆的研究中在原位凝膠，P407單獨(dú)用作膠凝劑，這導(dǎo)致了兩個(gè)主要缺點(diǎn)：首先，P407適合使用的濃度范圍非常窄，大約為16%～20%（W/W）。當(dāng)濃度小于15%（W/W）時(shí)，無(wú)論溫度如何，制劑都不能形成凝膠。如果高于20%（W/W），臨界溫度將低于20℃，給使用和儲(chǔ)存帶來(lái)不便；第二，由于凝膠的稠度較低且抗稀釋性較差，對(duì)藥物從形成的凝膠中釋放的控制有時(shí)不夠充分，這意味著凝膠的強(qiáng)度隨著體液的滲透而急劇下降。因此，配方的相變溫度可以通過(guò)簡(jiǎn)單地添加另一種泊洛沙姆（P188）來(lái)調(diào)節(jié)，P188具有比P407更高的PEO與PPO嵌段比，在研究中與P407結(jié)合使用，可以上調(diào)制劑的相變溫度，從而提高P407的使用上限，同時(shí)解決由于單一種類的泊洛沙姆形成的膠束有很多問(wèn)題，例如膠凝溫度不理想、載藥量低和凝膠溶液不穩(wěn)定等。

根據(jù)本研究的單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，處方中P407和P188含量對(duì)復(fù)方紫草溫敏凝膠的凝膠化溫度具有顯著影響，凝膠化溫度隨P407含量的增加而降低；在P407含量一定時(shí)，凝膠化溫度隨著P188含量的增加而升高，凝膠化溫度隨甘油和復(fù)方紫草藥液含量的變化改變不大。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)行處方優(yōu)化，制備得到一款復(fù)方紫草溫敏凝膠，其最優(yōu)處方為：16%P407+2%P188+4%丙三醇+8%復(fù)方紫草藥液，其凝膠化溫度為（32.8±0.3）℃。制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)顯示：復(fù)方紫草溫敏凝膠的紫草素含量、狀、pH值、黏度、膠凝溫度、膠凝時(shí)間、穩(wěn)定性試驗(yàn)、保濕率和微生物限度等各方面性質(zhì)較為穩(wěn)定。